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DOI: 10.3791/51078-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Wir beschreiben ein Protokoll, um die antivirale Zytokin-Produktion in Mäusen mit einem Modell-Herpesvirus, murinen Gammaherpesvirus-68 (γ HV68) infiziert, die für die menschliche Kaposi-Sarkom-assoziierten Herpesvirus (KSHV) und Epstein-Barr-Virus (EBV) eng verwandt ist, zu messen. Mit Hilfe genetisch veränderter Mausstämme und embryonalen Maus-Fibroblasten (MEF), untersuchten wir die antivirale Zytokin-Produktion in vivo und ex vivo. "Reconstituting" den Ausdruck der angeborenen Immunkomponenten in Knockout embryonale Fibroblasten von lentiviralen Transduktion, weiter wir spezifische angeborene Immunmoleküle erkennen und sezieren die wichtigsten Signalwege, die unterschiedlich regeln die antivirale Zytokin-Produktion.
Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, wichtige Moleküle des angeborenen Immunsystems des Wirts zu entschlüsseln, die die Produktion von antiviralen Zytokinen bei der Injektion des Gamma-Herpesvirus 68 oder des Gamma-HV 68 regulieren. Dies wird durch den Vergleich von antiviralen Zytokinen erreicht, die von gamma HV 68-injizierten Mavs-Wildtyp- und Knockout-Mäusen sezerniert werden. Der zweite Schritt besteht darin, die Zytokine zu quantifizieren, die von Mavs-Wildtyp- und Mavs-Knockout-MEF-Zellen nach einer Gamma-HV-68-Infektion produziert werden, was bestätigt, dass Mavs zur Unterdrückung der antiviralen Zytokinsekretion eingesetzt wird.
Der nächste Schritt besteht darin, Mavs und Mavs-Knockout-MEF-Zellen wiederherzustellen, um zu beurteilen, ob die Zytokinexpressionsniveaus durch exogene Mavs gerettet werden. Es wurden Ergebnisse erzielt, die zeigen, dass Gamma HV 68 Mavs entführt, eine wichtige angeborene Immunsignalkomponente, um die Produktion von antiviralen Zytokinen in vivo und ex vivo aufzuheben, basierend auf Western-Blotting-Analysen. Eliza und Q-R-T-P-C-R in Mavs Wildtyp- und Knockout-Mäusen und entsprechenden MEF-Zellen.
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