JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 4:28 Min. • April 28th, 2025
Platzieren Sie ein Hirnschnitt einer Maus in einer Perfusionskammer, die aCSF enthält, unter einem Zwei-Photonen-Mikroskop.
Die Maus ist gentechnisch so verändert, dass sie GFP in Mikroglia exprimiert und so die Verfolgung von Mikroglia-Bewegungen ermöglicht.
Sichern Sie die Scheibe mit einer Halterung.
Lokalisieren Sie mithilfe der Hellfeldbeleuchtung den interessierenden Bereich.
Schalten Sie auf Fluoreszenzbeleuchtung um, um die Mikroglia sichtbar zu machen.
Füllen Sie eine Mikropipette mit der Testmasse, montieren Sie sie auf einen Spritzenhalter und senken Sie sie ab, um die Scheibe zu berühren.
Aktivieren Sie den Zwei-Photonen-Bildgebungsmodus, der niederenergetisches Nahinfrarotlicht in das Gewebe fokussiert.
Im Brennpunkt des Lasers bündeln zwei Photonen ihre Energie, um GFP anzuregen und dabei Fluoreszenz zu emittieren.
Nehmen Sie Bilder in mehreren Z-Ebenen auf, um sich auf die Mikrogliaprozesse zu konzentrieren.
Zeichnen Sie die Grundaktivität auf, injizieren Sie dann die Verbindung und setzen Sie die Aufzeichnung fort.
Die Substanz bindet an Mikrogliarezeptoren und löst Signalwege aus, die die Ausdehnung des Mikrogliaprozesses in Richtung der Verbindungsquelle vorantreiben.
Überw
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