Bildgebung von Polysomen, die aus einem Mausgehirn isoliert wurden, mittels Rasterkraftmikroskopie

Beginnen Sie mit einem Glimmerblatt mit anhaftenden Polysomen, die aus Hirngewebe von Mäusen isoliert wurden.

Ein Polysom ist ein Komplex aus mehreren Ribosomen, die an einen RNA-Strang gebunden sind.

Befestigen Sie das Glimmerblatt mit Klebeband am Probenhalter.

Setzen Sie den Probenhalter in den Rasterkraftmikroskoptisch ein.

Positionieren Sie den vormontierten Ausleger. Richten Sie den Laser und den Detektor aus, um eine genaue Signalerkennung während der Bildgebung zu gewährleisten.

Passen Sie die Schwingungsfrequenz des Cantilevers an, um die Erkennung von Oberflächenmerkmalen zu optimieren und gleichzeitig die Probenintegrität zu erhalten.

Beginnen Sie die Bildgebung, indem Sie die Cantilever-Spitze über die Probenoberfläche oszillieren.

Wenn die Spitze auf eine erhöhte Oberfläche des Polysoms trifft, wird der Laser abgelenkt.

Diese Ablenkungen des Lasers werden vom Detektor erfasst, der ein Bild mit nanoskaliger Auflösung erzeugt.

Verwenden Sie eine geeignete Software, um beliebige Neigungs- und Drifteffekte zu korrigieren und so die Visualisierung des Polysoms zu ermöglichen.

Befestigen Sie die vorbereitete Probe mit doppelseitigem Klebeband am Probenhalter des AFM. Setzen Sie dann den Probenhalter gemäß den Anweisungen des Herstellers in den AFM-Tisch ein. Nähern Sie sich nach der Kalibrierung der Probe, bis die Cantilever-Spitze in die Oberfläche eingreift.

Wählen Sie einen Scanbereich von 2 x 2 Mikrometern mit einer Auflösung von mindestens 512 x 512 Pixeln. Wählen Sie den Subtraktionsmodus für den Live-Hintergrund und wählen Sie eine Z-Skala von 20 bis 25 Nanometern. Beginnen Sie dann mit der Bildaufnahme. Untersuchen Sie das Bild und suchen Sie bei der Aufnahme von Bildern in der Luft nach runden Objekten, die durch eine Höhe zwischen 10 und 15 Nanometern gekennzeichnet sind.

Passen Sie als Nächstes die Sollwert- und Feedback-Parameter an, bis scharfe Objekte visualisiert werden. Bei guten Proben mit einigen 2 bis 4 Nanometer hohen Objekten sollte der Hintergrund relativ flach erscheinen. Sobald das Bild gut aussieht, nehmen Sie mehrere 2 x 2 Mikrometer große Scans in verschiedenen Probenbereichen auf.