JoVE-Enzyklopädie der Experimente
Neurowissenschaften
0 Aufrufe • 2:39 Min. • June 17th, 2025
Nehmen Sie ein Deckglas mit genetisch veränderten Primärneuronen in eine Bildgebungskammer, die mit einem Bildgebungspuffer gefüllt ist.
Diese Zellen exprimieren einen fluoreszierenden Protein-basierten Redoxindikator in der mitochondrialen Matrix.
Positionieren Sie die Kammer unter einem Fluoreszenzmikroskop, identifizieren Sie die Zellen unter sichtbarem Licht und wechseln Sie dann zur Fluoreszenzbildgebung.
Wenden Sie zwei Anregungswellenlängen an, um den Indikator zu stimulieren und die Fluoreszenzemission zu messen.
Das Fluoreszenzintensitätsverhältnis bei diesen Wellenlängen spiegelt die mitochondriale Oxidationsstufe wider.
Führen Sie NMDA ein, um zelluläre NMDA-Rezeptoren zu aktivieren, was zu einem intrazellulären Kalziumeinstrom führt.
Der Anstieg löst die mitochondriale Kalziumaufnahme aus, induziert die ROS-Produktion und die mitochondriale
Oxidation.
Der ROS oxidiert den Indikator, verändert seine Fluoreszenz und erhöht das Signalverhältnis.
Führen Sie Oxidationsmittel ein, um den Indikator vollständig zu oxidieren und das Signalverhältnis zu maximieren.
Entfernen Sie den Puffer und führen Sie dann Reduktionsmittel ein, um den Farbstoff vollständig zu reduzieren und das Signalve
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