Name: Klinische Tests und Rückenmark Removal in einem Mausmodell für Amyotrophe Lateralsklerose (ALS) (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-17T14:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 35 s
Description: Lernen Sie klinische Tests und Rückenmarkpräparation im SOD1-G93A-Mausmodell für ALS. Diese Methode ermöglicht Verhaltensanalysen und immunhistologische Untersuchungen zur Erforschung neurodegenerativer Erkrankungen.

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LT hat Zuschüsse aus dem Forschungsförderungsprogramm der Universitätsmedizin Göttingen erhalten. PL und MB wurden von der DFG-Forschungszentrum für Molekulare Physiologie des Gehirns (CMPB), Göttingen unterstützt. Die Autoren danken Dr. Lars Tatenhorst um Unterstützung bei der Videografie und Birgit Liebau für die Hilfe bei Audio-und Videobearbeitung.

Die Tiere wurden vom Jackson Laboratory (# 002726) 1 gekauft. Sie sind klinisch erzielte und einer Prüfung der motorischen Funktion (Rotarod Test) und der Muskelkraft (hängende Draht-Test). Alle diese Tests und die spätere Tötung der Tiere, um das Rückenmark vorbereitet haben in sehr enger Übereinstimmung mit den örtlichen Richtlinien für die ordnungsgemäße Durchführung von Tierversuchen durchgeführt worden. 1. Clinical Score Neben der Beurteilung des Körpergewichts Mäuse auf Anzeichen von motorischen Defizit mit dem folgenden 4-Punkt-Scoring-System 2 untersucht: 4 Punkte: normal (keine Anzeichen für motorische Störungen) 3 Punkte: Hinterbein Zittern sind offensichtlich, wenn am Schwanz aufgehängt 2 Punkte: Gangstörungen vorhanden sind 1 Punkt: Ziehen von mindestens einem Hinterbein 0 Punkte: symmetrischLähmung, die Unfähigkeit, sich nach rechts oder Verlust von 20% der maximalen Körpergewicht, in diesem Fall werden die Tiere getötet und sofort das Experiment beendet 2. Tests der motorischen Funktion und Muskelkraft Draht hängen Dieser Test wird verwendet, um die Muskelkraft 3, 4 zu bewerten. Alle Tiere diesen Test mindestens ein oder zwei Tage nach dem Rotarod-Test. Jede Maus auf einem maßgeschneiderten Drahtdeckel mit Abständen von 0,8 cm gelegt und vorsichtig auf den Kopf gestellt, abgedeckt 60 cm über einem Strohhalm unten. Nach der Ausbildung in drei aufeinander folgenden Mal von mindestens 180 s die Latenz zu fallen, wird gemessen. Jede Maus wird bis zu drei Versuche zu halten, um den Deckel umgekehrt für maximal 180 s und die längste Periode aufgezeichnet wird. Rotarod-Test 3, 4 zu messen. Eine gute Leistung erfordert ein hohes Maß an sensomotorische Koordination. Die Maschine sollte in einem ruhigen und nicht störende Umwelt auf ablenkende Reize für das Tier zu vermeiden getestet platziert werden. Es besteht aus einer computergesteuerten motorisch drehbaren Spindel und fünf Spuren für fünf Mäusen. Fälle der Mäuse werden automatisch durch Druck auf eine Kunststoffplatte am Boden erkannt wird. Nach der Ausbildung in drei aufeinander folgenden Mal von mindestens 180 s bei einer konstanten Geschwindigkeit von 15 UpM die Zeit, für die ein Tier auf der Drehstange bleiben kann gemessen wird. Jedes Tier durchläuft drei Versuche und die längste Wartezeit, ohne zu fallen wird aufgezeichnet. Die Zeit von 180 s wird als Cut-Off-Zeit gewählt, weil die Mehrheit der signifikanten Unterschiede in der motorischen Koordination in diesem Zeitrahmen erkannt werden. 3. Spinal Cord Vorbereitung <ol class="lalpha"><li> Die Tiere werden durch CO 2-Insufflation in Übereinstimmung mit den lokalen Richtlinien getötet und werden sofort transkardial mit PBS-Lösung mit einem 4% Paraformaldehyd-Lösung, gefolgt perfundiert. </li><li> Um das Rückenmark der Maus geopfert herzustellen, wird das Tier auf einem Operationstisch angeordnet und die vier Glieder auf der Seite befestigt ist, um die Rückseite der Maus freizulegen. </li><li> Ein kurzer Waschgang mit einer 70% igen Ethanol-Lösung reinigt die Stelle der Dissektion und flacht das Fell. </li><li> Dann wird die Haut mit einem scharfen Skalpell in der Mittellinie eingeschnitten. Zur Erleichterung Schneiden der Haut auf beiden Seiten gestreckt wird. Falls Beinmuskeln müssen vorbereitet werden, hat sich ihre Haut auch eingeschnitten werden. </li><li> Nach dem Hautschnitt abgeschlossen ist, wird es zur Seite mit einer Pinzette, um die zugrunde liegende oberflächliche Faszie des Körpers aussetzen gezogen. </li><li> Die Muskulatur des Halses und des Lig. nuchae müssen entfernt werden und sind ca.refully vorbereitet. Achten Sie darauf, um tief und Läsion des Rückenmarks einzuschneiden. Die Schultermuskulatur kann auch entfernt werden, um besser entlarven die Wirbelsäule werden. </li><li> Dann werden die paravertebralen Muskeln werden aus der gesamten Wirbelsäule entfernt. </li><li> Zum Öffnen der Wirbelsäule mehrere Laminektomien müssen durchgeführt werden. Man sollte aus dem oberen Teil Schädelknochen an der Stelle der Gelenkverbindung Atlas-Hinterhauptbein starten. </li><li> Am einfachsten ist es, die Fixierung der oberen zwei Gliedmaßen zu entfernen und überfordern den Hals, um besser in der Lage, um die Laminektomie des ersten Wirbel durchzuführen. Diese werden entfernt, ohne den freiliegenden zervikalen Rückenmarks gezogen. </li><li> Mehr Wirbeln durch erste Durchschneiden der Wirbelbögen an beiden Seiten mit abgewinkelten Scheren und dann Ziehen an den Dornfortsätzen entfernt. Verbleibende seitlichen Teile der Wirbel zu entfernen, um später eine vollständige Entfernung des Rückenmarks zu erleichtern. </li><li> Einen anatomischen Stützpunkt der Lenden-spinal Kabel ist die Anschwellung, die auch in der zervikalen Rückenmarks. </li><li> Nach Abschluss der Laminektomie des gesamten Rückenmarks, stellen Sie sicher, dass Sie auch durchschneiden alle ventralen Wurzeln und lassen das Rückenmark von der Dura mater der Hirnhäute. </li><li> Dann wird der zervikalen Rückenmarks nach kranial und schneiden Sie beginnen, um das Rückenmark zu entfernen. </li><li> Schließlich das Rückenmark auch am distalen Cauda-equina geschnitten, um vollständig freigegeben. </li><li> Letztlich wird das Rückenmark in einen postfixating Lösung (z. B. 4% Paraformaldehyd) über Nacht gelegt und kann weiter verarbeitet werden. Wir in der Regel Gefrier das Rückenmark, um es für immunhistologische Analyse vorzubereiten. </li></ol> 4. Repräsentative Ergebnisse Die Technik des Rückenmarks Vorbereitung stellt den Schwerpunkt dieses Video Artikel. Es ist eine wesentliche Voraussetzung für den späteren Gewebe-Schnitte und letztlich für immunhistologische Analyse der Spinal Kabel Abschnitten. Als Beispiel für ein Endergebnis, eine immunhistochemische Aufarbeitung des Vorderhorn Bereich des Maus Lendenrückenmark einer Wildtyp (wt) und einer SOD G93A Transgen (tg) der Maus nachgewiesen wird. Motorneuronen mit einem primären Anti-ChAT-Antikörper und nachfolgender fluoreszierende Kennzeichnung mit einem sekundären Cy3-Antikörper identifiziert werden. Darüber hinaus hat eine nukleare Gegenfärbung mit DAPI (4,6-Diamino-2-phenylindol) durchgeführt (Abb. 1). <img src="/files/ftp_upload/3936/3936fig1.jpg" alt="1" /> Abbildung 1. Fluorescent Mikrofotografien Visualisierung der Immundetektion von Motoneuronen mit Anti-ChAT-Antikörper (rot) und Zellkernen Gegenfärbung mit DAPI (blau) in der Maus Lendenrückenmark Vorderhorn eines Wildtyp (wt) (links) und der ein SOD G93A transgenen (tg) (rechts) Maus im Alter von 130 Tagen. Maßstab: 40 um. Wie die immunhistochemische Analysedie SOD G93A Mäusen ist nicht das primäre Anwendungsbereich dieses Artikels entnehmen Sie bitte der Original-Publikation, in denen diese transgenen Mäuse charakterisiert worden sind und neuere therapeutische Ansätze, die studieren für weitere Referenz 1, 5, 6. Wenn therapeutische Wirkungen auf den immunhistologischen Ebene klar definiert sind differenziert werden quantitative Auswertung Algorithmen sollte von einem stereologische Software (siehe zum Beispiel 7) aufgebracht unterstützt werden.

<ol><li>Gurney, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Motor+neuron+degeneration+in+mice+that+express+a+human+Cu%2C+Zn+superoxide+dismutase+mutation%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Motor neuron degeneration in mice that express a human Cu, Zn superoxide dismutase mutation.</a> Science. 264 (5166), 1772-1775 (1994).</li>
<li>Weydt, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessing+disease+onset+and+progression+in+the+SOD1+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroreport%22%5BJournal%5D)">Assessing disease onset and progression in the SOD1 mouse model of ALS.</a> Neuroreport. 14 (7), 1051-1054 (2003).</li>
<li>Crawley, J. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Behavioral+phenotyping+strategies+for+mutant+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">Behavioral phenotyping strategies for mutant mice.</a> Neuron. 57 (6), 809-818 (2008).</li>
<li>Miana-Mena, F. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimal+methods+to+characterize+the+G93A+mouse+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph.+Lateral+Scler.+Other+Motor+Neuron+Disord%22%5BJournal%5D)">Optimal methods to characterize the G93A mouse model of ALS.</a> Amyotroph. Lateral Scler. Other Motor Neuron Disord. 6 (1), 55-62 (2005).</li>
<li>Zhong, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activated+protein+C+therapy+slows+ALS-like+disease+in+mice+by+transcriptionally+inhibiting+SOD1+in+motor+neurons+and+microglia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Activated protein C therapy slows ALS-like disease in mice by transcriptionally inhibiting SOD1 in motor neurons and microglia cells.</a> J. Clin. Invest. 119 (11), 3437-3449 (2009).</li>
<li>Pitzer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Granulocyte-colony+stimulating+factor+improves+outcome+in+a+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Brain%22%5BJournal%5D)">Granulocyte-colony stimulating factor improves outcome in a mouse model of amyotrophic lateral sclerosis.</a> Brain. 131 (Pt. 12), 3335-3347 (2008).</li>
<li>Gowing, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ablation+of+proliferating+microglia+does+not+affect+motor+neuron+degeneration+in+amyotrophic+lateral+sclerosis+caused+by+mutant+superoxide+dismutase%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Ablation of proliferating microglia does not affect motor neuron degeneration in amyotrophic lateral sclerosis caused by mutant superoxide dismutase.</a> J. Neurosci. 28 (41), 10234-10244 (2008).</li>
<li>Scott, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((interpretation+of+studies+in+the+standard+murine+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">interpretation of studies in the standard murine model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 9 (1), 4-15 (2008).</li>
<li>Turner, B. J., Talbot, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transgenics%2C+toxicity+and+therapeutics+in+rodent+models+of+mutant+SOD1-mediated+familial+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Prog+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">Transgenics, toxicity and therapeutics in rodent models of mutant SOD1-mediated familial ALS.</a> Prog Neurobiol. 85 (1), 94-134 (2008).</li>
<li>Corse, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preclinical+testing+of+neuroprotective+neurotrophic+factors+in+a+model+of+chronic+motor+neuron+degeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Preclinical testing of neuroprotective neurotrophic factors in a model of chronic motor neuron degeneration.</a> Neurobiol Dis. 6 (5), 335-346 (1999).</li>
<li>Knippenberg, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Significance+of+behavioural+tests+in+a+transgenic+mouse+model+of+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Behav+Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Significance of behavioural tests in a transgenic mouse model of amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Behav Brain Res. 213 (1), 82-87 (2010).</li>
<li>Burgess, R. W., Cox, G. A., Seburn, K. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuromuscular+disease+models+and+analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">Neuromuscular disease models and analysis.</a> Methods Mol. Biol. 602, 347-393 (2010).</li>
<li>Hayworth, C. R., Gonzalez-Lima, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pre-symptomatic+detection+of+chronic+motor+deficits+and+genotype+prediction+in+congenic+B6.SOD1%28G93A%29+ALS+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">Pre-symptomatic detection of chronic motor deficits and genotype prediction in congenic B6.SOD1(G93A) ALS mouse model.</a> Neuroscience. 164 (3), 975-985 (2009).</li>
<li>Ludolph, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Guidelines+for+preclinical+animal+research+in+ALS%2FMND%3A+A+consensus+meeting%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Guidelines for preclinical animal research in ALS/MND: A consensus meeting.</a> Amyotroph Lateral Scler. 11 (1-2), 38-45 (2010).</li>
<li>Boillee, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Onset+and+progression+in+inherited+ALS+determined+by+motor+neurons+and+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Onset and progression in inherited ALS determined by motor neurons and microglia.</a> Science. 5778 (3), 1389-1392 (2006).</li>
</ol>

Keine Interessenskonflikte erklärt.

Die SOD1 (G93A) genetisches Mausmodell ist ein wertvolles Tiermodell, um den Krankheitsverlauf der progressiven Motoneuron Verlust vergleichbar mit menschlichen amyotrophe Lateralsklerose 8 zu studieren. Eine Vielzahl von unterschiedlichen Behandlung Paradigmen in diesem Modell geprüft, und eine Grundlage für die spätere Prüfung in klinischen Studien am Menschen 8-10. Um der Lage sein, erhebliche Unterschiede in einer experimentellen Studie zur Therapie bei diesen Mäusen erkennen, ist es von eminen...

<table border="1"><tbody><tr><td></td><td> Hersteller </td><td> Bestellinformationen </td></tr><tr><td> Verhaltenstests </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Rota-Rod für Mäuse </td><td> Ugo Basile, Comerio, Italien </td><td> # 47600 </td></tr><tr><td> Draht hängen Gerät </td><td> Maßgeschneidert </td><td></td></tr><tr><td colspan="3"></td></tr><tr><td> Spinal Cord Vorbereitung </td><td></td><td></td></tr><tr><td> OP-Tisch Betriebslampe Schutzhandschuhe </td><td></td><td></td></tr><tr><td> &quot;Iris&quot; Schere, abgewinkelt, um Seite </td><td> Fine Science Tools, Heidelberg, Deutschland </td><td> 14063-09 </td></tr><tr><td> Cohan-Vannas Frühling Schere, gerade </td><td> Fine Science Tools, Heidelberg, Deutschland </td><td> 15000-10 </td&gt; </tr><tr><td> Mikropinzetten </td><td> Hammacher, Solingen, Deutschland </td><td> HWC 111-10 </td></tr><tr><td> Scalpel &quot;Präzisa plus&quot; </td><td> Dahlhausen, Köln, Deutschland </td><td> 11.000.00.510, Fig. 10 </td></tr></tbody></table>

klinische tests und rückenmark removal in einem mausmodell für amyotrophe lateralsklerose (als)

Clinical Testing and Spinal Cord Removal in a Mouse Model for Amyotrophic Lateral Sclerosis (ALS)

Amyotrophe Lateralsklerose (ALS) ist eine tödlich verlaufende neurodegenerative Erkrankung, die sich in progressive Degeneration der Motoneuronen. Peak-Erkrankungsalter liegt rund 60 Jahre für die sporadische Krankheit und rund 50 Jahre für die Erbkrankheit. Aufgrund seiner fortschreitenden Verlauf, sterben 50% der Patienten innerhalb von 30 Monaten nach Einsetzen der Symptome. Um neue Behandlungsmöglichkeiten für diese Krankheit zu bewerten, wurden genetische Mausmodelle der ALS basierend auf menschlichen familiäre Mutationen im SOD-Gens, wie die SOD1 (G93A) eine Mutation erzeugt. Die wichtigsten Aspekte, die im Modell ausgewertet werden müssen, sind das Gesamtüberleben, die klinische Verlauf und die Motorik. Hier haben wir die klinische Bewertung zu demonstrieren, zeigen die Leitung von zwei Verhaltens-motorischen Tests und liefern quantitative Scoring-Systeme für alle Parameter. Da eine eingehende Analyse des ALS-Maus-Modell erfordert in der Regel eine immunhistochemische Untersuchung des Rückenmarks zeigen wir, ihre Vorbereitung im Detail tun, die Anwendung derRsaI Laminektomie Methode. Beispielhafte histologischen Befunde werden demonstriert. Die umfassende Anwendung der dargestellten Untersuchungsmethoden in Studien am Mausmodell der ALS wird es dem Forscher, um zuverlässig zu testen zukünftige therapeutische Optionen, die eine Grundlage für spätere klinische Studien am Menschen liefern kann.

Ein Mausmodell für amyotrophe Lateralsklerose (ALS) ist klinisch geprüft und auf der Verhaltensebene. Als Voraussetzung für eine Begleitperson immunhistologische Analyse der Zubereitung des Rückenmarks wird im Detail dargestellt.

Klinische Tests und Rückenmark Removal in einem Mausmodell für Amyotrophe Lateralsklerose (ALS)

Die amyotrophe Lateralsklerose (ALS) ist eine tödliche neurodegenerative Erkrankung, die zu einer fortschreitenden Degeneration der Motoneuronen führt. Der Beginn der Erkrankung liegt im Durchschnitt bei etwa 60 ...

Hallo, mein Name ist Lar Turner. Ich bin Postdoktorand an der Abteilung für Neurologie der Universität Ingham, Deutschland. Hallo, mein Name ist Lin Gunda.Ich bin Medizinstudent und führe meine Abschlussarbeit in diesem Labor durch. Heute werden wir Ihnen die klinische Untersuchung des SODG 93, eines Mausmodells der amyotrophen Lateralsklerose, zeigen. Außerdem demonstrieren wir einen Test der motorischen Funktion mit einem sogenannten Rotarod-Test und zusätzlich einen weiteren Test der motorischen Funktion mit dem Hängegriff an einem Draht, um eine immunologische Analyse durchzuführen.Nach der funktionellen Untersuchung der a s Mäuse besteht ein notwendiges Verfahren in der Entfernung des Rückenmarks, des STIC-Nervs und des Gastrocnemius-Muskels. Wir möchten dieses chirurgische Vorgehen detailliert darstellen und am Ende einige beispielhafte immunologische Befunde präsentieren. Gut, aber beginnen wir zunächst mit der klinischen Untersuchung.Dies ist ein frei beweglicher Wildtyp-MOE, der in unserem klinischen Klassifizierungssystem keine klinischen Symptome wie Muskelzittern oder Parsis zeigt. Das entspräche der Wertung vier. Dies ist ein transgener A LS-moe.In einem frühen Krankheitsstadium zeigt es ein starkes Zittern des rechten Hintergliedmaßes, das es als SCORE drei E klassifiziert. Die schweren Gangstörungen klassifizieren dieses Tier als Score zwei. Das Schleifen mindestens eines Hintergliedmaßes wird im Hängedrahttest als klinischer Score eins eingestuft, wobei die grobe Muskelkraft der Rumpfmuskulatur bewertet wird. Jede Maus wird auf einen speziell angefertigten Draht gesetzt und vorsichtig verkehrt herum über der mit Stroh bedeckten Unterlage gedreht.Nachdem dreimal hintereinander mindestens 180 Sekunden trainiert wurde, wird die Latenz bis zum Herunterfallen gemessen. Jeder Maus wird maximal dreimal der Versuch ermöglicht, sich bis zu 180 Sekunden an dem umgedrehten Deckel festzuhalten, und die längste Dauer wird aufgezeichnet im Vergleich zur weißen Drahtmaus auf der rechten Seite. Die Plaque-transgene Maus auf der linken Seite ist sehr schwach und fällt vom Deckel ab, bevor sie das Maximum erreicht.Die Rotorstange wird verwendet, um die motorische Koordination, das Gleichgewicht und die motorische Lernfähigkeit zu messen. Eine gute Leistung erfordert ein hohes Maß an sensorisch-motorischer Koordination. Sie besteht aus einer computer­gesteuerten, motorbetriebenen rotierenden Spindel und fünf Bahnen für fünf m.Fehler der Mäuse werden automatisch durch Druck auf die untere Kunststoffplatte erfasst. Nachdem das Tier dreimal hintereinander für jeweils mindestens 180 Sekunden bei einer konstanten Geschwindigkeit von 15 Umdrehungen pro Minute trainiert wurde, wird die Zeit gemessen, die das Tier auf dem sich drehenden Rotarod verbleiben kann. Jedes Tier durchläuft drei Versuche, und die längste Latenzzeit ohne Herunterfallen wird dokumentiert.Die gesunde Wildtyp-Maus auf der linken Seite läuft problemlos auf der Rotorstange. Im Gegensatz dazu hat die transgene a s Maus auf der rechten Seite erhebliche Schwierigkeiten, überhaupt auf der Rotorstange zu verbleiben, und rutscht nach einer Weile ab, wie von hinten beobachtet. Sie sehen die schweren Laufschwierigkeiten der linken Retre-Maus.Im Vergleich mit der gesunden Wire-Tap-Maus ist sie nicht in der Lage, mit der Rotorgeschwindigkeit Schritt zu halten und sich mit den HIN-Gliedmaßen nach oben zu drücken. Um eine immunchemische Analyse des Rückenmarks durchzuführen, müssen die Tiere getötet werden. Es ist sehr wichtig, stets strikt den lokalen Richtlinien für die ordnungsgemäße Durchführung von Tierversuchen zu folgen.In diesem Zusammenhang zeigt diese stark vereinfachte Übersicht über die Wirbelsäule und das umgebende Gewebe die wichtigsten anatomischen Strukturen. Wir werden das Tier auf seine Bauchseite legen und mit der Präparation der Muskulatur aus dem dorsalen Bereich beginnen. Nachdem das Muskelgewebe entfernt wurde, gelangen wir zur Wirbelsäule, die das Rückenmark umschließt.Nachdem das Tier getötet und mit einer Lösung, die Paraform enthält, perfundiert wurde, kann das Rückenmark entfernt werden. Das Tier wird auf einen Operationstisch platziert, und alle Gliedmaßen werden an den Seiten fixiert, um die Rückseite der Maus freizulegen. Das Tier wird angefeuchtet, um den Haarflaum zu glätten und den anschließenden Hautschnitt zu erleichtern.Hierfür wird ein scharfes Skalpell verwendet. Achten Sie darauf, die Haut nach beiden Seiten zu dehnen. Um das Schneiden zu erleichtern, sollte der Beinmuskel präpariert werden.Ihre Haut muss ebenfalls eingeschnitten werden. Nachdem der Hautschnitt vollständig ist, wird sie vorsichtig zur Seite gezogen. Mit einer Pinzette, nachdem die Beinmuskulatur und der Ischiasnerv entfernt wurden, nähern wir uns weiter dem Rückenmark und legen das Tier auf einen neuen Operationsplatz.Nun lassen sich Schädelhals, Muskulatur und Wirbelsäule leicht identifizieren. Nachdem alle diese Strukturen erkannt wurden, ist es einfach, mit dem nächsten Schritt fortzufahren. Die Muskeln des Halses und das nu-Ligament müssen entfernt werden.Achten Sie darauf, nicht zu tief einzuschneiden und die Wirbelsäule zu verletzen. Im nächsten Schritt werden die paravertebralen Muskeln vollständig entfernt, um die Wirbelsäule freizulegen. Um auf die Wirbelsäule zuzugreifen, müssen mehrere Exzisionen durchgeführt werden.Wir beginnen am Halsbereich der Wirbelsäule, einschließlich des atlanto-occipitalen Gelenks. Um die Laminektomie durchzuführen, müssen wir den Wirbelbogen durchtrennen, um alle Wirbelanhänge vom Wirbelkörper entfernen zu können. Wie zuvor erläutert, beginnt die Laminektomie mit dem Durchtrennen der Wirbelbögen.Dann kann die Laina abgezogen werden. Achten Sie erneut darauf, das Rückenmark nicht zu verletzen, da noch viele weitere Ral entfernt werden müssen. Es ist sehr hilfreich, gekröpfte Scheren zu verwenden und jeweils mehrere Wirbelbögen beider Seiten gleichzeitig zu incisieren.Ziehen Sie dann an den Dornfortsätzen, um die Wirbelbögen und die Vergrößerung vollständig zu entfernen. Beachten Sie, dass das Skalpell vorsichtig möglichst seitlich an der Seite des Spinalkanals eingeführt werden muss. Verbleibende seitliche Teile der Wirbelsäule müssen entfernt werden, um die spätere vollständige Entnahme des Rückenmarks zu erleichtern.Ein anatomisches Leitmerkmal des Rückenmarks sind die sogenannten zervikalen und lumbalen Verdickungen. Nachdem Sie die Enukleation des gesamten Rückenmarks abgeschlossen haben, vergewissern Sie sich, dass Sie auch alle ventralen Wurzeln des Rückenmarks durchtrennt und es von der Dura mater der Meningen gelöst haben. Anschließend wird das zervikale Rückenmark durchtrennt.Kranial wird die Entnahme erneut begonnen. Das Rückenmark sehr vorsichtig berühren, um dieses Gewebe nicht zu schädigen, da dies erhebliche Einschränkungen für spätere immunchemische Analysen verursachen könnte. Die Entnahme des Rückenmarks wird im Bereich der Brustwirbelsäule fortgesetzt und anschließend im lumbalen Abschnitt fortgeführt.Jetzt wird erneut geschnitten, diesmal an der Seite des Cauda-equina-Strangs. Nun können wir ihn vollständig freilegen. Hier sehen Sie das Rückenmark direkt neben seiner ursprünglichen Position in der RAL-Säule.Schließlich wird es in eine Paraformaldehyd-Fixierungslösung eingebracht. Als klassisches Beispiel für die immunhistochemische Analyse des Rückenmarks können Sie einen Antikörper gegen Cholinacetyltransferase verwenden, um Motoneurone im Vorderhorn des Rückenmarks nachzuweisen. Hier sehen Sie eine große Anzahl von Motoneuronen in einem gesunden Wildtyp-Tier.Im Gegensatz dazu weist das transgene a LS-Tier im Endstadium eine deutlich geringere Anzahl von Motoneuronen im Vorderhorn auf. Nach dem Anschauen dieses Videoartikels sollten Sie die grundlegende klinische Untersuchung des SODG 93. A Mausmodells der amyotrophen Lateralsklerose kennengelernt haben.Es wurden zwei motorische VerhaltensTests vorgestellt: der Rotor-Rod-Test und der Hängedraht-Test. Sie bieten eine gute Möglichkeit, die grundlegenden motorischen Funktionen zu bewerten. Beide Tests sind einfach durchzuführen, empfindlich bei der Erkennung motorischer Defizite und zeiteffizient.Der Hauptteil dieses Videos besteht in einer Demonstration der Präparationstechnik des Rückenmarks. Diese kann natürlich auf jedes andere Maus-Krankheitsmodell angewendet werden und ist ein wesentlicher Schritt für die spätere immunchemische Analyse der Krankheitspathologie im Rückenmark. Vielen Dank fürs Zuschauen.Wir hoffen, dass dieser Videoartikel für Ihre zukünftigen Experimente hilfreich sein wird.

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Neuronale Vorläuferzellen der Transplantation ist eine vielversprechende Strategie für den Schutz und / oder Wiederbeschaffung verlorener / dysfunktional Gebärmutterhals phrenicus Motoneuronen im Rückenmark Verletzungen (SCI) und der Motor Neuron Erkrankung, amyotrophe seitlichen Sklerose (ALS). Wir bieten ein Protokoll für die Zelle Lieferung an zervikalen Rückenmarks Vorderhorn in Nagermodellen von ALS und Rückenmarksverletzungen.

Intraspinale Cell Transplantation für Targeting Cervical Vorderhorn in Amyotrophe Lateralsklerose und traumatische Rückenmarksverletzungen

Quelle:Pourshafie, N., et al. Systemische Verabreichung von microRNA unter Verwendung des rekombinanten Adeno-assoziierten Virus Serotyp 9 zur Behandlung neuromuskulärer Erkrankungen bei Nagetieren. J. Vis. Exp. (2018).In diesem Video wird eine von spinaler und bulbärer Muskelatrophie oder SBMA betroffene Maus einer Schwanzveneninjektion von rekombinanten AAV-Vektoren (Adeno-assoziierten Vektoren) unterzogen, die ein Plasmid tragen, das für therapeutische microRNA kodiert. Der Vektor produziert...

Injektion rekombinanter adeno-assoziierter Vektoren in einem Mausmodell für spinale und bulbäre Muskelatrophie

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A Quick Phänotypische Neurologische Scoring System zur Bewertung der Krankheitsprogression im SOD1 G93A-Mausmodell der ALS

Dieser Artikel beschreibt eine Methode zur Erzeugung einer reproduzierbaren Rückenmarkskompressionsverletzung (SCI) bei der neugeborenen Maus. Das Modell bietet eine vorteilhafte Plattform für die Untersuchung von Mechanismen adaptiver Plastizität, die der spontanen funktionellen Erholung zugrunde liegen.

Ein Neonatal Maus Spinal Cord Injury Kompression Modell

Hier beschrieben handelt es sich um einen inszenierten, Verhaltens-Screening-Ansatz, der verwendet werden kann, um Verbindungen zu sehen, die in vivo Wirksamkeit auf kognitiven und funktionellen motorischen Verhaltensweisen in transgenen Mausmodellen von β-Amyloidose und Tauopathie zeigen. Diese Methoden sind optimiert, um Verbindungen für die Aktivität in kurzfristigen und Arbeitsspeicheraufgaben zu screenen.

Assessment of Spontane Alternation, neuartige Objekterkennung und Gliedmaßenverkürzung in transgenen Mausmodellen der Amyloid-β- und Tau-Neuropathologie

Die Messung der Nervenleitgeschwindigkeit ist ein nützliches Instrument zur Maus-Modellen der Neurodegeneration zu beurteilen, aber es ist häufig nur angewendet, um den Ischiasnerv im Hintergliedmaßen zu stimulieren. Hier beschreiben wir eine Technik, um zusammengesetzte Muskel Aktionspotential (CMAP) in Vivo in der Maus vordergliedmaße Muskeln innerviert den Plexus brachialis zu messen.

In Vivo Elektrophysiologische Messungen der zusammengesetzten Muskel Aktionspotential aus die Vorderbeine in Maus-Modellen der Motor Neuron Degeneration

Dieses Protokoll beschreibt, wie eine präzise Laminektomie für die Induktion von stabilen Querbandverletzungen im Mausmodell mit minimalen Kollateralschäden für die Rückenmarksverletzungsforschung erstellt wird.

Induktion von vollständiger Transektion-Typ Rückenmarksverletzung bei Mäusen

Hier wird ein neuartiges automatisiertes Gerät zur Quetschung von Rückenmarksverletzungen für Mäuse vorgestellt, das Modelle für Rückenmarksverletzungen mit unterschiedlichem Grad genau herstellen kann.

Automatisierter Impaktor für das Modell einer kontusiven Rückenmarksverletzung bei Mäusen

Das vorliegende Protokoll beschreibt die Entwicklung eines reproduzierbaren Mausmodells des Rückenmarksglioms durch Injektion von Tumorzellen in den Zwischenwirbelraum und bietet damit einen effektiveren und weniger invasiven Ansatz für die Forschung und therapeutische Entwicklung.

Chirurgische Transplantation von Tumorzellen in das Rückenmark von Mäusen

Polyglutamin spinocerebellare Ataxien werden durch CAG-Expansionen verursacht, die aggregationsanfällige Proteine erzeugen. Dieses Protokoll beschreibt die Vektorproduktion, die stereotaxische Abgabe sowie die Analyse von Einschlüssen und neuronalem Markerverlust und bietet eine kontrollierte Plattform, um Mechanismen zu untersuchen und gezielte Therapien für neurodegenerative Erkrankungen zu evaluieren.

Lentiviral-induzierte striatale Pathologie als präklinisches Modell der polyglutamin-spinocerebellären Ataxie

Dieser Artikel beschreibt intrathekale Verabreichungsmethoden für ZNS-gezielte Therapeutika bei erwachsenen Mäusen, mit Fokus auf Protokollpräzision und der Ermöglichung wiederholter Injektion. Sie enthält Ergebnisse einer Validierungsstudie, in der Antisense-Oligonukleotide die mutierte SOD1-Expression in SOD1-ALS-Modellmäusen reduzierten, was den Nutzen dieses Ansatzes in der präklinischen Forschung zu neurodegenerativen Erkrankungen unterstützt.

Lumbale intrathekale Injektion von SOD1-ASOs zur präzisen Zielerfassung des ZNS und prädiktiver Wirksamkeit bei menschlichen SOD1-G93A-ALS-Mäusen

Lernen Sie klinische Tests und Rückenmarkpräparation im SOD1-G93A-Mausmodell für ALS. Diese Methode ermöglicht Verhaltensanalysen und immunhistologische Untersuchungen zur Erforschung neurodegenerativer Erkrankungen.

Klinische Tests und Rückenmark Removal in einem Mausmodell für Amyotrophe Lateralsklerose (ALS)

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