Klinische Tests und Rückenmark Removal in einem Mausmodell für Amyotrophe Lateralsklerose (ALS)

Ein Mausmodell für amyotrophe Lateralsklerose (ALS) ist klinisch geprüft und auf der Verhaltensebene. Als Voraussetzung für eine Begleitperson immunhistologische Analyse der Zubereitung des Rückenmarks wird im Detail dargestellt.

Hallo, mein Name ist Lar Turner. Ich bin Postdoc in der Abteilung für Neurologie der Universität Ingham, Deutschland. Hallo, mein Name ist Lin Gunda.

Ich bin Medizinstudent und schreibe meine Abschlussarbeit in diesem Labor. Heute zeigen wir Ihnen die klinische Erprobung des SODG 93, eines Moss-Modells der atrophischen Lateralsklerose. Des Weiteren demonstrieren wir den motorischen Funktionstest mit einem sogenannten Rotortest und zusätzlich einen weiteren motorischen Funktionstest mit dem hängenden Drahtgriff, um eine immunologische Analyse durchzuführen.

Nach der Funktionsprüfung der Mäuse besteht ein notwendiger Eingriff in der Entfernung des Rückenmarks, des STIC-Nervs und des Magenmuskels. Wir wollen diese chirurgischen Vorgehensweisen im Detail vorstellen und zum Schluss einige beispielhafte immunologische Befunde vorstellen. Okay, aber beginnen wir nun zunächst mit den klinischen Tests.

Hierbei handelt es sich um einen frei bewegenden Wildtyp-MOE, der in unserem klinischen Klassifikationssystem keine klinischen Symptome wie Muskelzittern oder Parsis zeigt. Das wäre die vierte Punktzahl. Hierbei handelt es sich um ein transgenes A LS moe.

In einem frühen Krankheitsstadium zeigt es einen starken Tremor der rechten Hintergliedmaße, der es als SCORE drei E klassifiziert. Die schweren Ganganomalien klassifizieren dieses Tier als score zwei. Das Ziehen von mindestens einer hinteren Gliedmaße wird im Hängedrahttest als klinischer Score eins eingestuft, die grobe Muskelrippenkraft wird bewertet. Jede Maus wird auf einen CustomMade-Draht gelegt und vorsichtig über dem mit Strohhalm bedeckten Knopf auf den Kopf gestellt.

Nach drei aufeinanderfolgenden Trainingszeiten von mindestens 180 Sekunden wird die Latenz zu Stürzen gemessen. Jede Maus hat bis zu drei Versuche Zeit, den umgedrehten Deckel für maximal 180 Sekunden festzuhalten, und die längste Zeitspanne wird im Vergleich zur weißen Drahtmaus auf der rechten Seite aufgezeichnet. Die Plaque-transgene Maus auf der linken Seite ist sehr schwach und fällt vom Lid ab, bevor sie das Maximum erreicht.

Das Rotorstabgerät dient zur Messung der motorischen Koordination, des Gleichgewichts und der motorischen Lernfähigkeit. Eine gute Leistung erfordert ein hohes Maß an sensomotorischer Koordination. Es besteht aus einer computergesteuerten, motorisch angetriebenen rotierenden Spindel und fünf Bahnen für fünf m.

Fehler der Mäuse werden automatisch durch Druck auf die untere Kunststoffplatte erkannt. Nach drei aufeinanderfolgenden Trainingszeiten von mindestens 180 Sekunden bei einer konstanten Geschwindigkeit von 15 Umdrehungen pro Minute wird die Zeit gemessen, für die ein Tier auf der rotierenden Fäulnis verbleiben kann. Jedes Tier durchläuft drei Prüfungen, wobei die längste Latenzzeit ohne Sturz aufgezeichnet wird.

Der gesunde Wildtyp mos auf der linken Seite läuft problemlos auf der Rotorstange. Im Gegensatz dazu hat der transgene A s mo auf der rechten Seite große Probleme, überhaupt auf der Rotorstange zu bleiben und rutscht nach einer Weile von hinten beobachtet ab. Sie sehen die gravierenden Laufschwierigkeiten der linken Retre-Maus.

Im Vergleich zur gesunden Wiretap-Maus ist sie nicht in der Lage, mit der Drehzahl der Rotorstange mitzuhalten und kann mit den HIN-Wurfarmen nicht nach oben drücken. Um eine immunchemische Analyse des Rückenmarks durchführen zu können, müssen die Tiere getötet werden. Es ist sehr wichtig, sich immer strikt an die lokalen Richtlinien für die ordnungsgemäße Durchführung von Tierversuchen zu halten.

In diesem Zusammenhang werden in dieser sehr vereinfachten Übersicht über die Wirbelsäule und ihr umliegendes Gewebe die wichtigsten anatomischen Strukturen dargestellt. Wir legen das Tier auf die Bauchseite und beginnen, die Muskeln aus dem Rückensack vorzubereiten. Nachdem das Muskelgewebe entfernt wurde, greifen wir auf die Wirbelsäule zu, die das Rückenmark umschließt.

Nachdem das Tier getötet und mit einer Paraform-Höhe, die Lösung enthält, perfundiert wurde, kann das Rückenmark entfernt werden. Das Tier wird auf einen Operationstisch gelegt und die vollen Gliedmaßen werden an den Seiten fixiert, um die Rückseite der Maus freizulegen. Das Tier wird benetzt, um das Haarkleid zu glätten und den folgenden Hautschnitt zu erleichtern.

Dazu wird ein scharfes Skalpell verwendet. Achten Sie darauf, die Haut zu beiden Seiten zu dehnen. Um den Schnitt zu erleichtern, muss der Beinmuskel vorbereitet werden.

Auch ihre Haut muss eingeschnitten werden. Nachdem der Hautschnitt abgeschlossen ist, wird er sanft zur Seite gezogen. Mit einer Pinzette, nachdem wir die Beinmuskulatur und den Ischiasnerv entfernt haben, nähern wir uns weiter dem Rückenmark und legen das Tier auf einen neuen Operationstisch.

Jetzt ist es einfach, den Schädelhals, die Muskeln und die Wirbelsäule zu identifizieren. Nachdem Sie all diese Strukturen identifiziert haben, ist es einfach, mit dem nächsten Schritt fortzufahren. Die Muskeln des Halses und des Bandes müssen entfernt werden.

Achten Sie darauf, nicht zu tief einzuschneiden und die Wirbelsäule zu führen. Im nächsten Schritt werden die paravertebralen Muskeln vollständig entfernt, um die Wirbelsäule freizulegen. Um Zugang zur Wirbelsäule zu erhalten, müssen mehrere Ektomien durchgeführt werden.

Wir beginnen mit dem zervikalen Teil der Wirbelsäule, einschließlich des Atlantischen Hinterhauptgelenks. Um die Laminektomie durchzuführen, müssen wir den Wirbelbogen durchtrennen, um alle Wirbelfortsätze aus dem Wirbelkörper entfernen zu können. Wie bereits erläutert, beginnen Sie bei der Laminektomie mit dem Durchtrennen der Wirbelbögen.

Dann kann die Laina weggezogen werden. Auch hier ist darauf zu achten, dass das Rückenmark nicht verletzt wird, da noch viele weitere ral entfernt werden müssen. Es ist sehr hilfreich, eine abgewinkelte Schere zu verwenden und mehrere Wirbelbögen beider Seiten gleichzeitig zu schneiden.

Ziehen Sie dann an den dorsalen Fortsätzen, um das Wirbellamin und die Nahaufnahme vollständig zu entfernen. Sie sehen, dass die Schere vorsichtig am äußersten seitlichen Rand des Wirbelkanals eingeführt werden muss. Verbleibende laterale Anteile der Wirbelsäule müssen entfernt werden, um die spätere vollständige Entfernung des Rückenmarks zu ermöglichen.

Ein anatomisches Wahrzeichen des Rückenmarks sind die sogenannten zervikalen und lumbalen Esencia. Nachdem Sie die Ektomien des gesamten Rückenmarks abgeschlossen haben, stellen Sie sicher, dass Sie auch alle ventralen Wurzeln des Rückenmarks durchtrennen und es von der Durmaterie der Hirnhäute befreien. Als nächstes wird das zervikale Rückenmark durchtrennt.

Schädelig und seine Entfernung wird wieder begonnen. Berühren Sie das Rückenmark sehr vorsichtig, um dieses Gewebe nicht zu schädigen, da dies zu starken Einschränkungen für die spätere immunimmunchemische Analyse führen könnte. Die Entfernung des Rückenmarks wird auf thorakaler Ebene fortgesetzt und bis zum lumbalen Teil fortgesetzt.

Endlich wird wieder geschnitten, diesmal an der Seite der Nabelschnur Equina. Jetzt sind wir in der Lage, es vollständig freizugeben. Hier sehen Sie das Rückenmark direkt neben seiner ursprünglichen Position in der RAL-Spalte.

Letztendlich wird es in eine Paraform Hyde Postfixierungslösung gegeben. Als klassisches Beispiel für die immunhistochemische Analyse des Rückenmarks können Sie einen Antikörper verwenden, der Cholin erkennt, Acetyltransferase, um Motoneuronen im Vorderhorn des Rückenmarks zu identifizieren. Hier sieht man eine große Anzahl von Motoneuronen bei einem gesunden Wildtyp-Tier.

Im Gegensatz dazu weist das transgene LS-Tier im Endstadium eine viel geringere Anzahl von Motoneuronen im Vorderhorn auf. Wenn Sie sich diesen Videoartikel ansehen, sollten Sie die grundlegende klinische Untersuchung des SODG 93 gelernt haben. Ein Mausmodell der atrophischen Lateralsklerose.

Es wurden zwei Motorverhaltenstests demonstriert: der Rotortest und der Hängedrahttest. Sie bieten eine gute Möglichkeit, die grundlegende Motorik zu beurteilen. Sie sind einfach durchzuführen, empfindlich bei der Erkennung von Motordefiziten und zeitsparend.

Der Hauptteil dieses Videos besteht aus einer Demonstration der Präparationstechnik des Rückenmarks. Dies kann natürlich auf jedes andere Krankheitsmodell der Maus angewendet werden und ist ein wesentlicher Schritt für die spätere immunchemische Analyse der Krankheitspathologie im Rückenmark. Danke für das Aufpassen.

Wir hoffen, dass dieser Videoartikel für Ihre zukünftigen Experimente hilfreich sein wird.