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Präparation und Immunfärbung von Imaginalscheiben aus Drosophila melanogaster
Präparation und Immunfärbung von Imaginalscheiben aus Drosophila melanogaster
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JoVE Journal Biology
Dissection and Immunostaining of Imaginal Discs from Drosophila melanogaster

Präparation und Immunfärbung von Imaginalscheiben aus Drosophila melanogaster

Full Text
27,749 Views
10:10 min
September 20, 2014

DOI: 10.3791/51792-v

Carrie M. Spratford1, Justin P. Kumar1

1Department of Biology,Indiana University

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Die adulten Strukturen von Drosophila stammen von sackartigen Strukturen ab, die imaginale Scheiben genannt werden. Die Analyse dieser Scheiben bietet Einblicke in viele Entwicklungsprozesse, einschließlich der Gewebebestimmung, der Etablierung von Kompartimentgrenzen, der Zellproliferation, der Spezifikation des Zellschicksals und der planaren Zellpolarität. Dieses Protokoll wird verwendet, um imaginale Scheiben für die Licht-/Fluoreszenzmikroskopie vorzubereiten.

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, imaginale Scheiben von Drosophila-Larven zu sezieren. Für die Immunhistochemie wird dies erreicht, indem zunächst der Kopfkomplex, bestehend aus Mund, Haken, Auge- und Tenalscheiben, und Gehirn aus den Larven entfernt wird. Der zweite Schritt besteht darin, den Kopfkomplex zu fixieren und mit primären und sekundären Antikörpern zu inkubieren. Als nächstes werden die Augen- und Tenalscheiben vom Kopfkomplex getrennt.

Der letzte Schritt besteht darin, die imaginären Scheiben in Antibleichmittel auf einen Objektträger zu montieren. Letztendlich können fluoreszierende oder LAC Z-Reporter und Antikörperfärbungen mithilfe der Fluoreszenzmikroskopie die räumliche und zeitliche Expression von Genen und Proteinen innerhalb des Imaginalgewebes aufdecken. Diese Technik kann jedoch verwendet werden, um Einblicke in die Gen- und Proteinlokalisation in der enten imaginalen Scheibe zu erhalten.

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Cellular Biology Ausgabe 91 Drosophila Imaginalscheiben Auge Netzhaut Präparation Entwicklungsbiologie

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