Name: Eine neue Technik zur quantitativen Analyse von Haarausfall in Mäuse mit Graustufen-Analyse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2015-03-09T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 41 s
Description: Lernen Sie eine Methode zur quantitativen Haardichteanalyse bei Mäusen mittels Graustufen-Lichtabsorption. Diese reproduzierbare Technik ermöglicht objektive Bewertung von Therapieeffekten bei Alopezie.

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Wir möchten dem Kinderkrankenhaus in Montefiore, Abteilung für Pädiatrie, für die Unterstützung dieser Studien danken. Wir danken der National Alopecia Areata Foundation für die finanzielle Unterstützung bei der Durchführung von Studien mit C3H/HeJ-transplantierten Mäusen.

Ethik Hinweise: Alle Studien, die Tiere müssen von der IACUC der Einrichtung genehmigt werden (für die folgenden Daten wurden Protokolle durch die Montefiore IACUC, Protokoll # 11-6-240 und 13-7-100 # zugelassen). Tiere sind vorhanden Licht Anästhesie für den alleinigen Zweck halten sie noch während der Aufnahme angezeigt wird, gibt es keine schmerzhaften Eingriffen für dieses Protokoll erforderlich. 1. Erwerb von Fotografien <ol><li> Stellen Sie Fokus und Sichtfeld für Gel-Imager Papier mit gedrucktem Text. Stellen Sie sicher, Gleichmäßigkeit der Lichtquelle über fotografiert Region. Um sicherzustellen, Einheitlichkeit, mit einem Gel-Imager mit in Lichtquelle für reflektierende photography eine gebaut. Verwenden Sie keinen Durchlichtquelle, da dies eine Silhouette des Tieres, die für die weitere Analyse ungeeignet ist Graustufen erstellen. Hinweis: Dadurch wird die Maus leicht unscharf, die optische Mittel in der Region of Interest (ROI) bietet Platz und wirdHilfe Quanten Fehler zu reduzieren für sehr kleine (dh &lt;10 Pixel) Bereiche von Interesse. Größere Bereiche von Interesse werden durch diese geringfügige Fokussierungseinstellung beeinträchtigt werden, noch werden sie durch Unterschiede in der Größe des Tieres berührt. </li><li> Anesthetize Tiere unter Verwendung von Ketamin (100 mg / ml) / Xylazin (20 mg / ml) (2: 1), da dies eine schnelle Anästhesiewirkung und eine schnelle Wiederherstellung und ist optimal für das Fotografieren mehrerer Tiere. HINWEIS: Anesthesia wird bestätigt, wenn das Tier noch genug Fotografie ermöglichen. Da die Tiere in der Regel von dieser Licht Anästhesie innerhalb von 10-15 Minuten zu erholen, hat der Tierarzt nicht empfohlen Nutzung von Augensalben. </li><li> Zeigen narkotisierten Tiere auf Gel-Imager in vertikaler Ausrichtung (so nah wie möglich parallel). <ol><li> Für Rücken Fotografien, legen Sie die Tiere in Bauchlage mit Gliedmaßen erweitert. </li><li> Für ventralen Fotografien, platzieren Tiere in Rückenlage, wobei darauf geachtet, dass die Tiere nicht seitlich gedreht. </li&gt; </ol></li><li> Zeigen Graustufen-Standard in fotografiert Region. </li><li> Schließen Zugangstür. Wichtig: Umgebungslicht kann Schwankungen Exposition einzuführen. </li><li> Stellen Sie Blende zu einer Exposition, die den interessierenden Bereich im linearen Bereich des Erwerbs setzt (Lesen F-Stop). HINWEIS: Die meisten Systeme werden angezeigt, wo das Bild ist gesättigt. </li><li> Nehmen Sie Fotos. </li><li> Ändern F-Stopp in einen anderen Belichtungseinstellung, die den interessierenden Bereich im linearen Bereich legt durch Erhöhung oder Verringerung der F-stop um 1, so dass sowohl die Standard- und die Region von Interesse in einer linearen Reihe von Erfassung (Referenz bleiben F- hör auf). </li><li> Nehmen Sie Fotos. </li><li> Sobald Fotografie abgeschlossen ist, legen Sie Tiere auf einem Tisch Erwärmung und zu überwachen, bis sie Brustlage halten kann. Zurück Tiere in ihre Käfige. Bringen Sie die Gruppe von Tieren auf das Vivarium, sobald alle Tiere vollständig erholt. </li></ol> 2. Quantifizierung der Lichtabsorption &lt;/ P&gt; <ol><li> Mark Regionen von Interesse auf die Bilder der Tiere unter Verwendung mitgelieferte Software für die Gel-Imager. <ol><li> Für Ganztier Dorsalansicht verwenden einen rechteckigen oder ovalen Bild sich von dem oberen Schenkel an den unteren Extremitäten, die sich seitlich so weit wie möglich, so dass kein Teil der Schachtel erstreckt sich über den Rücken des Tieres, wie in 1A gezeigt. HINWEIS: Man könnte auch markieren den Bereich von Interesse mit einem Freihand-Zeichenwerkzeug. </li><li> Für ganze Tier Ventralansicht Verwenden 2 Rechtecke: eine für den Beckenbereich und eine für den Brustbereich, wie in 1B gezeigt. </li><li> Für eine kleinere Region von Interesse, dh, die Lage der Arzneimittelverabreichung, Marke entsprechend. </li></ol></li><li> Region Marke (n) von Interesse auf Graustufen Absorption Standard. </li><li> Record Absorption von jeder der markierten Regionen von Interesse. </li></ol> 3. Analyse Absorptionsniveaus obtained für die Regionen von Interesse können müssen, um den Hintergrund-Standard für den Vergleich zwischen Fotografien normalisiert werden. Die Beziehung der Belastung durch Absorption log-log (dh die Beziehung linear zwischen log (Exposition) und log (Absorption)). Unter Verwendung dieser Beziehung kann die Absorption der interessierenden Region normiert auf eine Standard-Hintergrundwert, der ermöglicht Absorptionen direkt zwischen verschiedenen Aufnahmen, einschließlich derjenigen, die zu verschiedenen Zeitpunkten (dh seriellen Messungen innerhalb eines Studienprotokoll) aufgenommen verglichen werden. Das Verfahren für die Durchführung dieser Korrekturen wird in optionalen Schritte 3.1 und 3.2 beschrieben. <ol><li> (Optional) Plot Kurve von log (Belichtung) gegen log (Absorption) mit Hilfe von Graustufen Absorption Standard erhaltenen Werte. </li><li> (Optional) Stellen Sie Schwankungen in der Standard jedes Fotos, wie folgt: <ol><li> Wählen Sie F-Stop für das Lesen und F-Stop Referenz (wie in Schritt 1.6 festgelegt) (wie in s bestimmttep 1.8). </li><li> Berechnen Sie die durchschnittliche Absorption der Standard in allen Aufnahmen am Lesen F-stop. Dieser Durchschnitt ist die Referenz-Standard-Wert (RSV). </li><li> Berechnen Absorptionsdifferenz zwischen dem Lesen und Referenzblendeneinstellungen in jeder Photographie für den Standard (Delta-S) und für jeden definierten ROI (delta-ROI-1, delta-ROI-2 ... ..delta-ROI-X) </li><li> Berechnen Sie die korrigierte Absorptions für jede ROI wie folgt: Korrigierte Absorption (ROI-X) = Absorption (ROI-X) im Lesen F-stop + (RSV - Aufnahme von Standard zu lesen F-stop) * (delta-ROI-X / delta-S) </li></ol></li><li> Kompilieren experimentellen Daten und eine Datenanalyse unter Verwendung von statistischen Standardtechniken für kontinuierliche Variablen (das heißt, ANOVA, T-Test). </li></ol>

<ol><li>McAndrews, P. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((American+Hair+Loss+Association%5BTitle%5D)+AND+%22%22%5BJournal%5D)">American Hair Loss Association.</a> , 
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<li>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale*. , Imatest. 
 
 <a target="_blank" href="http://www.imatest.com/docs/q13/">http://www.imatest.com/docs/q13/</a> Forthcoming.</li>
<li>Freyschmidt-Paul, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+of+alopecia+areata+in+C3H%2FHeJ+mice+with+the+topical+immunosuppressant+FK506+%28Tacrolimus%29%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Treatment of alopecia areata in C3H/HeJ mice with the topical immunosuppressant FK506 (Tacrolimus).</a> Eur J Dermatol. 11 (5), 405-409 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Matsushita, O., Sakon, J., Gensure, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Treatment+and+prevention+of+chemotherapy-induced+alopecia+with+PTH-CBD%2C+a+collagen-targeted+parathyroid+hormone+analog%2C+in+a+non-depilated+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Anticancer+Drugs%22%5BJournal%5D)">Treatment and prevention of chemotherapy-induced alopecia with PTH-CBD, a collagen-targeted parathyroid hormone analog, in a non-depilated mouse model.</a> Anticancer Drugs. 25 (1), 30-38 (2014).</li>
<li>Peters, E. M., Foitzik, K., Paus, R., Ray, S., Holick, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+strategy+for+modulating+chemotherapy-induced+alopecia%2C+using+PTH%2FPTHrP+receptor+agonist+and+antagonist%5BTitle%5D)+AND+%22J+Invest+Dermatol%22%5BJournal%5D)">A new strategy for modulating chemotherapy-induced alopecia, using PTH/PTHrP receptor agonist and antagonist.</a> J Invest Dermatol. 117 (2), 173-178 (2001).</li>
<li>Katikaneni, R., Ponnapakkam, T., Seymour, A., Sakon, J., Gensure, R. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Parathyroid+hormone+linked+to+a+collagen+binding+domain+promotes+hair+growth+in+a+mouse+model+of+chemotherapy+induced+alopecia+in+a+dose-dependent+manner%5BTitle%5D)+AND+%22Anti-cancer+drugs%22%5BJournal%5D)">Parathyroid hormone linked to a collagen binding domain promotes hair growth in a mouse model of chemotherapy induced alopecia in a dose-dependent manner.</a> Anti-cancer drugs. 25 (7), 819-825 (2014).</li>
</ol>

Autoren haben nichts offenzulegen.

In diesem Bericht wird eine detaillierte Beschreibung einer neuen Technik zur Quantifizierung von Haarausfall bei Nagetieren ist. Diese Technik verwendet ein Gel Imager für Bilderfassung und -analyse, die Ausrüstung, die in den meisten Laboratorien leicht verfügbar ist. Die Messungen haben gezeigt, robuste auf geringfügige Änderungen in der Technik (Figuren 4 - 5) zu sein, und mit dem Grad der visuellen Haarausfall bei Behandlungsmodelle (Abbildung 6) gut korreliert. Di...

Alopezie (Haarausfall) kann eine psychologisch und emotional belastenden Ereignis mit mehreren Ursachen. GPH ist die häufigste Ursache von Haarausfall, die etwa zwei Drittel der Männer im Alter von 35 ein. Ein ähnliches Muster des Haarausfalls kann bei Frauen mit PCO-Syndrom beobachtet werden. In beiden dieser Erkrankungen wird der Haarausfall Androgenrezeptor vermittelten. Alopecia können auch als Autoimmunkrankheit, Alopezie areata, die 1,7% der Bevölkerung betroffen 2 auftreten. Alopezie kann als Nebeneffekt von einigen medizinischen Behandlungen, wie die Chemotherapie 3 auftreten. Ein hoher Prozentsatz (65-85%) der Chemotherapie-Patienten erleben ein gewisses Maß an Haarausfall 4,5. Die psychischen Folgen von Haarausfall sind gut in der Chemotherapie-Einstellung untersucht. Chemotherapie-induzierter Alopezie kann in Angst, Depression, ein negatives Körperbild, senkte das Selbstwertgefühl und einer verringerten Gefühl von Wohlbefinden 6,7 führen. Eine hohe percentage (47-58%) der weiblichen Krebspatienten überlegen Haarausfall um die traumatischen Aspekt der Chemotherapie sein und bis zu 8% Rückgang Behandlung aus Angst vor Haarausfall 4,6. Es gibt auch Hinweise in androgenetische Alopezie, die Therapie, psychologische und sogar medizinischen Folgen von Haarausfall 8,9 reduzieren unterstützen. Ebenso Alopecia areata wurde berichtet, dass schwere psychische Folgen 2 haben und die lückenhafte Natur der Haarausfall kann zu einer unangenehmen kosmetische Ergebnis als die meisten anderen Ursachen für Haarausfall führen. Während Medikamente mit milden anti-androgenen Wirkungen (dh Spironolacton) hatten mit mäßigem Erfolg als Therapie für Alopezie verwendet wurde, das erste wirksame Medikament für Alopezie Minoxidil war 10. Diese antihypertensive hat eine beobachtete Nebenwirkung verursacht Haarwachstum, und wird nun als topische Therapie für viele Formen der Alopezie verwendet. Allerdings sind Reaktionen oft unvollständig, mit einigen Themen, die nur langsaming von Haarausfall statt tatsächlichen Nachwachsen 10. Finasterid ist ein kompetitiver Antagonist II 5α-Reduktase zu Dihydrotestosteron Typ blockier Umwandlung von Testosteron, was zu Verbesserungen in der androgenen Alopezie zu Lasten der Teil systemische Androgenblockade. Die Ansprechraten mit langfristigen (10 Jahre) Therapie sind etwa 50% 11. Insgesamt trotz beträchtlicher Forschung in diesem Bereich gibt es immer noch keine angemessene Therapie für Haarausfall. Seit Jahrzehnten haben Forscher und Kliniker Methoden zur Messung der Kopfhaarwachstum in klinischen Studien untersucht. Mit der Entwicklung von Medikamenten, die Alopezie zu behandeln, hat es einen erhöhten Bedarf an zuverlässigen, wirtschaftlichen und minimal invasive Mittel zum Messen des Haarwuchses und insbesondere als Reaktion auf die Therapie. Bildanalysetechnik für eine genaue Quantifizierung der Haardichte bei Patienten mit Haarausfall Erkrankungen ergab konsistent und gültige Ergebnisse in der Vergangenheit unter Verwendung einer Vielzahl von techniques, einschließlich der Analyse der digitalisierten Bilder 12, Bildanalyse der einzelnen Haare und Hautläsionen 13 und mikroskopische Scannen in Haarmasse in einem definierten Kopfbereich 14 zu quantifizieren. Leider, während die oben genannten Methoden haben verbesserte Beurteilung der Wirksamkeit für das Haarwachstum fördernden Eingriffe in klinischen Versuchen, in diesen Verfahren nicht auf Studien an Nagetieren in präklinischen Untersuchungen angewendet. Unser Ziel ist es, eine konsistente und zuverlässige Methode, um Haarausfall bei Mäusen, die es erlauben Ermittler genauer bewerten und zu vergleichen neue Therapieansätze für verschiedene Formen von Haarausfall wird quantifizieren zu entwickeln. Wir haben eine Methodik mit Hilfe von Geräten in den meisten Labors, die eine schnelle und zuverlässige Quantifizierung der Haardichte bei Mäusen mit braunen oder schwarzen Haares ermöglicht leicht verfügbar entwickelt. Diese Methode wurde in Maus-Modellen von chemotherapieinduzierter Alopezie, Alopecia areata und Alopecia von Waxin getestetg. Ein detailliertes Protokoll zur Durchführung dieser Messungen, einschließlich der Validierung Daten von C57BL / 6 und C3H / HeJ-Mäusestämme dargestellt. Da dieses Verfahren beruht auf der Erfassung der Lichtabsorption von Pigmenten in den Haarschaft, kann es nicht verwendet werden, um das Haarwachstum bei weißen Mäusen oder Albino Mäuse nachzuweisen.

<table><tbody><tr><td>KODAK Gel Logic 100 Imaging System</td><td>Eastman Kodak Company, Rochester, NY, USA</td><td></td><td>Gel-Imager zur Aufnahme und Analyse von Fotografien, muss über eine integrierte Lichtquelle für Reflexaufnahmen verfügen.</td></tr><tr><td>The Kodak/Tiffen Q-13 Gray Scale</td><td><a href="http://www.imatest.com/docs/q13/" target="_blank"><img src="/img/new_window.png"> Imatest</a></td><td></td><td>Graustufenstandard</td></tr><tr><td>C57BL/6J Mice</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Mäuse für repräsentative Studie</td></tr><tr><td>C3H/HeJ engrafted mouse</td><td>Jackson Laboratories, Bar Harbor, Maine</td><td></td><td>Maus mit Transplantat für repräsentative Studie</td></tr></tbody></table>

eine neue technik zur quantitativen analyse von haarausfall in mäuse mit graustufen-analyse

A New Technique for Quantitative Analysis of Hair Loss in Mice Using Grayscale Analysis

Alopezie ist eine häufige Form des Haarausfalls, die in vielen verschiedenen Bedingungen, einschließlich der männlichen Haarausfall, Syndrom der polyzystischen Ovarien und Alopecia areata auftreten können. Alopezie kann auch als Nebenwirkung der Chemotherapie bei Krebspatienten auftreten. In dieser Studie war es unser Ziel, eine konsistente und zuverlässige Methode, um Haarausfall bei Mäusen, die es erlauben Forschern, genau zu beurteilen und vergleichen Sie neue Therapieansätze für diese verschiedenen Formen von Haarausfall wird quantifizieren zu entwickeln. Das Verfahren nutzt ein Gel Standardbildgeber, um Bilder von Mäusen erhalten und verarbeiten, die Messung der Lichtabsorption, die in groben Verhältnis zu der Menge von Schwarz (oder Grau) Haar auf der Maus erfolgt. Daten, die auf diese Weise quantitativ bestimmt worden ist, kann dann unter Verwendung von statistischen Standardtechniken (dh, ANOVA, t-Test) analysiert. Diese Methode wurde in Mausmodellen von Chemotherapie-induzierter Alopezie, Alopecia areata und Alopecia aus Wachsen getestet. In diesem Bericht ist die detaillierte Protokoll prestierten zur Durchführung dieser Messungen, einschließlich der Validierung Daten von C57BL / 6 und C3H / HeJ-Mausstämme. Dieses neue Verfahren bietet eine Reihe von Vorteilen auf, einschließlich der relativen Einfachheit der Anwendung, der Verlässlichkeit von Geräten, die in den meisten Laboratorien leicht verfügbar ist, und Anlegen eines objektive, quantitative Beurteilung, die robuster als die subjektiven Bewertungen ist. Verbesserungen bei der Quantifizierung von Haarwachstum bei Mäusen wird Studie von Alopecia Modelle zu verbessern und Auswertung der vielversprechende neue Therapien in präklinischen Studien.

Diese Technik wurde mit C3H / HeJ Mäusen eingepflanzt, die Maus-Modell der Alopecia areata 16 validiert. Diese Tiere entwickeln globale Haarausfall die nach und nach im Laufe der Zeit fortschreitet. Allerdings tritt der Haarausfall bei Patches, und können von der Maus zum nächsten variieren, die Einführung erhebliche Variabilität und erschweren qualitative Bewertungen. Dieses Modell eine Gelegenheit, um Korrelationen zwischen den Messungen der optischen Dichte an unterschiedlichen Stellen auf der Maus, wie di...

Alopezie ist eine häufige Form von Haarausfall, die bei vielen verschiedenen Erkrankungen auftreten kann, auch als Nebenwirkung einer Chemotherapie. Wir haben eine Methode zur Quantifizierung des Haarausfalls bei Mäusen entwickelt, indem wir einen Standard-Gel-Imager verwenden, um eine Graustufenanalyse durchzuführen und so die Untersuchung vielversprechender neuer Alopezie-Therapien zu erleichtern.

Eine neue Technik zur quantitativen Analyse von Haarausfall in Mäuse mit Graustufen-Analyse

Alopecia is a common form of hair loss which can occur in many different conditions, including male-pattern hair loss, polycystic ovarian syndrome, and ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine Quantifizierung der Haardichte durch Lichtabsorption zu ermöglichen. Dazu werden die Tiere zunächst mit einem Gel-Imager fotografiert. Die nächsten Schritte bestehen darin, einen interessierenden Bereich auf dem Foto zu definieren und die Lichtabsorption innerhalb des interessierenden Bereichs zu bestimmen.Dann wird die Lichtabsorption mit einem fotografischen Standard verglichen. Letztendlich kann die Lichtabsorption zwischen ähnlich behandelten Tieren gemittelt werden, um die Auswirkungen eines Eingriffs auf das Haarwachstum zu zeigen. Die Hauptvorteile dieser Technik sind, dass sie unvoreingenommen, quantifizierbar und reproduzierbar ist.Dies ist äußerst wichtig, da es Ihnen ermöglicht, Standards und statistische Techniken wie Inova zu verwenden, um die statistische Signifikanz der Ergebnisse zu bestimmen. Verwenden Sie für dieses Protokoll einen Gel-Imager mit eingebauter Lichtquelle für reflektierende Fotografie. Dies gewährleistet eine gute Gleichmäßigkeit des Lichts, während die Transbeleuchtung eine für die Analyse ungeeignete Schärfe erzeugt.Beginnen Sie mit der Vorbereitung des Gel-Imagers, stellen Sie den Fokus und das Sichtfeld ein. Bei gedrucktem Text kann die Maus leicht unscharf sein, da dies tatsächlich funktioniert. Um Quantenfehler in kleinen interessierenden Bereichen zu reduzieren, wird die Gleichmäßigkeit der Lichtquelle im gesamten fotografierten Bereich überprüft, mit dem Ziel einer hervorragenden optischen Mittelwertbildung im interessierenden Bereich.Bereiten Sie als nächstes das Tier vor. Wählen Sie ein Betäubungsmittel mit schnellem Wirkungseintritt und kurzer Wirkungsdauer und geben Sie gerade so viel ab, dass die Tiere für die Fotografie ruhig bleiben. Platzieren Sie nun die Tiere senkrecht und so nah wie möglich parallel auf dem Imager.Platzieren Sie die Tiere für Rückenfotos in Bauchlage mit ausgestreckten Gliedmaßen. Für Bauchaufnahmen legen Sie die Tiere in Rückenlage. Achten Sie darauf, dass sie nicht seitlich gedreht sind.Absorptionswerte können zwischen den Bildern gezogen werden, aber dafür ist die Maschine nicht ausgelegt. Das Hinzufügen eines Graustufenstandards ermöglicht es uns also, die Absorptionswerte bei der Zusammenstellung der Daten zu normalisieren. Platzieren Sie nun den Graustufenstandard im fotografierten Bereich.Schließen Sie dann die Kammer und reduzieren Sie die Umgebungsbeleuchtung, die auf der Kamera in die Kammer gelangen könnte. Stellen Sie die Blende F auf eine Belichtung ein, die den interessierenden Bereich nicht übersättigt oder unterbelichtet macht. Dann machen Sie ein Foto.Wenn die Blendenzahl so gewählt wird, dass das Bild gesättigt ist, wird der Graustufenwert auf den Wert fixiert, der für B völlig unbrauchbar ist. Ändern Sie dann die Blende um eins, wobei der Interessenbereich und der Standard in einem linearen Belichtungsbereich bleiben, und machen Sie ein zweites Foto, wenn die Fotografie abgeschlossen ist. Legen Sie die Tiere auf einen Wärmetisch und überwachen Sie sie, bis sie sich erholt haben.Sternal-Liegerad. Bringen Sie die Tiere dann in ihre Käfige und schließlich in das Vivarium zurück, um sich vollständig zu erholen. Um die Lichtabsorption mit der Gel-Imaging-Software zu quantifizieren, markieren Sie die interessierenden Regionen auf den Bildern der Tiere für eine Rückenansicht des gesamten Tieres.Verwenden Sie ein rechteckiges Bild, ein ovales Bild oder ein Freihandwerkzeug, um einen Raum von den oberen Gliedmaßen zu den unteren Gliedmaßen zu umreißen, der sich so weit wie möglich seitlich erstreckt. Halten Sie es innerhalb der Ränder des Rückens des Tieres, um das ganze Tier ventral zu sehen. Verwenden Sie zwei Rechtecke.Eine zur Abdeckung der Beckenregion, die gepflegt wird, und eine zur Abdeckung des Brustbereichs, der nicht gepflegt wird. Kleinere Bereiche von Interesse, z. B. wo ein Medikament verabreicht wurde, können ebenfalls als erforderlich markiert werden. Zweitens, markieren Sie den interessierenden Bereich auf dem Graustufen-Absorptionsstandard.Notieren Sie dann die Absorption aus jedem markierten Bereich von Interesse, um sie mit den Fotos zu vergleichen. Normalisieren Sie die Absorptionsniveaus auf den Hintergrundstandard unter Verwendung eines logarithmischen Verhältnisses von Exposition und Absorption. Zu diesem Zweck wird eine Kurve des Logarithmus der Exposition gegen den Logarithmus der Absorption aufgetragen.Verwenden Sie die Werte, die Sie aus dem Graustufenabsorptionsstandard erhalten haben, und passen Sie ihn dann wie folgt an Schwankungen des Standards der einzelnen Fotos an. Wählen Sie zunächst die Blende zum Ablesen des ROI und die Blende für die Referenz und berechnen Sie die durchschnittliche Absorption des Standards in allen Fotos bei der Ablesung der Blende. Dieser Mittelwert ist der Referenzstandardwert oder der RSV.Berechnen Sie als Nächstes die Differenz in der Absorption zwischen den Mess- und Referenz-Blendeneinstellungen in jedem Foto und führen Sie die gleichen Berechnungen für den Standard- und für jeden definierten ROI durch. Berechnen Sie nun mit den Daten von einer Blendenstufe die korrigierte Absorption für jeden ROI mit der gezeigten Formel. Anschließend wenden Sie statistische Standardmethoden an, um die Daten von C3 HHEJ-transplantierten Mäusen zu analysieren, die Alopezie-ADA modellieren, die mit der beschriebenen Methode bei unterschiedlichen Expositionen analysiert wurden.Die Schwankungen des nicht überlappenden ROI waren erwartungsgemäß eng korreliert. Ähnliche Vergleiche ergaben die gleiche enge Korrelation über einen Zeitraum von drei Wochen. Die Mäuse wurden abgebildet, um ihren zu erwartenden Haarausfall zu quantifizieren.80% der abgebildeten Mäuse zeigten in diesem Zeitraum Haarausfall. Im Vergleich dazu zeigten normale C 57 black six-Mäuse im gleichen Zeitraum keinen Haarausfall. In einer zweiten Studie wurde die Chemotherapie-induzierte Alopezie mit der beschriebenen Technik quantifiziert.Mäuse wurden drei Wochen lang mit Cyclophosphamid behandelt und zeigten nach zwei Monaten im Vergleich zu den Kontrollen einen signifikanten Haarausfall. Einmal gemastert, kann jedes Bild in weniger als fünf Minuten analysiert werden. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie das Ausmaß des Haarwachstums bei Nagetieren mit einem Standard-Gel-Bildgebungssystem quantifizieren können.

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Forschung

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Biology

Biologie

Gewebe-spezifische Analyse von einem Haarfollikel Regeneration Modell mit Lentivirus, um Gewinn-oder Verlust-of-function vermitteln.

Schnelle Genetische Analyse von epithelial-mesenchymale Signaling Während Haarregeneration

Dieses Video zeigt eine Methode zur Transplantation menschlicher Haut auf eine immundefiziente Maus mit einer unterdrückten Neutrophilenreaktion. Bei der Methode wird menschliche Spalthaut auf das Transplantatbett der Maus aufgetragen, versiegelt und für die Genesung abgedeckt. Schließlich haftet die menschliche Haut an der Haut der Maus, wodurch Vaskularisierung und Durchblutung hergestellt werden, was zu einer erfolgreichen Haut-Xenotransplantation führt.

Eine Technik zur Transplantation menschlicher Haut in einem Mausmodell

Dieses Video zeigt die kombinierte Aufzeichnung von mechanisch stimulierter afferenter Ausgabe und Nervenendmarkierung in den Haarfollikeln einer Ohrmuschel einer Maus. Es beschreibt die Schritte bei der mechanischen Stimulation der Nervenendigungen der Haarfollikel vor und nach der Exposition gegenüber einem fluoreszierenden Membranfarbstoff, die elektrophysiologische Aufzeichnung der erzeugten Aktionspotentiale und die Visualisierung der Markierung der Nervenenden in den Haarfollikeln.

Kombinierte Aufzeichnung der mechanisch stimulierten afferenten Ausgabe und der Markierung der Nervenenden in Haarfollikeln von Mäusen

Säugetier-Haut enthält eine Vielfalt von Strukturen - wie Haarfollikel und Nervenenden - das charakteristische Muster der räumlichen Organisation zu zeigen. Die Analyse der Haut als flache Halterung nutzt die Vorteile der 2-dimensionalen Geometrie dieses Gewebe voller Dicke hochauflösende Bilder der Strukturen der Haut zu produzieren.

Wohnung Berg-Imaging von Mäusehaut und ihre Anwendung auf die Analyse von Mustern und die Haarfollikel Sinnes Axon Morphologie

Dieses Protokoll beschreibt, wie bilaterale, volldicke Exzisionswunden bei Mäusen erzeugt werden und wie man anschließend die Wunden für die morphometrische Analyse überwacht, erntet und vorbereitet. Enthalten ist eine ausführliche Beschreibung der Verwendung von seriellen histologischen Abschnitten zur Definition, präzisen Quantifizierung und Erkennung morphometrischer Defekte.

Murine Excisional Wound Healing Model und histologische morphometrische Wundanalyse

Hier beschreiben wir ausführlich eine Methode, die auf Mikrocomputertomographie basiert, um 3D-Modelle von kraniomaxillofazialen Knochen bei Mäusen zu segmentieren und zu vermessen, um die Entwicklung des kraniomaxillofazialen Knochens bei Mäusen besser beurteilen zu können, als dies mit aktuellen Methoden möglich ist.

Analyse von kraniomaxillofazialen Fehlbildungen bei Mäusen mittels dreidimensionaler Mikrocomputertomographie

Die Kapillaroskopie ist ein zugängliches Werkzeug für die direkte, kostengünstige und nicht-invasive Visualisierung von Mikrogefäßen. Ziel dieses Protokolls ist es, Forscher in die Lage zu versetzen, die Kapillaroskopie zur Visualisierung der peripheren mikrovaskulären Morphologie in den Nagelbetten von Mäusen zu nutzen.

Nicht-invasive Visualisierung der mikrovaskulären Nagelbettmorphologie bei Mäusen mittels Kapillaroskopie

Das Ziel des vorliegenden Protokolls ist es, Anweisungen und Richtlinien für die Beurteilung der körperlichen Gebrechlichkeit bei C57Bl/6x129J-Labormäusen bereitzustellen. Spezifische Details zu den einzelnen Maßen, die im Index der körperlichen Gebrechlichkeit verwendet werden, werden erläutert. Es werden auch verschiedene Methoden zur Berichterstattung über Gebrechlichkeitsergebnisse vorgestellt.

Gebrechlichkeitsbewertung in einem alternden Mausmodell

Diese Studie präsentiert einen in-vivo-Zwei-Photonen-Bildgebungsansatz zur Visualisierung der Strukturen von Axonterminals mit niedriger Schwelle von Mechanorezeptoren (LTMR) in der Vorderpfotenhaut von Mäusen. Durch wiederholte, hochauflösende Bildgebung einzelner Axone bietet diese Methode eine neue Grundlage, um die Struktur und Funktion des kutanen Sinneskreises während der Entwicklung und bei Erwachsenen zu untersuchen.

Intravitale Zwei-Photonen-Bildgebung der Morphologie des berührungssensorischen Axons in der Maushaut

Dieser Artikel beschreibt ein neuartiges Protokoll und Reagenz-Set für empfindliche Messung der neurotoxischen Wirkungen von Verbindungen und Behandlungen auf Co-Kulturen von Neuronen und Astrozyten mit High Content Analyse entwickelt. Die Ergebnisse zeigen, dass High Content Analyse eine spannende neue Technologie für die Neurotoxizität Beurteilung darstellt.

Eine Neuronale und Astrocyte Co-Kultur-Assay für High Content Analyse der Neurotoxizität

Lernen Sie eine Methode zur quantitativen Haardichteanalyse bei Mäusen mittels Graustufen-Lichtabsorption. Diese reproduzierbare Technik ermöglicht objektive Bewertung von Therapieeffekten bei Alopezie.

Eine neue Technik zur quantitativen Analyse von Haarausfall in Mäuse mit Graustufen-Analyse

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