Name: Entwicklung eines In vitro Modellsystem für die Untersuchung der Wechselwirkung von Equus Caballus IgE mit seinen hochaffinen Rezeptors FcsRI (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-11-01T15:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 31 s
Description: Erfahren Sie die Entwicklung eines Assays zur Messung IgE-abhängiger Mediatorfreisetzung aus RBL-Zellen für Allergieforschung bei Pferden. Diese Methode ermöglicht die Quantifizierung allergischer Reaktionen.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Die Autoren danken Dr. Lynda Partridge für die Bereitstellung von Ratschlägen und Laboreinrichtungen.

1) Herstellung der Zelllinie: <ol><li> Die Entwicklung der RBL-2H3.1 Zelllinie, Pferde FcsRI α: <ol><li> Mit grundlegenden Gewebekulturtechniken für Monolayer-Zelllinien, Transfektion Eltern RBL-2H3.1 Zellen unter Verwendung des pEE6 Plasmid, die Durchführung der Pferde FcεRIα Gens (GenBank: Y18204.1) 28. Hinzufügen 2 ug ul -1 der Plasmid-DNA auf 0,8 ml Zellen bei einer Dichte von 1.2 x10 &amp; sup7; Zellen ml -1. Elektroporieren der Zellen bei 250 V 960 uF mit einem 0,4 cm electrocuvette dann sofort auf Eis inkubieren für 10 min. </li><li> Auswahl der transformierten Zellen unter Verwendung von Medien, die 0,4 g Geneticin G418 Sulfat, sortiert dann die verbleibenden lebenden Zellen durch FACS durch Markieren sie mit einem Fluoreszenz IgE-Antikörper. Verwenden Sie die resultierende RBL-2H3.1 ausdrücken Pferde FcεRIα Zelllinie für die Untersuchung 2, 3. </li></ol></li><li> Pre-Test Antikörper Sensibilisierung: <ol><li ernte der rbl-2h3.1 ausdr pferde fc zellen aus einer konfluenten petrischale. waschen dann erneut die in kulturmedium bis zu zelldichte von>5 Zellen ml -1. </li><li> Hinzufügen des IgE von Interesse für die suspendierten Zellen zu einer Endkonzentration von 1 ng ml -1, dann die Platte 100 &amp; mgr; l der Zellen auf eine Platte mit 96 Vertiefungen in den Spalten 1-6 und bei 37 ° C + 5% CO 2 + 90% relative Luftfeuchte für 16 Stunden. Nach der Inkubationszeit und vor der Durchführung der Freisetzungstest, überprüfen Sie die Brunnen unter einem Mikroskop auf gut Konfluenz und Zellhaftung. </li></ol></li></ol> 2) Veröffentlichung Assay: <ol><li> Waschen der Zellen: <ol><li> Warm Freisetzungspuffer (25 mM PIPES, 120 mM Natriumchlorid, 5 mM Kaliumchlorid, 0,04 mM Magnesiumchlorid und 1 mM Calciumchlorid) bei 37 ° C bis zur sanften Waschen der Zellen zu ermöglichen. </li><li> Wash-Zellen durch Schwenken der Platte an Zellmedien zu entfernen und das Hinzufügen von 100 ul warm, 37 ° C, Freisetzungspuffer. Zweimal wiederholen. </li></ol></li><li> Antigen Herausforderung: <ol><li> Bereiten Sie eine serielle Verdünnung des Antigens (NIP-HSA oder DNP-HSA) von 0 ng ml -1, 0,1 ng ml -1, 1 ng ml -1, 10 ng ml -1, 100 ng ml -1, 1.000 ng ml -1, 10.000 ng ml -1 in Freisetzungspuffer und warm bei 37 ° C. </li><li> Nach dem zweiten Zellwäsche, entsorgen Sie die Medien und mit 100 ul der Antigenlösungen ersetzt. Sicherzustellen, daß Vertiefungen in der gleichen Reihe (A1-6 zum Beispiel) die gleiche Antigenkonzentration zu ihnen hinzugefügt. </li><li> Eine Negativkontrolle in der Zeile A durch Zugabe von 0 ng ml -1 Antigen eingestellt. Hinzufügen zunehmender Antigenkonzentration die Reihen (BG), gefolgt von Triton-x-Puffer (5% Triton X-100) in der Reihe H-Zellen, um die Zellen zu lysieren, um als positive Kontrolle verwendet werden. Inkubieren bei 37 ° C für 20 min, um damit die Zellen ihre Mediatoren freisetzen. </li></ol></li><li> Einrichten individuelle Wohlkontrollen: <ol><li> Nach der Inkubation mit einer Pipette 50 ul Zellüberstand auf die andere Hälfte der Platte (wells A1-6 bis A7-12 Vertiefungen, etc.). Verwerfen der restlichen 50 &amp; mgr; l des Überstands und Ersetzen mit 50 ul Triton-X-Puffer, um die Messung der Menge des freigesetzten Mediatoren in jede Vertiefung in den Spalten 7-12 als Prozentsatz der Gesamtmediatoren in den Zellen in Spalte 1-6 ermöglichen . </li></ol></li><li> Enzym-Substrat: </li><li> Dann werden 50 ul der β-Hexosaminidase-Substrat (50 mM 4-Nitrophenyl-N-acetyl-β-D-glucosaminid in DMSO durch Zugabe zu Citratpuffer 0,2 M Zitronensäure und 0,2 M Natriumacetat auf 2 mM verdünnt, pH 4,5) zu allen Vertiefungen, um die Umwandlung des Substrats zu 4-Nitrophenol durch das β-Hexosaminidase Enzyms erleichtert. Die Inkubation erfolgt bei 37 ° C für 2 Stunden. </li></ol><img alt="Abbildung 2.4.1" fo:content-width="4in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig241.jpg" width='"400"'><ol start="5"><li> Beenden der Reaktion: <ol><li> Stoppen der Reaktion durch Zugabe von 150 &amp; mgr; l Tris-Puffer (1 M Tris-HCl, pH 9) in jede Vertiefung wie die hohe pH-Wert des Puffers wird die Reaktion gestoppt und dann die 4-Nitrophenol in einer gelben Farbe. </li></ol></li><li> Das Lesen und die Analyse der Ergebnisse: <ol><li> Lesen der Platte unter Verwendung eines Platten Spektrophotometer bei 405 nm, die Absorption der gelben Farbe gemessen. Berechnet den Prozentsatz des freigesetzten β-Hexosaminidase Verwendung der folgenden Formel: </li></ol></li></ol><img alt="Abbildung 2.6.1" fo:content-width="1in" src="/files/ftp_upload/52222/52222fig261.jpg" width="100"><ol start="2"><li> Wenden Sie diese Formel in jede Vertiefung, wonach ein Mittelwert für jede Zeile übernommen. A1 und A7 repräsentieren die Lage der Vertiefungen der Platte mit 96 Vertiefungen. Eine Grafik mit Prozentsatz der β-Hexosaminidase Mitteilung (die Gesamtmediatorfreisetzung entspricht) against Antigenkonzentration 2, 3. </li></ol>

<ol><li>Taudou, G., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+the+Alpha+Chain+of+Human+Fc%CE%B5RI+in+Transfected+Rat+Basophilic+Leukemia+Cells%3A+Functional+Activation+after+Sensitization+with+Human+Mite-Specific+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Int+Arch+Allergy+Immunol%22%5BJournal%5D)">Expression of the Alpha Chain of Human FcεRI in Transfected Rat Basophilic Leukemia Cells: Functional Activation after Sensitization with Human Mite-Specific IgE.</a> Int Arch Allergy Immunol. 100 (4), 344-350 (1993).</li>
<li>Sabban, S. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Development+of+an+in+Vitro+Model+System+for+Studying+the+Interaction+of+EquuscaballusIgE+with+Its+High-Affinity+Fc%CE%B5RI+Receptor%22">Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity FcεRI Receptor</a>. , The University of Sheffield. Sheffield. (2011).</li>
<li>Sabban, S., Ye, H., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+an+in+Vitro+Model+System+for+Studying+the+Interaction+of+EquuscaballusIgE+with+Its+High-Affinity+Receptor+Fc%CE%B5RI%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Development of an in Vitro Model System for Studying the Interaction of EquuscaballusIgE with Its High-Affinity Receptor FcεRI.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 153 (1-2), 6-10 (2013).</li>
<li>Wilson, A. P. M., Pullar, C. E., Camp, A. M., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+IgE+mediates+stimulus+secretion+coupling+in+rat+basophilic+leukemia+cells+transfected+with+the+a+chain+of+the+human+high-affinity+receptor%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Human IgE mediates stimulus secretion coupling in rat basophilic leukemia cells transfected with the a chain of the human high-affinity receptor.</a> Eur J Immunol. 23, 240-244 (1993).</li>
<li>Hunter, M. J., Vratimos, A. P., Housden, J. E. M., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+canine-human+Fc+IgE+chimeric+antibodies+for+the+determination+of+the+canine+IgE+domain+of+interaction+with+Fc%CE%B5RI%CE%B1%5BTitle%5D)+AND+%22MolImmunol%22%5BJournal%5D)">Generation of canine-human Fc IgE chimeric antibodies for the determination of the canine IgE domain of interaction with FcεRIα.</a> MolImmunol. 45 (8), 2262-2268 (2008).</li>
<li>Rashid, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Review%3A+Diagnostic+and+therapeutic+applications+of+rat+basophilic+leukemia+cells%5BTitle%5D)+AND+%22MolImmunol%22%5BJournal%5D)">Review: Diagnostic and therapeutic applications of rat basophilic leukemia cells.</a> MolImmunol. 52 (3-4), 224-228 (2012).</li>
<li>Cohen, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Asthma+in+antiquity%3A+the+Ebers+Papyrus%5BTitle%5D)+AND+%22Allergy+Proc%22%5BJournal%5D)">Asthma in antiquity: the Ebers Papyrus.</a> Allergy Proc. 13 (3), 147-154 (1992).</li>
<li>Dudler, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+link+between+catalytic+activity%2C+IgE-independent+mast+cell+activation%2C+and+allergenicity+of+bee+venom+phospholipase+A2%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Immunol%22%5BJournal%5D)">A link between catalytic activity, IgE-independent mast cell activation, and allergenicity of bee venom phospholipase A2.</a> J. Immunol. 155, 2605-2613 (1995).</li>
<li>Machado, D. C., Horton, D., Harrop, R., Peachell, P. T., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Potential+allergens+stimulate+the+release+of+mediators+of+the+allergic+response+from+cells+of+mast+cell+lineage+in+the+absence+of+sensitization+with+antigen-specific+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Eur+J+Immunol%22%5BJournal%5D)">Potential allergens stimulate the release of mediators of the allergic response from cells of mast cell lineage in the absence of sensitization with antigen-specific IgE.</a> Eur J Immunol. 26 (12), 2972-2980 (1996).</li>
<li>Smyth, L. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Assessment+of+the+molecular+basis+of+pro-allergenic+effects+of+cigarette+smoke%5BTitle%5D)+AND+%22Environ+Sci+Technol%22%5BJournal%5D)">Assessment of the molecular basis of pro-allergenic effects of cigarette smoke.</a> Environ Sci Technol. 34 (7), 1370-1374 (2000).</li>
<li>Okada, H., Kuhn, C., Feillet, H., Bach, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+%27hygiene+hypothesis%27+for+autoimmune+and+allergic+diseases%3A+an+update%5BTitle%5D)+AND+%22ClinExpImmunol%22%5BJournal%5D)">The 'hygiene hypothesis' for autoimmune and allergic diseases: an update.</a> ClinExpImmunol. 160 (1), 1-9 (2010).</li>
<li>Eder, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Influence+of+environmental+and+genetic+factors+on+allergen-specific+immunoglobulin-E+levels+in+sera+from+Lipizzan+horses%5BTitle%5D)+AND+%22Equine+Vet+J%22%5BJournal%5D)">Influence of environmental and genetic factors on allergen-specific immunoglobulin-E levels in sera from Lipizzan horses.</a> Equine Vet J. 33 (7), 714-720 (2001).</li>
<li>Cook, W. R., Rossdale, P. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+syndrome+of+%27Broken+Wind%27+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+Royal+Society+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">The syndrome of 'Broken Wind' in the horse.</a> Proceedings of the Royal Society of Medicine. 56, 972-977 (1963).</li>
<li>Eyre, P., Lewis, A. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acute+systemic+anaphylaxis+in+the+horse%5BTitle%5D)+AND+%22Br.+J.+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Acute systemic anaphylaxis in the horse.</a> Br. J. Pharmacol. 48 (3), 426-437 (1973).</li>
<li>Bruggink, M. Global betting stable, but some countries suffer recession. , International Federation of Horseracing Authorities. Available from:
 
 <a target="_blank" href="http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664">http://www.horseracingintfed.com/Default.asp?section=Resources&area=0&story=664</a> (2009).</li>
<li>Wagner, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE+in+horses%3A+occurrence+in+health+and+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">IgE in horses: occurrence in health and disease.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 132 (1), 21-23 (2009).</li>
<li>Hellberg, W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+insect+bite+hypersensitivity%3A+immunoblot+analysis+of+IgE+and+IgG+subclass+responses+to+Culicoidesnubeculosus+salivary+gland+extract%5BTitle%5D)+AND+%22Vet.+Immunol.+Immunopathol%22%5BJournal%5D)">Equine insect bite hypersensitivity: immunoblot analysis of IgE and IgG subclass responses to Culicoidesnubeculosus salivary gland extract.</a> Vet. Immunol. Immunopathol. 113 (1-2), 99-112 (2006).</li>
<li>Schaffartzik, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Equine+insect+bite+hypersensitivity%3A+what+do+we+know%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Equine insect bite hypersensitivity: what do we know.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 147 (3-4), 113-126 (2012).</li>
<li>Künzle, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((IgE-bearing+cells+in+bronchoalveolar+lavage+fluid+and+allergen-specific+IgE+levels+in+sera+from+RAO-affected+horses%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vet+Med+A+PhysiolPatholClin+Med%22%5BJournal%5D)">IgE-bearing cells in bronchoalveolar lavage fluid and allergen-specific IgE levels in sera from RAO-affected horses.</a> J Vet Med A PhysiolPatholClin Med. 54 (1), 40-47 (2007).</li>
<li>Tahon, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+allergy+tests+compared+to+intradermal+testing+in+horses+with+recurrent+airway+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">In vitro allergy tests compared to intradermal testing in horses with recurrent airway obstruction.</a> Vet ImmunolImmunopathol. (1-2), 85-93 (2009).</li>
<li>Wagner, B., Radbruch, A., Rohwer, J., Leibold, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Monoclonal+anti-equine+IgE+antibodies+with+specificity+for+different+epitopes+on+the+immunoglobulin+heavy+chain+of+native+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Monoclonal anti-equine IgE antibodies with specificity for different epitopes on the immunoglobulin heavy chain of native IgE.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 92 (1-2), 45-60 (2003).</li>
<li>Wilson, A. D., Harwood, L., Torsteinsdottir, S., Marti, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Production+of+monoclonal+antibodies+specific+for+native+equine+IgE+and+their+application+to+monitor+total+serum+IgE+responses+in+Icelandic+and+non-Icelandic+horses+with+insect+bite+dermal+hypersensitivity%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Production of monoclonal antibodies specific for native equine IgE and their application to monitor total serum IgE responses in Icelandic and non-Icelandic horses with insect bite dermal hypersensitivity.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 112 (3-4), 156-170 (2006).</li>
<li>McAleese, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+expression+of+the+extra-cellular+part+of+the+alpha+chain+of+the+equine+high-affinity+IgE+receptor+and+its+use+in+the+detection+of+IgE%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+ImmunolImmunopathol%22%5BJournal%5D)">Cloning and expression of the extra-cellular part of the alpha chain of the equine high-affinity IgE receptor and its use in the detection of IgE.</a> Vet ImmunolImmunopathol. 110 (1-2), 187-191 (2006).</li>
<li>Ledin, A., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+therapeutic+antibody+responses+against+IgE+in+dogs%2C+an+animal+species+with+exceptionally+high+plasma+IgE+levels%5BTitle%5D)+AND+%22Vaccine%22%5BJournal%5D)">Generation of therapeutic antibody responses against IgE in dogs, an animal species with exceptionally high plasma IgE levels.</a> Vaccine. 24 (1), 66-74 (2006).</li>
<li>Siraganian, R. P., Hook, W. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Histamine+release+and+assay+methods+for+the+study+of+human+allergy%5BTitle%5D)+AND+%22Manual+of+Clinical+Immunology%22%5BJournal%5D)">Histamine release and assay methods for the study of human allergy.</a> Manual of Clinical Immunology. , American Society for Microbiology. Washington, D. C. (1980).</li>
<li>Neuberger, M. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+hapten-specific+chimaericIgE+antibody+with+human+physiological+effector+function%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">A hapten-specific chimaericIgE antibody with human physiological effector function.</a> Nature. 314 (6008), 268-270 (1985).</li>
<li>Bingham, B. R., Monk, P. N., Helm, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defective+Protein+Phosphorylation+and+Ca2%2B+Mobilization+in+a+low+secreting+variant+of+the+rat+basophilic+leukemia+cell+line%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Defective Protein Phosphorylation and Ca2+ Mobilization in a low secreting variant of the rat basophilic leukemia cell line.</a> The Journal of Biological Chemistry. 269 (30), 19300-19306 (1994).</li>
<li>McAleese, S. M., Halliwell, R. E., Miller, H. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cloning+and+sequencing+of+the+horse+and+sheep+high-affinity+IgE+receptor+alpha+chain+cDNA%5BTitle%5D)+AND+%22Immunogenetics%22%5BJournal%5D)">Cloning and sequencing of the horse and sheep high-affinity IgE receptor alpha chain cDNA.</a> Immunogenetics. 1 (51), 878-881 (2000).</li>
<li>Hongtu, Y. Study of the structure/function relationship in canine and human IgE as the basis for the development of rational therapeutic intervention strategies in allergic disease. , The University of Sheffield. (2010).</li>
<li>Sabban, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Towards+a+pan-anti-allergy+vaccine%5BTitle%5D)+AND+%22JIBTVA%22%5BJournal%5D)">Towards a pan-anti-allergy vaccine.</a> JIBTVA. 2 (2), 15-27 (2013).</li>
<li>Moran, G., Burgos, R., Araya, O., Folch, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+bioassay+to+detect+reaginic+antibodies+from+the+serum+of+horses+affected+with+recurrent+airway+obstruction%5BTitle%5D)+AND+%22Vet+Res+Commun%22%5BJournal%5D)">In vitro bioassay to detect reaginic antibodies from the serum of horses affected with recurrent airway obstruction.</a> Vet Res Commun. 34, 91-99 (2010).</li>
</ol>

Die Autoren erklären, dass sie in dieser Arbeit keine konkurrierenden finanziellen Interessen haben.

In Zusammenfassung der Ergebnisse dieser Untersuchung zeigten, dass bei RBL-Zellen, 2H3.1 equine FcεRIα mit equinen IgE durch ein Antigen sensibilisiert und herausgefordert, geben sie einen Spitzen Mediator-Freisetzung von 36,68% ± 4,88% der Gesamtmenge des innerhalb des Vermittlers Zellen, verglichen mit dem RBL-2H3.1 Elternzellen nicht exprimiert equine FcεRIα. Somit Dieser Test liefert ein nützliches Werkzeug für die Untersuchung und das Studium Pferde allergischen Reaktionen in vitro...

Allergie ist seit Jahrtausenden bekannt. Ein Asthma-Behandlung wurde in der antiken ägyptischen medizinischen Text als Papyrus Ebers (~ 1550 BCE) bekannt beschrieben und diskutiert pflanzliche Heilmittel, um es 7 zu behandeln. Heute Allergie ist als Typ I-Überempfindlichkeitsreaktion, wobei die T-Helferzell-Typ 2 (TH 2) Arm des Immunsystems steuert die Produktion von Immunglobulin E (IgE) Antikörper als Antwort auf Umweltantigene, Allergene genannt klassifiziert. Dies sind diverse Stoffe, die üblicherweise mit Zellen interagieren im Immunsystem und stimulieren die Synthese und Sekretion von proinflammatorischen Cytokinen, einschließlich IL-4 und Interleukin-13 8, 9 als weiß Partikel im Zigarettenrauch oder Dieselabgaspartikeln, die IgE-Synthese zu erhöhen 10. Der Anstieg der allergischen Manifestationen in Industrieländern in den letzten 50 Jahren hat sich eine Kombination der Wirkung zugeschriebenUmweltschadstoffe und ein Trend zu einer keim Umgebung, die die Immunantwort gegenüber einem Profil von TH 2 Zytokine überwog verschieben kombinieren, wie durch die &quot;Hygiene-Hypothese&quot; 11 vorgeschlagen. Wie oben erwähnt, sind Menschen nicht nur Säugern durch Allergie leidet. Insbesondere Pferden und Hunden entwickeln auch klassische allergische Reaktionen und eine Untersuchung von 12 zeigt, dass, wie beim Menschen, wird equine Allergie auf genetischen und Umweltfaktoren zurückzuführen. Als Folge präsentieren diese Tiere gute Modelle zur Untersuchung der Wechselwirkung zwischen genetischen und umweltbedingten Ursachen von Allergien, ihr Fortschreiten von Sensibilisierung gegen Krankheit und mögliche Interventionsstrategien einmal klinischen Manifestationen in gesetzt 1887 Stömmer war die erste Person, die Ähnlichkeit zwischen Mensch und Pferde-Asthma 13 zu beschreiben, ist die Wirkung von Histamin auf der Pferdeherzkreislaufsystemsehr ähnlich dem des Menschen 14. Pferde sind auch der Grundstein der Pferderennindustrie, die es wert USD 72 Milliarden mit einem Wettumsatz von US $ 115.000.000.000 jährlich 15. Die meisten zeitgenössischen Rennpferde sind Nachkommen von der geringen Zahl der arabischen Pferde von Lady Anne Blunt seit 1878 gezüchtet. Moderne Rennpferde werden häufig Inzucht für Performance Fähigkeiten auszuwählen. Sie sind anfällig für genetische Erkrankungen, von denen eine ihre Anfälligkeit für allergische Reaktionen zu montieren. Sie haben auch 1000 mal höhere Serum-IgE-Spiegel als selbst die am schwersten allergischen Menschen 16. Pferde allergischen Reaktionen sind in der Regel als Insektenstich Überempfindlichkeit (IBH) 17, 18 manifestiert. IBH Ergebnisse in Dermatitis durch Bisse bilden Insekten aus der Gattung Culicoides. Eine andere Form der Pferde-allergische Erkrankung ist rezidivierenden Atemwegsobstruktionen (RAO), dies in den Lungen und Atemwegen manifestiert. Es wird von Keuchen und Labor gekennzeichnetODER-verknüpft Atmung. RAO tritt häufig als Reaktion auf Sporen zu formen, und hohe allergenspezifische IgE-Spiegel haben bei Pferden, die an RAO in einer Studie 19 registriert worden, obwohl ein anderer Untersuchung nicht bestätigt diesen 20. Studien über equine Allergie drehte sich um die Versuch Überwachung und Neutralisieren equine IgE durch die Entwicklung anti equine IgE monoklonalen Antikörpern (mAb) 21, 22. Weiterhin die Studie von 23 diskutiert die Produktion der extrazellulären Domänen der α equinen Hochaffinitäts-Fc-Rezeptors Kette (FcεRIα) Rezeptors in einem Versuch zu detektieren und zu quantifizieren Pferdeserum IgE. Eine verwandte Studie von Ledin 24 bespricht einen neuen Ansatz bei der Neutralisierung Serum-IgE durch Priming des Immunsystems mit einem selbst / Nicht-Selbst Immunogen gerichtet. Alle diese Studien fehlte aber eine wirksame Assay, um die Sicherheit und Wirksamkeit der Testprotokolle. In diesem Artikel haben wir jetzt eine solche Assay sys präsentierentem für die Untersuchung der relevanten equinen System, in dem β-Hexosaminidase Release, als Indikator für die Zellmediator Degranulation wurde für RBL-Zellen, 2H3.1 equine FcεRIα beurteilt diagnostische und therapeutische Strategien. Dieses Protokoll basiert auf früheren Veröffentlichungen 25, 4, 5, 2, 3 das Engineering von RBL-Zellen mit den IgE-Bindungsdomäne des hochaffinen IgE-Rezeptors verschiedener Spezies kodiert, transfiziert Beschreibung basiert. Das Protokoll beschreibt, wie ein β-Hexosaminidase-Freisetzungstest durchzuführen, deren Ergebnisse sind als Mittelwert ± Standardabweichung von dreifachen Experimenten dargestellt. Der Freisetzungstest wurde zuerst von Siraganian entwickelt und Haken 25 Menschenallergie zu untersuchen. Das Labor Gruppe von Dr. Reuben Siraganian führte entwickelte auch die RBL-Zelllinie. Diese RBL Zellen wurden entwickelt, um die menschliche FcεRIα auszudrücken und das Protokoll wurde von 4 veröffentlicht. Das letzte Stückder Test wurde mit der Entwicklung des Plasmids pSV in der Veröffentlichung von Neuberger 26, die die Produktion von IgE-Antikörpern durch Klonierung ihrer Schwerketten-Gen stromabwärts von einem Maus-Gen für eine variable Region, die IgE das Hapten 4-Hydroxy-3 zielt beschrieben nitro-Phenacetyl (NP), war die resultierende chimäre Antikörper, vollständig funktionsfähig. Die Fähigkeit, jede IgE entwickeln die die gleichen Hapten, wobei auch die Klonierung seinen Rezeptor auf der Oberfläche der RBL-Zellen führte zu der Standardisierung des Assays so dass es ein nützliches Protokoll, um die Degranulation von Basophilen Zellen zu messen. Der Test funktioniert haben Vor- und Nachteile. Die Profis des Assays ist seine Anpassungsfähigkeit an irgendeinem Säugersystem verwendet werden, unser Labor ist somit benutzt, um die Degranulation der Mensch, Hund und Pferde Systeme zu testen, und dies ist erreichbar, einfach durch Synthetisieren des Organismus IgE und Klonieren seinen Rezeptor auf die Oberfläche der RBL-Zellen. Andererseits,die Nachteile des Assays ist, dass die RBL-Zellen sind sehr empfindlich gegen thermische, mechanische und PH ändert, so dass sie eine Veränderung der Degranulation Ebenen innerhalb des gleichen Assay zu ergeben. Es wird daher dringend empfohlen, dass die Tests werden immer dreifach wiederholt und dann ein Mittelwert von ihnen genommen. Darüber hinaus sind die RBL-Zellen sind in der Regel zu einer nicht-freisetzenden Phänotyp verschieben, wenn sie in der Gewebekultur für längere Zeiten (&gt; 10 Wochen) 27 übrig sind, was ihre Wartung umständlich. Sie sind auch anfällig für Infektionen durch Mycoplasma-Bakterien, die nicht von einem Lichtmikroskop sichtbar sind und nicht die Morphologie der Zelle ändern, würde aber ihre Degranulation Ebenen drastisch ändern. So regelmäßigen Mykoplasmen-Tests erforderlich.

<table><tbody><tr><td>RBL-2H3.1 Exprimieren von Pferdefc&epsilon; RI&alpha;</td><td>-</td><td>-</td><td>Hergestellt im Labor</td></tr><tr><td>Pferde-IgE Anti-NIP-HSA</td><td>-</td><td>-</td><td>Hergestellt im Labor</td></tr><tr><td>96-Well-Platte Sigma</td><td></td> <td>CLS3595-Mehrkanal-Pipette</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Anachem</td><td>-</td><td>-</td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Galaxy R</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>-4Hydroxy-5-iod-3-nitrophenylessigsäure</td><td>Cambridge Research Biochemicals</td><td>N-1070-1</td><td>NIP-OH wurde mit humanem Serumalbumin konjugiert, um NIP-HSA im Labor herzustellen</td></tr><tr><td>Dinitrophenyl konjugiert mit humanem Serumalbumin</td><td>Sigma</td><td>A6661</td><td>abgekürztes DNP-HSA-Plattenspektrophotometer</td></tr><tr><td></td><td>Anthos Labtec HT2</td><td>-</td><td></td></tr><tr><td>-Rohre</td><td>Sigma</td><td>P1851-Natriumchlorid</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>S7653-Kaliumchlorid</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>P9333-Magnesiumchlorid</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>M2670-Calciumchlorid</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>C1016-Triton</td><td></td></tr> <tr><td>x100</td><td>Sigma</td><td>X100-4-nitrophenyl</td><td></td></tr> <tr><td>N-acetyl-&beta;-D-Glucosaminid</td><td>Sigma</td><td>N9376</td><td>Stammlösung mit der Bezeichnung &beta;-Hexosaminidase-Substrat wurde 50mM in DMSO</td></tr><tr><td>Dimethylsulfoxid</td><td>Sigma hergestellt</td><td>D2650-Zitronensäure</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td></td> <td>251275-Natriumacetat</td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>S7670-Tris</td><td></td></tr> <tr><td></td><td>Sigma</td><td>T5941</td><td>-</td></tr></tbody></table>

entwicklung eines in vitro modellsystem für die untersuchung der wechselwirkung von equus caballus ige mit seinen hochaffinen rezeptors fcsri

Development of an in vitro model system for studying the interaction of Equus caballus IgE with its high-affinity receptor Fc&#949;RI

Die Interaktion von IgE mit seinem hochaffinen Fc-Rezeptor (FcεRI), gefolgt von einer antigenen Provokation, ist der Hauptweg bei IgE-vermittelten allergischen Reaktionen. Als Folge der hohen Affinitätsbindung zwischen IgE und FcεRI sowie der kontinuierlichen Produktion von IgE durch B-Zellen bleiben Allergien in der Regel ein Leben lang bestehen, ohne dass es derzeit eine dauerhafte Heilung gibt. Pferde, insbesondere Rennpferde, die häufig Inzucht betreiben, sind eine Säugetierart, die sehr anfällig für die Entwicklung von Überempfindlichkeitsreaktionen ist, die ihre Leistung ernsthaft beeinträchtigen können. Die physiologischen Reaktionen auf allergische Sensibilisierung bei Pferden spiegeln die bei Menschen und Hunden beobachteten Reaktionen wider. In dieser Arbeit wird die Entwicklung eines in situ Assay-Systems zur quantitativen Beurteilung der Freisetzung von Mediatoren der allergischen Reaktion im equinen System beschrieben. Zu diesem Zweck wurde das Gen, das für equine FcεRIα kodiert, in die Oberfläche von elterlichen Basophilen Leukämiezellen (RBL-2H3.1) transfiziert und exprimiert. Das Genprodukt der transfizierten equinen α-Kette bildete mit den endogenen Ratten-β- und γ-Ketten einen funktionellen Rezeptorkomplex 1. Das resultierende Assay-System ermöglichte eine Bewertung der Menge an Mediator, die von equinen FcεRIα-transfizierten RBL-2H3.1-Zellen nach Sensibilisierung mit equinem IgE und antigener Provokation unter Verwendung der β-Hexosaminidase-Freisetzung als Messwert sezerniert wurde 2, 3. Die Mediatorfreisetzung erreichte einen Spitzenwert von 36,68 % ± 4,88 % bei 100 ng ml-1 Antigen. Dieser Assay wurde von früheren Assays modifiziert, die zur Untersuchung allergischer Reaktionen von Menschen und Hunden verwendet wurden 4, 5. Wir haben auch gezeigt, dass diese Art von Assay-System vielfältige Anwendungen für die Entwicklung von diagnostischen Instrumenten und die Sicherheitsbewertung potenzieller therapeutischer Interventionsstrategien bei allergischen Erkrankungen hat 6, 2, 3.

Die Eltern RBL-2H3.1 Zellen und solche mit equinen FcεRIα Rezeptorgen transfiziert wurden zuerst mit Maus-IgE-anti-DNP-HSA sensibilisiert und mit dem DNP-HSA-Antigen herausgefordert. Maus-IgE bindet an den endogenen Rezeptor aus Ratte in beiden Zelllinien und dient als Kontrolle, um die Freisetzung Lebensfähigkeit der beiden Zelllinien zu testen, um Mediatoren (Figur 1 A) lösen damit. Dies ist eine wichtige Kontrolle und sollten routine da beim verlängert (&gt; 10 Wochen) Passage in Zellkultur durchgefü...

Die vorliegende Studie beschreibt die Entwicklung und Anwendung eines gentechnisch veränderten Assay-Systems, das auf der Transfektion von basophilen Leukämiezellen der Ratte mit dem equinen FcεRIα-Gen basiert. Transfizierte Zellen exprimieren einen funktionellen Rezeptor, an dem die Freisetzung von Mediatoren der allergischen Reaktion durch IgE und Antigen aktiviert werden kann.

Entwicklung eines In vitro Modellsystem für die Untersuchung der Wechselwirkung von Equus Caballus IgE mit seinen hochaffinen Rezeptors FcsRI

The interaction of IgE with its high-affinity Fc receptor (Fc&#949;RI) followed by an antigenic challenge is the principal pathway in IgE mediated ...

Das übergeordnete Ziel des folgenden Experiments ist es, die Menge der IgE-abhängigen Mediatorfreisetzung aus RAD Basophilen Leukämiezellen zu messen. Die Allergiesymptome werden durch die Freisetzung von Mediatoren wie Histamin verursacht. Nun ist Histamin nicht der einzige Vermittler, der von Basophilen freigesetzt wird, sondern Mastzellen.Die Summe aller Mediatoren, die von diesen Zellen freigesetzt werden, führt zu den Anzeichen und Symptomen einer sofortigen und verzögerten Überempfindlichkeit. Nun ist der Mensch nicht der einzige Organismus, der an Allergien leidet, auch Hunde und Pferde leiden. Um die Forschung weiterzuentwickeln und Behandlungen gegen Allergien wie Impfstoffe zu finden, ist ein Freisetzungsassay erforderlich, um die Menge der gegebenenfalls aus der Forschungsbehandlung freigesetzten Mediatoren zu quantifizieren.Dies ist der Grund für diesen Freigabe-Assay. Der RBL-Mediator-freigegebene Assay für das menschliche System wurde erstmals 1986 von Ian und Hook entwickelt und veröffentlicht. Es wurde später für das DOC-System und nun für das Pferdesystem entwickelt.Die Modifikationen sind so einfach wie das Ändern der Proteine, die von Interesse sind. Die Zelllinien-Neuigkeit war die Ratten-Baso-Leukämie oder RBL zwei H 3.1-Zelllinie, die die Alpha-Kette der Pferde-High-FNT-ffc-Serin-R-Eins-Rezeptoren auf eine Zelldichte von 500.000 Zellen pro Milliliter exprimiert. Geben Sie den interessierenden IgE-Antikörper bis zu einer Endkonzentration von einem Nanogramm pro Milliliter hinzu.Geben Sie 100 Mikroliter der Mischung in eine 96er Bodenplatte und inkubieren Sie 16 Stunden lang bei 37 Grad. Dadurch können die Zellen an der Well-Oberfläche haften und der Antikörper bindet an seine Rezeptorwaschung. Das Doppelte des Mediums, das den restlichen ungebundenen Antikörper und die toten Zellen enthält, mit 100 Mikrolitern warmem 37-Grad-Puffer zur Freisetzung.Entsorgen Sie den Puffer von der letzten Wäsche und ersetzen Sie ihn durch 100 Mikroliter des interessierenden Antigens in der interessierenden Konzentration. Nach einer 20-minütigen Inkubation bei 37 Grad werden 50 Mikroliter des SUP-Natin, das die Freisetzungsmediatoren enthält, in eine neue Vertiefung überführt und der verbleibende Überstand durch 50 Mikroliter Triton X-Puffer ersetzt, um die Zellen zu verlagern und die verbleibenden Mediatoren in den Zellen freizusetzen. Bei 50 Mikrolitern von 2 Millionen molaren beta hx.Viele Tage Substrat in Citratpuffer gelöst. Nach einer zweistündigen Inkubation bei 37 Grad geben Sie 150 Mikroliter Tris-Puffer in jede Vertiefung und färben Sie die Vertiefung gelb. Messen Sie die Farbabsorption bei 405 Nanometern nach 16 Stunden.Erwärmen Sie den Freisetzungs-Assay-Puffer, auch bekannt als Ian-Puffer, auf 37 Grad. Bereiten Sie auch den Konzentrationsgradienten des Antigens in Freisetzungspuffer bei Konzentrationen vor. Null 0,1, 1, 10, 100, 1000 und 10.000 Nanogramm pro Milliliter.Dann warm bei 37 Grad. Waschen Sie die Vertiefungen, indem Sie die Schale schnell schnippen, um das Medium zu entfernen, und fügen Sie vorsichtig 100 Mikroliter Warmfreisetzungspuffer in Richtung der Wände der Vertiefungen hinzu. Dies dient dazu, den Stress der Zellen durch Temperaturunterschiede zu reduzieren, die dazu führen, dass sie vorzeitig Mediatoren freisetzen.Das Geschirr sollte zweimal gespült werden. Den Puffer für die endgültige Freisetzung verwerfen, waschen und 100 Mikroliter Antigen hinzufügen, beginnend mit null Antigenkonzentration in Reihe A für die Negativkontrolle und entlang des Konzentrationsgradienten von Reihe B nach G und schließlich zu Triton X-Scheiben, Puffer in Reihe H. Das ist für die Positivkontrolle. Inkubieren Sie die Platte 20 Minuten lang bei 37 Grad.Dies ist der Punkt, an dem die Zellen nach der Inkubationszeit Mediatoren freisetzen. Übertragen Sie 50 Mikroliter der Flüssigkeit in jeder Vertiefung in die jeweilige Vertiefung. In den Spalten sieben bis 12 wird die verbleibende Flüssigkeit an den Positionen eins bis sechs vollständig herausgepeppt und durch 50 Mikroliter Triton X Lysepuffer ersetzt.Geben Sie 50 Mikroliter des vorbereiteten Substrats in alle 96 Vertiefungen der Schale. Inkubieren Sie zwei Stunden lang bei 37 Grad. Das Beta H wandelt das Substrat über viele Tage in vier Nitrophenole um.Nach der Inkubationszeit stoppen Sie die Reaktion, indem Sie 150 Mikroliter Tris-Puffer hinzufügen, wodurch die vier Nitrophenole eine gelbe Farbe annehmen. Lesen Sie die Platte mit einem Plattenspektralphotometer bei 405 Nanometern ab. Nach der Messung der Absorptionsdaten wird die Gesamtmenge der Mediatoren in den Zellen in den Vertiefungen Position A eins durch Multiplikation berechnet.Die entsprechende Vertiefung befindet sich an der Position a sieben mal zwei und addiert das Ergebnis zum Wert bei eins. Dies liegt daran, dass wir während des Experiments das Supinat, das die Freisetzungsmediatoren gegen A enthält, eins haben, als wir es in eine neue Bohrlochopposition übertragen haben. Eine Sieben.Wiederholen Sie die Berechnungen für die restlichen Vertiefungen. Berechnen Sie den Prozentsatz der Freisetzungsmediatoren in der Vertiefungsopposition A sieben aus den berechneten Gesamtmediatoren in den Zellen, indem Sie den Wert der Position A sieben mit zwei multiplizieren. Nochmals, weil wir während des Experiments das Supernat haben, das die Reese-Mediatoren enthält.Wenn wir es in ein neues übertragen, multiplizieren wir dieses Produkt mit 100 und dividieren dieses Produkt durch den entsprechenden Gesamtwert der Mediatoren in den Zellen für diese Position. Daraus ergibt sich der prozentuale Anteil der Freisetzungsmediatoren für den Wellengang. Wiederholen Sie die Berechnungen für den Rest der Vertiefungen, da die sechs Schwellungen in jeder Reihe durch die gleiche Konzentration des Antigendurchschnitts herausgefordert werden.Diese Werte und die Berechnung der Standardabweichung stellen Sie wie folgt in einem Diagramm dar. Die Grafik zeigt, dass mit zunehmender Antigenkonzentration mehr Mediatoren freigesetzt werden, bis sie einen Höchstwert von 100 Nanogramm pro Milliliter erreicht, wonach die Mediatorfreisetzung mit zunehmender Antigenkonzentration abnimmt. Das endgültige experimentelle Ergebnis sollte wie in diesen Diagrammen aussehen, wie in Grafik B zu sehen ist.Der Kontroll-Release-Assay in hellblau enthält keine IgE-Antikörper und zeigt daher keine Veränderung der Mediatorfreisetzung mit zunehmender Antigenkonzentration.Vergleichen Sie dies mit dem experimentellen Ergebnis in dunkelblau, das IgE-Antikörper enthalten könnte. Dies ist ein Beispiel für einen Anti-IgE-Impfstoff, der auf seine Sicherheit getestet wird. Aus dieser Grafik in Rot geht hervor, dass das Anti-IgE-Serum die Rezeptoren auf der Zelloberfläche vernetzt, was dazu führt, dass die RBL-Zellen degranulieren, genau wie bei der Positivkontrolle in Lila im Vergleich zur Negativkontrolle in Grau, was diesen Impfstoff unsicher macht.Dieser Assay ist sehr nützlich, da er die Freisetzung von Mediatoren oder deren Verzögerung beim Testen potenzieller Antiallergika oder Impfstoffe messen kann. Kann auch für das menschliche Hunde- oder Pferdesystem angepasst werden, wie gezeigt. Der Assay kann die erfolgreiche oder erfolglose Blockierung der Mediatorfreisetzung beim Testen von Antiallergie-Antikörpern bestimmen.

development-an-vitro-model-system-for-studying-interaction-equus

Research

Forschung

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologie und Infektion

Dieses Video zeigt FcγRIIIa-gesteuerte Ereignisse, die durch therapeutische Antikörper in menschlichen natürlichen Killerzellen ausgelöst werden. Die künstliche Stimulationsplattform erleichtert die Erforschung nachgeschalteter Effektorfunktionen, einschließlich der Umlagerung des Zytoskeletts, der Degranulation, der Chemokin-/Zytokinproduktion und der Signalwege, die durch die FcγRIIIa- und Fc-Anteile von Antikörpern vermittelt werden, die an der Bindung beteiligt sind.

Ein in vitro künstlicher Aktivierungsassay zur Untersuchung der Fc-Rezeptoraktivierung durch Antikörper

Experimentelle Autoimmun-Enzephalomyelitis (EAE) ist ein etabliertes Tiermodell für multiple Sklerose. C57BL / 6 Mäuse mit Myelin-Oligodendrozyten-Glykoprotein (MOG)-Peptid 35-55 (MOG 35-55) immunisiert, was zu einer aufsteigenden schlaffen Lähmung durch autoreaktive Immunzellen im zentralen Nervensystem verursacht. Protokolle für die Krankheitsinduktion und Überwachung diskutiert.

Myelin Oligodendrozyten Glykoprotein (MOG<sub&gt; 35-55</sub&gt;) Induzierten experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis (EAE) in C57BL / 6 Mäuse

Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Entwicklung und Validierung einer quantitativen PCR-Methode, die zum Nachweis und zur Quantifizierung von EHV-2-DNA in Atemwegsflüssigkeiten von Pferden verwendet wird. Das EHV-2 qRT-PCR-Validierungsprotokoll umfasst ein dreiteiliges Verfahren: Entwicklung, Charakterisierung des qRT-PCR-Assays allein und Charakterisierung der gesamten Analysemethode.

Entwicklung und Validierung einer quantitativen PCR-Methode für Equiden Herpesvirus-2-Diagnose in Atem Flüssigkeiten

Eine Primärkultur von Rinder Endothelzellen wurde verwendet, um den Mechanismus der Cornea-Endothelzellen-mesenchymale Transition zu untersuchen. Weiterhin wurde eine Ratte Hornhautendothel cryoinjury Modell kornealen Endothel-mesenchymale Transition in vivo zu demonstrieren.

In vitro und in vivo Modelle Corneal Endothelial-mesenchymale Transition zu studieren

In diesem Bericht stellen wir ein Protokoll vor, das es dem Prüfarzt ermöglicht, ein Mausmodell der intraokularen Uveitis zu erstellen. Dieses etablierte Modell, das gemeinhin als experimentelle Autoimmun-Uveitis (EAU) bezeichnet wird, erfasst viele Aspekte menschlicher Erkrankungen. Im Folgenden beschreiben wir, wie das Fortschreiten der Krankheit mit mehreren Ablesungen induziert und überwacht werden kann.

Experimentelle autoimmune Uveitis: Ein intraokulares entzündliches Mausmodell

Um eine experimentelle autoimmune Enzephalomyelitis, ein Tiermodell für Multiple Sklerose, zu induzieren, werden Mäuse mit einer Wasser-in-Öl-Emulsion immunisiert, die ein Autoantigen und ein komplettes Freund-Adjuvans enthält. Während für die Herstellung dieser Emulsionen mehrere Protokolle existieren, wird hier ein schnelles, einfaches und standardisiertes Homogenisierungsprotokoll für die Emulsionsherstellung vorgestellt.

Eine schnelle, einfache und standardisierte Homogenisierungsmethode zur Herstellung von Antigen/Adjuvans-Emulsionen zur Induktion experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis

Enteroide entwickeln sich zu einem neuen Modell für die Untersuchung der Gewebephysiologie und Pathophysiologie, der Arzneimittelentwicklung und der regenerativen Medizin. Hier beschreiben wir ein bovines primäres 2D-enteroides Kultursystem, das eine Co-Kultivierung mit relevanten Gewebezelltypen ermöglicht. Dieses Modell bietet einen translationalen Vorteil für die gastrointestinale Forschungsmodellierung.

Generierung eines bovinen primären enteroiden zweidimensionalen Monolayer-Kultursystems für Anwendungen in der translationalen biomedizinischen Forschung

Dieses Protokoll beschreibt die detaillierten Schritte der Immunelektronenmikroskopie vor der Einbettung, wobei der Schwerpunkt auf der Erforschung synaptischer Schaltkreise und der Proteinlokalisierung in der Netzhaut liegt.

Untersuchung von retinalen Schaltkreisen und molekularer Lokalisierung durch Voreinbettung der Immunelektronenmikroskopie

Enterische Gliazellen werden zunehmend für ihre Rolle bei der Darmhomöostase und bei Krankheitsprozessen, einschließlich postoperativer Komplikationen, anerkannt. Equidenpatienten, die sich von einer explorativen Notfall-Laparotomie erholen, leiden unter einem hohen Risiko für entzündliche postoperative Erkrankungen, was die Bedeutung der Etablierung einer wiederholbaren enterischen Glia-Primärzellkultur für die Studie unterstreicht.

Enterische Gliakultur bei Pferden und Anwendung zur Untersuchung eines neuronalen Entzündungsmechanismus bei Pferdekoliken

Die Studie zeigt die Rolle der Haut bei der Modulation der Immunantwort bei Mäusen durch epikutane (EC) Immunisierung. Die EC-Immunisierung mit einem Proteinantigen kann in Kombination mit erregerassoziierten molekularen Mustern Immunantworten bei Kontaktüberempfindlichkeit unterdrücken oder die hautinduzierte Suppression rückgängig machen. Die EC-Immunisierung ist vielversprechend und bietet einen wirksamen, nadelfreien Ansatz für die Immuntherapie.

Mausmodell der epikutan induzierten Immunmodulation

Erfahren Sie die Entwicklung eines Assays zur Messung IgE-abhängiger Mediatorfreisetzung aus RBL-Zellen für Allergieforschung bei Pferden. Diese Methode ermöglicht die Quantifizierung allergischer Reaktionen.

Entwicklung eines In vitro Modellsystem für die Untersuchung der Wechselwirkung von Equus Caballus IgE mit seinen hochaffinen Rezeptors FcsRI (Video) | JoVE Journal

Entwicklung eines In vitro Modellsystem für die Untersuchung der Wechselwirkung von Equus Caballus IgE mit seinen hochaffinen Rezeptors FcsRI

Weitere Videos entdecken