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DOI: 10.3791/52927-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
Hier stellen wir ein Protokoll zur Induktion von aktivitätsbasierter Anorexie (ABA) bei weiblichen jugendlichen Mäusen vor. ABA ist ein Zustand der Hyperaktivität, der durch die Auferlegung von Nahrungsbeschränkungen für Nagetiere mit Zugang zu einem Laufrad hervorgerufen wird. Dieses Phänomen wird als Modell verwendet, um die zugrundeliegende Neurobiologie der Anorexia nervosa zu untersuchen.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, bei jugendlichen weiblichen Mäusen aktivitätsbasierte Anorexie zu induzieren. Dies wird erreicht, indem die Mäuse zunächst an ein Laufrad herangeführt und mindestens drei Tage lang kontinuierlich ihre Laufradaktivität überwacht wird. Als nächstes werden die M auf einen eingeschränkten Zeitplan für den Zugang zu Nahrungsmitteln gesetzt, und Änderungen in ihrem freiwilligen Radlauf werden aufgezeichnet.
Letztendlich kann dieses aktivitätsbasierte Anorexie-Modell zeigen, dass neurobiologische Veränderungen mit Veränderungen im Verhalten eines Tieres verbunden sind, wenn es nur eingeschränkten Zugang zu Nahrung hat. Ich hoffe, dass dieses Modell der aktivitätsbasierten Anorexie dazu beitragen wird, die Therapie der Anorexia nervosa zu verbessern, da es diskrete individuelle Unterschiede in der Neurochemie und Neuroanatomie identifiziert, die der Resilienz und Vulnerabilität gegenüber Anorexia nervosa zugrunde liegen. Obwohl diese Methode Einblicke in die Anorexia nervosa geben kann, kann sie auch auf andere Krankheiten angewendet werden, die mit Angstzuständen einhergehen.
Im Allgemeinen wird diese Methode Schwierigkeiten haben, da die Anfälligkeit jedes Tieres für die Aktivität aufgrund von AIA sehr unterschiedlich ist. So ist eine genaue Überwachung des Gewichtsverlusts, des Fressens und der Aktivität des Tieres erforderlich, oder die Tiere können mit der Einrichtung beginnen. Stellen Sie den Computer und den USB-Hub im Tierraum auf, fern von fließendem Wasser und Fußgängerverkehr, aber dennoch in Reichweite der Sender, die von den Laufrädern entfernt sind.
Verwenden Sie auch ein Notstromnetz für den Computer und den USB-Hub, indem Sie die Schalter am Hub verwenden. Stellen Sie die Kanalnummern so ein, dass sie den Kanalnummern aller Laufräder entsprechen, die überwacht werden. Starten Sie nun die Laufrad-Manager-Software und bestätigen Sie, dass die Software jeden Sender erkennt.
Jedes Rad wird im Programmfenster aufgelistet. Unter dem Kopfrad Sensoren. Die Software vergibt automatisch eine ID-Nummer an jedes Rad.
Es kann hilfreich sein, diese Zahl auf dem Rad zu notieren. Wenn ein Rad nicht erkannt wird, tauschen Sie die Batterien des Rades aus. Bereiten Sie als Nächstes einen Käfig für jede Maus vor, mit Einstreu, Nestchen, freiem Zugang zu Wasser und einem Laufrad.
Das Laufrad muss sich frei bewegen, ohne die Käfigwände, den Futterkorb oder die Käfigoberseite zu berühren. Vergewissern Sie sich außerdem, dass die Software die Radzählungen aktualisiert. Zur Eingewöhnung setzen die Tiere jede Maus einzeln in einem Käfig mit Laufrad ein und haben Zugang zu ca. 100 Gramm Trockenfutter und 50 Gramm Nassfutter im Käfig.
In der Software. Starten Sie die Datenerfassung und -speicherung, indem Sie Erfassung starten auswählen. Wählen Sie im Dateimenü das Verzeichnis aus, in dem die Daten gespeichert werden sollen, bis sie gestoppt werden.
Die Software zeichnet jeden Tag kurz vor Beginn der Dunkelphase des Lichtzyklus kontinuierlich auf. Wiegen Sie das Tier, wiegen Sie Nassfutter und wiegen Sie Trockenfutter. Füllen Sie den Trockenfutterbehälter auf, wenn er weniger als 50 Gramm enthält, und setzen Sie den Nassfutterbehälter wieder ein.
Wenn das Futter austrocknet oder mit Einstreu verschmutzt wird, erfassen Sie gleichzeitig die Radzahl manuell. Um die digitalen Daten am ersten Tag der Futtereinschränkung zu sichern, entfernen Sie das gesamte Nass- und Trockenfutter in der Mitte des Lichtzyklus des Tages aus dem Käfig. Später, zu Beginn der dunklen Zeit, notieren Sie das Gewicht des Tieres und die Anzahl der Räder.
Geben Sie dann ca. 50 Gramm Trockenfutter in den Trichter und geben Sie fünf Gramm Nassfutter in ein Wannenschiffchen. Bereiten Sie als Nächstes für jedes Tier einen frischen Käfig mit Einstreu und Nestchen vor. Nach zwei Stunden mit dem Futtertransfer, dem Laufrad und ein paar Handvoll schmutziger Einstreu in den vorbereiteten Käfig.
Setzen Sie die Mäuse ohne Futter in die neuen Käfige um. Notieren Sie am Ende des Zeitraums für den Zugang zu Lebensmitteln das Gewicht der UNE-Lebensmittel und die Anzahl der Räder. Wiederholen Sie diesen Vorgang täglich für die Dauer des Experiments.
Wenn ein Tier zu irgendeinem Zeitpunkt unter 75 % seines Ausgangsgewichts fällt, ist es aus dem Versuch zu entfernen. Andere Anzeichen für übermäßiges Hungern, die darauf hindeuten, dass das Tier aus dem Versuch entfernt werden sollte, sind eine gebeugte Haltung und die Unfähigkeit, sich im Käfig zu bewegen. Das Tier kann sich kalt anfühlen und während der zwei Stunden, in denen es Zugang zu Futter hat, nicht fressen.
Beenden Sie nach drei Tagen Nahrungseinschränkung das Experiment. Entweder das Tier einschläfern, um Gewebe zu entnehmen, oder lassen Sie die Tiere sich erholen. Für weitere Verhaltenstests in der Software klicken Sie auf die Option "Erfassung beenden" im Dateimenü.
Die Daten werden nun in einer WLS-Datei in dem von Ihnen gewählten Verzeichnis gespeichert. Zu Beginn des Experiments entfernen Sie die Laufräder aus den Käfigen und entfernen anschließend deren Batterien. Genesenden Tieren sollte ad libido der Zugang zu Nahrung gestattet werden. Exportieren Sie nun die Daten in eine Tabelle.
Wählen Sie im Dateimenü die Option "Exportieren" und wählen Sie in der Option "Quelldatendatei" die gewünschten WLS-Dateien aus. Wählen Sie als Nächstes das Start- und Enddatum und die Uhrzeit aus und wählen Sie schließlich jeden Radsensor für den Export aus. In der Liste der Radsensoren können die Daten dann bei Bedarf analysiert werden, um die Wirkung von a b zu untersuchen.
In einer ähnlichen Population wie bei der menschlichen Anorexia nervosa wurden weibliche jugendliche Mäuse bei P 36 an das Rad gewöhnt. Kurz nach Beginn der Pubertät wurde mit dem Nahrungsentzug an P 40 begonnen und ihr Körpergewicht stark reduziert. Die Kontrolltiere hatten keine Laufräder oder Futtereinschränkungen. Die ausgehungerten Tiere rannten nach dem Einsetzen der Nahrungseinschränkung exzessiv.
Eine detaillierte Analyse der Radaktivität zeigte ein zirkadianes Muster. Kurioserweise entschieden sich hungernde Tiere auch beim Zugang zu Nahrung für das Laufrad. Nachdem die Futterrestriktion begonnen hatte, zeigten einige Tiere kurz vor dem Zeitpunkt der Fütterung eine Zunahme der Aktivität, die als Futter bezeichnet werden kann. Antizipative Aktivität, die man meistert, um eine Kohorte einzurichten, die sich einem aktivitätsbasierten Szenario unterzieht, kann in ein paar Stunden erreicht werden, wenn es richtig durchgeführt wird.
Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, die Radzählungen mindestens einmal pro Tag manuell aufzuzeichnen. Eine unerwartete Unterbrechung der Stromleitung oder eine Erschöpfung der Batterien kann die computergenerierte Radzählung nach diesem Verfahren stören. Andere Methoden wie Immunzytochemie, Elektrophysiologie und Verhaltenstests können durchgeführt werden, um zusätzliche Fragen zu beantworten, z. B. wie sich die aktivitätsbasierte Anorexie-Induktion auf die Anatomie, die biophysikalischen Eigenschaften und das Verhalten des Gehirns auswirkt.
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