Effiziente Mammalian Cell Expression und Single-step Reinigung der extrazellulären Glykoproteinen für die Kristallisation

Das übergeordnete Ziel dieser Säugetierproteinexpressionstechnik ist es, Milligrammmengen nativ gefalteter Proteine herzustellen, die für strukturelle, biophysikalische und funktionelle Studien geeignet sind. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass es sich um ein schnelles und unkompliziertes Protokoll zur Gewinnung von sekretierten Säugetierproteinen und einer für Strukturstudien erforderlichen Reinheitskonzentration handelt. Im Allgemeinen stellen wir fest, dass die meisten Probleme mit der Proteinausbeute auf die Gesundheit und Lebensfähigkeit der Zellen zurückzuführen sind.

Durch die genaue Überwachung der Lebensfähigkeit der Zellen und auch der Überwachung des Zuckergehalts in den Medien verbessern Sie sowohl die Proteinausbeute erheblich als auch die Nützlichkeit der Zellen. Es ist auch sehr wichtig, die Zelldichte zu überwachen. Wir stellen fest, dass, wenn die Zellen zu irgendeinem Zeitpunkt vor der Transfektion 2 Millionen Zellen pro Milliliter überschreiten, die Proteinausbeute stark reduziert wird. Um eine großmaßstäbliche Kultur von 2 93 F-Zellen durchzuführen, ergänzen Sie einen Liter 2 93 F-Medien mit 10 Millilitern 100 x Glutamin und fünf Millilitern 100 x Pen Streptokokken.