Name: Mess Progressive neurologische Behinderungen in einem Mausmodell der Multiplen Sklerose (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-11-14T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 11 s
Description: Erfahren Sie die optimierte Rotarod-Methode zur objektiven Messung progressiver neurologischer Beeinträchtigungen bei TMEV-infizierten Mäusen. Dieses Protokoll ermöglicht zuverlässige Bewertungen motorischer Funktionen für Therapiestudien.

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Die Autoren danken den Mitarbeitern des Center for Comparative Medicine and Research (CCMR) in Dartmouth für ihre fachkundige Betreuung der Mäuse, die für diese Studien verwendet wurden. Die Autoren danken auch Emily Clough für ihre hervorragende administrative Unterstützung.

Alle tierischen Arbeit nutzt Protokolle, die von der Institutional Animal Care und Use Committee (IACUC) bei Geisel School of Medicine an der Dartmouth überprüft und genehmigt. 1. Die Maus-Modell <ol><li> Die Induktion von TMEV-induzierte demyelinisierende Erkrankung <ol><li> Verschieben Sie die Käfige 4- bis 6-Wochen alte weibliche SJL / Jhan Mäuse aus dem Rack zu einem komfortablen Arbeitsraum enthält. Markieren die Mäuse (zB mit einer Ohrmarke oder Ohr punch) für individuelle Bewertung der klinischen und histologischen Krankheits zu ermöglichen. </li><li> Zeichnen Sie 30 ul TMEV infizieren Lager (2 × 10 6 Plaque - bildende Einheiten; PFU) in PBS in eine 29-Gauge - Insulin - Spritze und Nadel. </li><li> Bereiten Sie die Anästhesiegas-Maschine: das System überprüfen das Vorhandensein von ausreichenden Mengen an Sauerstoff und Isofluran für die Dauer des Verfahrens zu gewährleisten. </li><li> Schalten Sie den Durchflussmesser auf 1 L / min. Legen Sie das Tier in die Induktionskammer und versiegeln die Spitze. Schalten Sie die vaporizer auf 3,5% und das Tier bis zur Liege überwachen. </li><li> Nehmen Sie das Tier aus der Kammer und testen Sie die Maus durch die Fußballen Kneifen ausreichende Anästhesie zu gewährleisten. Der Mangel an Reaktion auf eine starke Prise zeigt eine ausreichende Anästhesie. </li><li> Reinigen Sie die Injektionsstelle mit 70% Isopropylalkohol. </li><li> Injizieren Sie den 30 ul TMEV infizieren Lager in die rechte Gehirnhälfte durch freihändig Injektion (Abbildung 1). Die Injektionsstelle ist etwa auf halbem Weg zwischen dem Auge und Ohr Linie und in unmittelbarer Nähe der Mittellinie. </li><li> Bringen Sie die Maus an seinen Haltekäfig einmal voll wach und mobil (in der Regel 3 bis 5 min). </li><li> Euthanize Mäusen durch Ausbluten oder Herzperfusion 3 bis 6 Monate nach TMEV-Infektion, je nach der Schnelligkeit, mit der Entwicklung der Krankheit. </li></ol></li></ol> 2. Rotarod Analyse <ol><li> Der Rotarod Vorrichtung <ol><li> Test-Mäuse vor TMEV Infektion sie mit dem vertraut zu machenMaschine und ihre normalen Ausgangs Balance Koordination und Motorsteuerung zu beurteilen. </li><li> Starten Sie das Anpassungsprotokoll auf -5 Tage nach der Infektion (dpi, dh 5 Tage vor TMEV Infektion). </li><li> Erlauben die Mäuse für mindestens 30 min vor dem Rotarod-Tests, um den Testraum zu akklimatisieren, damit sie an die Umgebung anzupassen. </li><li> Stellen Sie sicher , dass sowohl die Rotarod - Einheit und der Computer eingesteckt sind und die miteinander verbunden sind (Figur 2). </li><li> Die Rotarod mit den -5 dpi Trainingsprotokollparameter voreingestellt, wie in Tabelle 1 beschrieben. </li><li> Speichern Sie die Arbeitsdatei mit dem Datum und Identifikationsinformationen. </li><li> Bewegen Sie den Käfig der Kader enthält neben dem Rotarod aus dem Rack an einem Tisch getestet werden. Die Mäuse werden in der Regel in Trupps von 4 getestet. </li><li> Pick-up eine Maus am Schwanz und legen Sie es auf der Stange, mit Blick weg vom Bediener. Wiederholen Sie dies für den zweiten bis vierten Maus. Wenn eine Maus falls oder springt, legen Sie sie in der Spur auf dem Rotarod zurück, bis alle Mäuse in der Lage sind. Ignorieren, wenn irgendwelche Mäuse herum drehen den Bediener zu stellen. </li><li> Nach dem Laden alle Mäuse, drücken Sie die &quot;Enter&quot; Taste, um das Experiment zu starten. Beachten Sie die Timer automatisch und die Umdrehungen pro Minute (rpm) auf dem Display für jede Spur beginnen. <ol><li> Da jedes Tier von der Stange fällt, die Geschwindigkeit der Stange aufzunehmen, sowie auch die Dauer der Zeit, zu der Zeit des Falls, das Tier auf der Stange geblieben. Der Stab wird weiter drehen, bis das letzte Tier aus dem Gestänge gefallen ist. </li></ol></li><li> Nachdem alle Mäuse gefallen sind, ein Gewebe verwenden, jede fäkale Boli und Urin von der Stange zu entfernen. Das Vorhandensein von Urin und Fäkalien können die Fähigkeit der Mäuse zu greifen beeinflussen die Stange. <ol><li> Nach einer 3-min Ruhe, geben die Mäuse eine zweite und dann eine dritte Versuch. Die maximale Zeit pro Einzel Studie beträgt 240 sec. Verwalten insgesamt 3 Versuche bei jedem Testtag. </li></ol></li><li> Bringen Sie die Mäuse in ihre Heimat Käfig und bringt sie auf die Zahnstange zurück. Am Ende der experimentellen Sitzung, reinigen Sie die Rotarod mit Seife und Wasser alle Fäkalien aus der Maschine zu entfernen. </li><li> Wischen Sie die Grundplatte mit Ethanol 70%. Sprühen Sie die gesamte Maschine mit Chlordioxid nach unten zu desinfizieren. </li><li> An den Tagen , - 4, - 3, - 2 und - 1 pi, die Rotarod mit den entsprechenden Trainingsprotokollparameter voreingestellt, wie in Tabelle 1 beschrieben, und wiederholen Sie die Schritte 2.1.2 bis 2.1.12. </li><li> Nachdem die Basismaßnahmen zu erhalten, infizieren die Mäuse mit TMEV. Lassen Sie einen 6-Tage pi Erholungsphase. </li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td rowspan="2"> Protokoll </td><td rowspan="2"> Testing Day </td><td rowspan="2"> Frequenz </td><td rowspan="2"> Startgeschwindigkeit (rpm) </td><td rowspan="2"> MaxSpeed ​​(rpm) </td><td> Beschleunigung </td><td> Versuche </td><td> ES I </td></tr><tr><td> (rpm / sec) </td><td> (N x sec) </td><td> (min) </td></tr><tr><td rowspan="4"> Ausbildung </td><td> - 5 dpi </td><td> 1 Tag </td><td> 1 </td><td> 12 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 sec </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 4 dpi </td><td> 1 Tag </td><td> 1 </td><td> 13 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 sec </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 3 dpi </td><td> 1 Tag </td><td> 1 </td><td> 14 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 sec </td><td> 3 </td></tr><tr><td> - 2; - 1 dpi </td><td> 1 Tag </td><td> 5 </td><td> 40 </td><td> 01/03 </td><td> 3x240 sec </td><td> 3 </td></tr><tr><td rowspan="2"> Experimental </td><td> Von 7 bis 50 dpi </td><td> 2 Wochen </td><td>5 </td><td> 40 </td><td> 30.05 </td><td> 3x240 sec </td><td> 3 </td></tr><tr><td> Von 51 bis 150 dpi </td><td> 1 Woche </td><td> 5 </td><td> 40 </td><td> 30.05 </td><td> 3x240 sec </td><td> 3 </td></tr></tbody></table> Tabelle 1: Rotarod Parameter im Training und experimentelle Protokolle. <ol start="2"><li> Die Rotarod experimentelles Protokoll <ol><li> Auf +7 dpi, die Rotarod mit den entsprechenden experimentellen Protokollparameter voreingestellt, wie in Tabelle 1 beschrieben. Wiederholen Sie die Schritte 2.1.2 bis 2.1.10. </li><li> Am Ende der Studie # 3, jede Maus wiegen und eine Notiz des Körpergewichts auf dem Datenblatt zu machen. Reinigen und desinfizieren Sie die Rotarod gemäß Schritt 2.1.11 und 2.1.12. </li><li> Testen der Mäuse zweimal pro Woche für die folgenden 6 Wochen, wie oben beschrieben. Nach 6 Wochen (in denen die Mäuse wahrscheinlich eine Plateauphase erreicht haben) 8,9, testen Sie die Mäuse einmal pro Woche mit der gleichen Experimental-Protokoll. Die tatsächliche Testprotokoll dauert im Durchschnitt 150 Tage, abhängig von dem spezifischen Krankheitsverlauf. </li></ol></li><li> Neurologische Funktions Index <ol><li> Exportieren Sie die Rohdaten in ein Tabellenkalkulationsdatei und die Ergebnisse zu analysieren. </li><li> Express - Daten als Laufzeit (3A): Dies ist die normale Laufzeit plus die passive Rotationszeit minus der Drehverzögerungszeit (Tabelle 2) 10. Berechnen Sie die mittlere Zeit der drei Versuche pro Tag ausgeführt wird. </li><li> Express die Daten als neurologische Funktions Index (NFI, 3B). <ol><li> Berechnen Sie die Basisleistung Schwelle jeder einzelnen Maus. Die Baseline - Performance - Grenzwert wird als Mittelwert aller Laufzeiten von Tag + 15 bis + 45 pi 6,7 bestimmt. </li><li> Berechnen Sie die NFI als Mittelwert der drei letzten Mal durchschnittliche Lauf dividiert durch die Basisleistungsschwelle dieser spezifischen Maus 6,7 &lt;/ Sup&gt;. HINWEIS: Wenn die Laufzeiten für eine Maus am Tag getestet + 72, + 76 und + 79 pi sind 55 sec, 45 sec und 50 sec, und der Basiszeit für die gleiche Maus betrug 135 sec, die NFI für die Maus auf +79 dpi wird [(45 + 50 + 55) / 3] / 135 oder 0,37. </li></ol></li><li> Express die Daten als ein bereinigtes NFI (adjNFI; 3C): die LFI - Daten von einer Bevölkerung Wert für den einzigen Experiment einzustellen. <ol><li> Berechnen Sie die adjNFI durch die NFI-Wert durch die durchschnittliche NFI von der scheinbehandelten Gruppe an diesem bestimmten Tag erhalten zu teilen. </li></ol></li></ol></li></ol><table border="1" fo:keep-together.within-page="1" fo:keep-with-next.within-page="always"><tbody><tr><td> Begriff </td><td> Definition </td></tr><tr><td> Normale Laufzeit </td><td> Die Gesamtzeit , die Maus auf dem rotierenden Stab aktiv ausgeführt damit verbringt, das heißt, die Latenz zu fallen. </td></tr><tr><td> Passive Drehzeit </td><td> die aBerg der Zeit hat sich die Maus auf dem Stab in der passiven Rotationsmodus geblieben. </td></tr><tr><td> Rotation Verzögerungszeit </td><td> Die Menge an Zeit, die Maus auf der Stange während der passiven Rotationsmodus bleibt </td></tr><tr><td> Passive Rotationsmodus </td><td> Wenn packt die Maus, um die Stange und dreht sich ohne ambulate zu müssen. </td></tr><tr><td> Gesamtsitzungszeit </td><td> Gesamtzeit bleibt die Maus auf dem rotierenden Stab während der Sitzung. </td></tr><tr><td> Basisleistung </td><td> Anschädigung Motorleistung die minimale Leistungsschwelle zu bestimmen, beurteilt. </td></tr><tr><td> Neurologische Funktionsindex (NFI) </td><td> Klinischer Index, der jede Maus Motorleistung vergleicht, das heißt, Laufzeit, zu jeder Zeit auf seine Höchstleistung. </td></tr><tr><td> Das bereinigte neurologische Funktionsindex (adjNFI) </td><td> Wenn ein Normalisierungsprozess angewendet LFI-Daten von einer Bevölkerung Wert einzustellen fürdie einzigen Experiment. </td></tr><tr><td> Bevölkerung Wert </td><td> Durchschnittliche NFI Wert durch die scheinbehandelte Gruppe an einem bestimmten Tag erhalten. </td></tr></tbody></table> Tabelle 2: Definitionen der Rotarod Parameter Angenommen neurologische Beeinträchtigung zu beziffern.

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</ol>

Die Autoren haben nichts offenzulegen.

Trotz einiger Einschränkungen stellt die Rotarod Performance-Test ein wichtiges Instrument der motorischen Funktion und Dysfunktion in TMEV-IDD sowie die Wirkung von pharmakologischen Interventionen auf Behinderungsprogression bei Mäusen für die Beurteilung. Der Rotarod Test wurde zum ersten Mal für die Messung neurologische Defizite bei Nagern 11 im Jahr 1957 als ein Werkzeug beschrieben. Nagetiere haben auf einem rotierenden Stab zu gehen, mit Drehgeschwindigkeit zu erhöhen und ...

Theiler des Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV) ist ein neurotropen einzelsträngige RNA-Virus, das das murine zentralen Nervensystems persistent infiziert (CNS). Bei anfälligen Mäusen eine Infektion mit TMEV verursacht eine immunvermittelte, chronische progressive demyelinisierende Krankheit, bekannt als TMEV-induzierte demyelinisierende Erkrankung (TMEV-IDD). Experimentelle Infektion von Mäusen nimmt einen Krankheitsverlauf, dass bei der progressiven Formen der Multiplen Sklerose (MS) gesehen ähnelt. der akuten Phase und der chronischen Phase: TMEV-IDD wird durch zwei unterschiedliche Phasen gekennzeichnet. Die akute Phase ist eine milde, in der Regel subklinischen Enzephalitis 1,2. Der zweite, der chronischen Phase, etwa einen Monat nach der Infektion beginnt, besteht aus einer langsam fortschreitende Behinderung durch Demyelinisierung gekennzeichnet, Entzündung und axonalen Schädigung 1,2. Die Schwäche in Mäusen beobachtet, die mit Spastik und gelegentlich schwere tonische Krämpfe. Da es derzeit keine medications den progressiven Behinderung bei Patienten zu verbessern, sind die Forscher besonders angezogen von TMEV-IDD, die für die Überwachung der Auswirkungen von disease modifying Drogen auf den Krankheitsverlauf eines optimalen Tiermodell darstellt. bei Mäusen als auch bei MS-Patienten jedoch erfordert die Überwachung des Fortschreitens der Behinderung eine kontinuierliche klinische Beobachtung über längere Zeiträume. Bei Mäusen kann die Langzeitüberwachung für Behinderungsprogression mit dem Rotarod Leistungstest durchgeführt werden. Die Rotarod Performance-Test ist ein Standard-Verhaltenstest, der Motor-assoziierten Funktionen wie Koordination, Gleichgewicht und Müdigkeit bei Nagern auswertet. Die Mäuse haben ihr Gleichgewicht auf einer Drehstange zu halten, die unter ständiger Beschleunigung dreht; die Zeit, die Latenz zu fallen aus dieser Stab aufgezeichnet wird. Tiere, die mit neurologischen Störungen sind nicht in der Lage auf dem rotierenden Stab solange Kontrollen zu bleiben, und sie normalerweise abfallen, wenn die Drehzahl übersteigt ihreMotorleistung. Je mehr neurologische Beeinträchtigung der Tiere haben, fallen je früher sie von der Stange, und je kürzer die Zeit Latenz ist. Der Vorteil der Rotarod - Test gegenüber den traditionellen optische Bonitur Systemen ist , dass es ein Ziel erzeugt, messbare variabler die Zeit latenz die letztlich für statistische Analysen verwendet werden können , um die Auswirkungen von Therapien und experimentellen Verfahren 3 zu quantifizieren. Im Labor für Neuroimmunologie (LONI) in Dartmouth, Mäuse zu einem Anpassungsprotokoll unterzogen werden, wo sie vor der TMEV Infektion, um sie mit der Maschine vertraut zu machen getestet und ihre normalen &quot;Baseline&quot; Balance Koordination und Motorsteuerung zu bewerten 4, 5. Sobald der Basislinie festgelegt wird, und die Mäuse werden mit TMEV infiziert, werden sie einmal oder zweimal pro Woche über einen Zeitraum von mehreren Monaten getestet. Die eigentliche Testprotokoll dauert durchschnittlich 150 Tage, so dass eine Beurteilung ermöglichender Rückgang der Balance, Koordination und Motorsteuerung über den gesamten Verlauf der demyelinisierende Erkrankung. Mehrere hundert TMEV-IDD und scheinbehandelten Mäuse wurden bisher für neurologische Dysfunktion bei Dartmouth getestet. Diese Mäuse hatten verschiedene immunmodulatorische Behandlungen erhielten, aber keine pharmakologischen Wirkstoff gefunden wurde in Lindern Behinderungsprogression 6,7 wirksam zu sein. Der vorliegende Artikel und die damit verbundene Protokoll beschreibt, wie die schrittweise von TMEV-IDD Mäuse zeigten neurologische Beeinträchtigung zu charakterisieren. Insbesondere auf das Protokoll bietet Empfehlungen spezifischer Testparameter glaubte für die Untersuchung neurologische Behinderungen bei TMEV-IDD-Mäuse im Allgemeinen geeignet sein, die Rotarod-Test. Dieses Verfahren stellt eine Basislinie, gegen die zur Beurteilung (1) die Relevanz dieses Mausmodell progressive MS und (2) ihre Nützlichkeit für Therapien bei der Behandlung von progressiven neurologischen Erkrankungen wie MS Ziel zu testen. Offensichtlich ist dieRotarod Leistungsprüfung und die aktuelle optimierte Testparameter und das Protokoll sind nicht nur nützlich bei progressive neurologische Behinderungen bei der TMEV-IDD-Maus-Modell zu erfassen, sondern sind auch nützlich bei der Beeinträchtigungen in anderen Virus-induzierten und / oder genetischen Mausmodellen von neurodegenerativen Erkrankungen aufzudecken.

<table><tbody><tr><td>Mäuse SJL/JCrHsd 4 bis 6 Wochen alt</td><td>Envigo</td><td>#052</td><td></td></tr><tr><td>TMEV Virus Stock</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Isoflurane</td><td>Vaporizer Harvard Apparatus</td><td>#340471</td><td></td></tr><tr><td>Insulinspritzen U- 100 29 g x 0,5 cc</td><td>BD</td><td>#328203</td><td></td></tr><tr><td>Rotamex-5 4 Lane Rota-Rod für Mäuse mit RS-232 und Software</td><td>Columbus Instruments</td><td>#0890M</td><td></td></tr></tbody></table>

mess progressive neurologische behinderungen in einem mausmodell der multiplen sklerose

Measuring Progressive Neurological Disability in a Mouse Model of Multiple Sclerosis

Nach einer intrazerebralen Infektion mit dem Theiler's Murine Enzephalomyelitis-Virus (TMEV) entwickeln anfällige SJL-Mäuse eine chronisch-progrediente demyelinisierende Erkrankung, deren klinische Merkmale den progredienten Formen der Multiplen Sklerose (MS) ähneln. Die Mäuse zeigen eine fortschreitende Behinderung mit Verlust der motorischen und sensorischen Funktionen, die mit mehreren Geräten und Protokollen beurteilt werden können. Unter ihnen ist der Rotarod-Leistungstest ein sehr verbreiteter Verhaltenstest, dessen Vorteil darin besteht, dass er objektive Messungen liefert, aber er wird oft in der Annahme verwendet, dass er unkompliziert und einfach ist. Im Gegensatz zu visuellen Bewertungssystemen, die in einigen MS-Modellen verwendet werden und sehr subjektiv sind, erzeugt der Rotarod-Test eine objektive, messbare, kontinuierliche Variable (d. h. Zeitdauer), die nahezu perfekte Konkordanzen zwischen den Ratern ermöglicht. Die Zuverlässigkeit zwischen den Laboratorien wird jedoch nur erreicht, wenn die verschiedenen Prüfparameter repliziert werden. In diesem Manuskript werden Empfehlungen für bestimmte Prüfparameter wie Größe, Geschwindigkeit und Beschleunigung des Stabes gegeben; Umfang der Ausbildung, die den Tieren zuteil wird; und Datenverarbeitung, werden für den Rotarod-Test vorgestellt.

Das Ziel dieser repräsentativen Experiment war die neurologische Behinderung durch die Daniels (DA) Stamm und BEAN Stamm von TMEV induziert zu vergleichen. Für die Zwecke der vorliegenden Studie wurde eine Gruppe von 32 weiblichen SJL-Mäuse wurden infiziert intracranial mit TMEV, entweder die DA-Stamm (n = 16) oder die BEAN-Stamm (n = 16), und ihre klinischen Symptome wurden im Laufe der Zeit überwacht. Eine weitere Gruppe von 20 Mäusen wurde Schein behandelt (dh wurde Kochsalzl...

In diesem Artikel wird ein optimiertes Testprotokoll für den Rotarod-Leistungstest vorgestellt, der zur Messung der fortschreitenden neurologischen Behinderung bei TMEV-infizierten Mäusen verwendet wird.

Mess Progressive neurologische Behinderungen in einem Mausmodell der Multiplen Sklerose

After intracerebral infection with the Theiler's Murine Encephalomyelitis Virus (TMEV), susceptible SJL mice develop a chronic-progressive demyelinating ...

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens besteht darin, die fortschreitende neurologische Beeinträchtigung bei Mäusen mit chronischen demyelinisierenden Erkrankungen zu bewerten. Dies erreichen wir, indem wir Testparameter empfehlen, die geeignet sind, um langfristige neurologische Behinderungen im Theiler-Virus-Modell der progredienten Multiplen Sklerose mittels des Rotarod-Tests zu untersuchen. Dieses Verfahren liefert eine Grundlage, anhand derer die Relevanz des Mausmodells für die fortschreitende Demyelinisierung sowie dessen Eignung zur Prüfung von Therapien, die auf die Behandlung progredienter neurologischer Erkrankungen wie der Multiplen Sklerose abzielen, beurteilt werden kann.Der Vorteil dieses optimierten Tests gegenüber dem traditionellen visuellen Bewertungssystem liegt darin, dass er eine objektive Variable erzeugt, um die Langzeiteffekte von Therapien und experimentellen Verfahren auf motorische Funktionen zu quantifizieren. Diese Prozedur wird Darlene Royce, eine Technikerin aus dem Labor für Neuroimmunologie an der Dartmouth, demonstrieren. Um die motorische Grundlinienkoordination und die motorische Kontrolle zu beurteilen, beginnen Sie fünf Tage vor der TMEV-Infektion mit dem Adaptionsprotokoll, indem Sie die Mäuse zunächst mindestens 30 Minuten lang an den Testraum gewöhnen lassen.Während sich die Mäuse akklimatisieren, stellen Sie die Rotarod-Vorrichtung auf die Trainingsparameter für minus fünf Tage post Infektion (DPI) ein. Heben Sie dann eine Maus am Schwanz auf und setzen Sie sie so auf die Stange, dass sie vom Bediener weggerichtet ist. Falls die Maus herunterfällt oder herunterspringt, setzen Sie sie erneut in ihre Spur auf dem Rotarod, bis alle Mäuse in Position sind.Nachdem alle vier Mäuse geladen wurden, drücken Sie die Eingabetaste, um das Experiment zu starten. Stellen Sie sicher, dass die Timer automatisch beginnen, und beobachten Sie die angezeigten Umdrehungen pro Minute für jede Spur. Sobald jedes Tier vom Stab fällt, notieren Sie die Geschwindigkeit des Stabes zum Zeitpunkt des Abfalls sowie die Dauer, die das Tier auf dem Stab verblieben ist.Nachdem alle Mäuse heruntergefallen sind, entfernen Sie mit einem Tuch alle Fäkalbolusse und Urin vom Stab, da das Vorhandensein von Urin und Fäkalmaterial die Fähigkeit der Mäuse beeinträchtigen kann, den Stab richtig zu umfassen. Nach einer dreiminütigen Ruhephase führen Sie einen zweiten und anschließend einen dritten Versuch durch, wobei die maximale Dauer pro Einzelversuch 240 Sekunden beträgt. Führen Sie an jedem Testtag insgesamt drei Versuche durch.Schließlich bringen Sie die Mäuse in ihren Heimkäfig zurück. An den Tagen minus vier, minus drei, minus zwei und minus eins p.i. stellen Sie das Rotarod mit den entsprechenden Parametern für das Trainingsprotokoll ein und wiederholen Sie das Rotarod-Experiment. Beginnen Sie damit, die Käfige mit vier bis sechs Wochen alten weiblichen SJL-Mäusen vom Gestell in einen geeigneten Arbeitsbereich zu bringen.Verwenden Sie Ohrstanzen, um die Mäuse zu markieren, um eine individuelle Bewertung der klinischen und histologischen Erkrankung zu ermöglichen. Ziehen Sie anschließend 30 Mikroliter TMEV-Infektionsstamm in PBS in eine Spritze mit 29-Gauge-Insulin-Nadel auf. Bereiten Sie das Narkosegerät vor, indem Sie sicherstellen, dass ausreichend Sauerstoff und Isofluran für die Dauer des Eingriffs vorhanden sind.Legen Sie das Tier in die Induktionskammer und verschließen Sie die Oberseite. Nach einigen Minuten nehmen Sie das Tier aus der Kammer und testen die Maus durch leichtes Zudrücken des Fußpolsters, um eine ausreichende Anästhesie sicherzustellen. Reinigen Sie anschließend die Injektionsstelle mit 70 % Isopropylalkohol und injizieren Sie die 30 Mikroliter TMEV-Infektionsstamm in die rechte Großhirnhemisphäre mittels freihändig durchgeführter Injektion.Geben Sie die Maus schließlich in ihren Aufbewahrungsstall zurück, sobald sie vollständig wach und beweglich ist. Am siebten Tag nach der Infektion stellen Sie die Rotarod-Vorrichtung mit den entsprechenden experimentellen Parametern ein und wiederholen Sie die komplette Rotarod-Trainingsübung gemäß dem geeigneten experimentellen Protokoll. Wiegen Sie nach dem dritten Versuch an jedem Tag jede Maus und notieren Sie das Körpergewicht auf dem Datenerfassungsbogen.Testen Sie die Mäuse in den folgenden sechs Wochen zweimal pro Woche auf die gleiche Weise. Nach sechs Wochen testen Sie die Mäuse einmal pro Woche mit dem gleichen experimentellen Protokoll für durchschnittlich 150 experimentelle Tage. Analysieren Sie anschließend die Rohdaten und geben Sie diese als neurologischen Funktionsindex, oder NFI, an.Um den individuellen NFI-Wert zu bestimmen, berechnen Sie die Basisleistungsschwelle jeder Maus als Mittelwert aller Laufzeiten von 15 bis 45 Tagen nach der Infektion. Dies ermöglicht die Beurteilung der motorischen Leistung als Folge einer fortschreitenden Demyelinierung und schließt zusätzliche Defizite aufgrund einer frühen Enzephalitis aus. Berechnen Sie anschließend den NFI-Wert als Mittelwert der drei jüngsten durchschnittlichen Laufzeiten, dividiert durch die Basisleistungsschwelle der Maus.Schließlich wird ein angepasster NFI berechnet, indem der NFI-Wert durch den durchschnittlichen NFI-Wert der an diesem bestimmten Tag sham-behandelten Gruppe dividiert wird. Diese Abbildung zeigt, dass Mäuse, die mit TMEV infiziert wurden, im Zeitverlauf signifikant erhöhte neurologische Defizite aufweisen, verglichen mit Kontrollmäusen. Eine chronische Infektion mit zwei verschiedenen Stämmen von TMEV beeinträchtigte negativ die Laufzeiten der Mäuse.Beide Gruppen der mit TMEV infizierten Mäuse wiesen signifikant niedrigere NFI-Werte auf als die Schein-Mäuse. Darüber hinaus zeigte sich kein Unterschied beim Vergleich des Krankheitsverlaufs zwischen Mäusen, die mit dem BeAn-Stamm infiziert waren, und solchen, die mit dem DA-Stamm infiziert waren, zu allen Zeitpunkten. Nach dieser Prozedur können traditionelle visuelle Bewertungsmethoden, wie der Rechtsreflextest, durchgeführt werden, um den allgemeinen Gesundheitszustand der Mäuse schnell zu beurteilen.Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik Forschern auf dem Gebiet der Multiplen Sklerose und neurodegenerativer Erkrankungen den Weg, um die Wirksamkeit von Therapien und anderen Interventionen hinsichtlich der Verzögerung fortschreitender Behinderungen zu testen. Nachdem Sie dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie man die langfristige progressive Behinderung bei Mäusen bewertet. Dieses Verfahren ist nicht nur nützlich, um fortschreitende neurologische Behinderungen im Theiler-Virus-Modell zu erkennen, sondern auch, um Funktionsbeeinträchtigungen in anderen Mausmodellen neurodegenerativer Erkrankungen aufzudecken.

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Research

Forschung

JoVE Journal

Neuroscience

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Mess-motorische Koordination in Mäuse

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