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DOI: 10.3791/54841-v
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Es wurde ein Echtzeit-Assay mit hohem Durchsatz entwickelt, um gleichzeitig (1) eukaryotische zellpenetrierende antimikrobielle Wirkstoffe zu identifizieren, die auf einen intrazellulären bakteriellen Krankheitserreger abzielen, und (2) die Zytotoxizität eukaryotischer Zellen zu bewerten. Eine Variation der gleichen Technologie wurde anschließend mit digitaler Dosiertechnologie kombiniert, um einfache, hochauflösende Dosis-Wirkungs-Studien sowie zwei- und dreidimensionale Synergiestudien zu ermöglichen.
Das übergeordnete Ziel dieses Protokolls ist es, einen einzigen kombinierten Echtzeit-Assay zu verwenden, um spezifische niedermolekulare Inhibitoren des intrazellulären Bakterienwachstums zu identifizieren, die für Wirtszellen nicht toxisch sind. Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Fragen im Bereich der antimikrobiellen Forschung zu beantworten. Welche Arten von Verbindungen können in intrazelluläre Kompartimente eindringen und Krankheitserreger abtöten, ohne die Wirtszelle zu schädigen?
Die Hauptvorteile dieser Technik sind das bakterielle Wachstum: Die Toxizität von Säugetierzellen wird gleichzeitig mit zerstörungsfreien Echtzeit-Assays nachgewiesen. Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, mit der Skalierbarkeit zu kämpfen haben, die sie bietet. Die Analyse von mehr als zehntausend Verbindungen in einer Sitzung erfordert eine ganze Reihe neuer Techniken und Geräte.
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