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DOI: 10.3791/55406-v
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Kombinierte Vorläufer Isotopenmarkierung und isobar Tagging (cPILOT) ist eine quantitative Proteomik-Strategie, die Probe Multiplexierungsfähigkeiten von isobar-Tags verbessert. Dieses Protokoll beschreibt die Anwendung von cPILOT an Gewebe von einer Krankheit Mausmodell und Wildtyp-Kontrollen der Alzheimer.
Das übergeordnete Ziel dieser verbesserten Multiplex-Methode ist es, die Anzahl der Proteinproben zu erhöhen, die gleichzeitig analysiert werden können, und gleichzeitig den Probenfehler und die Instrumentenzeit zu verringern. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen in den Bereichen Altern, neurodegenerative Erkrankungen, andere altersbedingte Krankheiten und Krebs zu beantworten, die mit Pathogenese, Progression, Diagnose, Prognose und therapeutischen Zielen zusammenhängen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass eine umfassende Momentaufnahme der Proteinveränderungen unter vielen Bedingungen erstellt werden kann.
Obwohl diese Methode Einblicke in die Alzheimer-Krankheit im Mausmodell geben kann, kann sie auch auf Gewebeproben von Patienten mit Alzheimer oder einer Reihe anderer Erkrankungen angewendet werden. Im Allgemeinen werden Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, eine Herausforderung darstellen, da mehrere Proben gleichzeitig in einem kurzen Zeitrahmen bearbeitet werden müssen. Wir hatten die Idee zu dieser Methode, als wir erkannten, dass die Acetylierung mit isoberischem Tagging für die Proteinnitrierung kombiniert werden kann, was uns dazu motivierte, die Technik weltweit für alle Peptide funktionieren zu lassen.
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