5/6^th Nephrektomie Mausmodell, die experimentelle urämischen Kardiomyopathie induziert

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, ein einfaches Fünf-Sechstel-Teilnephrektomiemodell der Maus mit Polligation mit einer besseren Überlebensrate als herkömmliche Modelle zu erstellen. Diese Methode kann dazu beitragen, zentrale Fragen im Bereich der chronischen Nierenerkrankungen über die Entstehung und mögliche therapeutische Behandlung der urämischen Kardiomyopathie zu beantworten. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass es sich um ein einfaches und konsistent reproduzierbares Tiermodell handelt, das die Pathologie der chronischen Nierenerkrankung bei menschlichen Patienten nachahmt.

Im Allgemeinen haben Personen, die mit dieser Methode noch nicht vertraut sind, Schwierigkeiten, da die Nieren, Blutgefäße und Harnleiter bei der Maus viel kleiner sind. Beginnen Sie damit, den angemessenen Grad der Sedierung zu bestätigen, indem Sie nicht auf das Einklemmen der Zehen reagieren und Gleitmittel auf die Augen der Maus auftragen. Legen Sie die Maus auf ein Wärmekissen und setzen Sie ein Rektalthermometer ein, um die Körpertemperatur während des Eingriffs bei etwa 37 Grad Celsius zu halten.

Setzen Sie dann das Tier auf die rechte Seite und rasieren Sie die Haare über der Operationsstelle. Entfernen Sie alle verbleibenden Haare mit Entpillungscreme und desinfizieren Sie die exponierte Haut mit Polyhydroxy-Dine-Lösung und 70%igem Ethanol. Richten Sie ein Autoklaven-OP-Tuch über der Operationsstelle aus.

Und machen Sie einen etwa einen Zentimeter langen Lendenschnitt durch die Haut und das Muskelgewebe. Trennen Sie mit dem Skalpell und der Pinzette den Muskel und die Faszie, um die linke Niere freizulegen. Ziehen Sie dann mit einer kleinen stumpfen Pinzette vorsichtig am perirenalen Fett, um die Niere aus der Bauchhöhle zu ziehen.

Ziehen Sie das Bindegewebe und die Nebenniere sanft vom oberen Ende der Niere in Richtung des mittleren Pylorus des Organs, wo die Blutgefäße in das Nierengewebe ein- und austreten. Isolieren Sie den Harnleiter um die untere Hälfte der Niere innerhalb des Bindegewebes und trennen Sie das Bindegewebe vorsichtig von der Niere, um sicherzustellen, dass der Harnleiter nicht ligiert wird. Es ist wichtig, das Bindegewebe sorgfältig zu trennen, damit der Harnleiter nicht beschädigt wird und nicht blutet.

Isolieren Sie den Harnleiter um die untere Hälfte der Niere innerhalb des Bindegewebes. Verwenden Sie dann drei Null-Seidennahtfäden, um die Niere etwa 0,4 Zentimeter vom oberen Teil entfernt, in Richtung der Mitte des Pylorus und 0,4 Zentimeter vom unteren Teil in Richtung des Pylorus, zu ligieren. Wenn Sie die Nähte festziehen, üben Sie gerade genug Spannung aus, um die Blutversorgung des distalen Teils der Niere zu beeinträchtigen, ohne Blutungen auf beiden Seiten zu verursachen.

Wenn nach zwei Minuten keine Blutung beobachtet wird, bringen Sie die Niere vorsichtig an ihre ursprüngliche anatomische Position zurück und verwenden Sie vier Null- und drei Nullnähte, um die Muskel- bzw. Hautschichten zu schließen. Tragen Sie dann eine antibiotische Salbe auf das Operationsgebiet auf und beherbergen Sie die Maus einzeln mit einer Wärmelampe und überwachen Sie sie bis zum sternalen Liegen. Sieben Tage nach der polaren Ligatur legen Sie die rechte Niere frei, wie gerade gezeigt.

Verwenden Sie eine stumpfe Pinzette, um das umgebende Fett und Bindegewebe zu reinigen, und legen Sie locker zwei Seidennähte um die Nierenarterie und die Vene. Toupieren Sie das Bindegewebe und die Nebenniere sanft vom oberen Ende der Niere in Richtung des mittleren Pylorus. Verschieben Sie den Harnleiter vorsichtig vom unteren Ende des Gewebes und lösen Sie alle Gefäße miteinander, ohne Blutungen zu verursachen.

Verschieben Sie als Nächstes einen losen Ligaturknoten in Richtung der Bauchaorta und den zweiten losen Ligatur in Richtung der Nierenseite. Und binden Sie die Bauchaortenligatur mit Doppelknoten ab. Ein fester Knoten verändert die Farbe der rechten Niere.

Binden Sie den zweiten Ligaturknoten mit Doppelknoten ab, lassen Sie Zwischenräume zwischen den Knoten, damit die Gefäße durchtrennt werden können, und durchtrennen Sie die Nierengefäße. Schließen Sie nach der Entnahme der Niere die Muskel- und Hautschichten, wie gerade gezeigt. Trocknen Sie dann die Niere mit steriler Gaze und wiegen Sie das entnommene Nierengewebe.

Vier Wochen nach der Operation zeigten die Mäuse mit partieller Nephrektomie im Vergleich zu Schein-OP-Tieren signifikant erhöhte Spiegel von Cyctatin C, Kreatinin und Blutharnstoffstickstoff im Plasma. Eine partielle Nephrektomie-stimulierte Anämie ist ebenfalls offensichtlich, was sich in den signifikant niedrigeren Hämatokritwerten bei den polar ligierten Tieren zeigt. Kardiale Hypertrophie und diastolische Dysfunktion bei den teilweise nephrektomisierten Mäusen werden durch ein erhöhtes Herz-Körper-Gewichtsverhältnis und durch transthorakale Echokardiographie-Analysen angezeigt, die signifikante Erhöhungen der hinteren und vorderen Wanddicken, des Myokardleistungsindex und des Massenindex des linken Ventrikels zeigen.

Die partielle Nephrektomie-vermittelte Herzfibrose zeigt sich auch durch eine Erhöhung der Kollagenexpression vom Typ 1 in den Homogenaten des linken Ventrikels und den Homogenaten der linken Nierenreste. Darüber hinaus spielt oxidativer Stress eine wichtige Rolle bei der experimentellen urämischen Kardiomyopathie, da er die direkte Proteincarbonylierungsmodifikation mehrerer Proteine und die Aktivierung der Proto-Onkogen-Tyrosin-Proteinkinase in den Homogenaten des linken Ventrikels signifikant stimuliert. Einmal gemeistert, kann diese Technik in 40 Minuten abgeschlossen werden, wenn sie richtig ausgeführt wird.

Wenn Sie dieses Verfahren versuchen, ist es wichtig, daran zu denken, die Atemfrequenz des Tieres zu überprüfen und die Isoflurane entsprechend anzupassen. Im Anschluss an dieses Verfahren können weitere Experimente wie der Vergleich der Auswirkungen bestimmter medikamentöser Behandlungen auf die Genesung der partiellen Nephrektomie durchgeführt werden, um traditionelle Fragen zu spezifischen therapeutischen Behandlungen von Interesse zu beantworten. Nach ihrer Entwicklung ebnete diese Technik den Weg für Forscher auf dem Gebiet der chronischen Nierenerkrankungen, um die Pathologie und das potenzielle Wirkstoffscreening bei urämischer Kardiomyopathie zu erforschen.

Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein gutes Verständnis dafür haben, wie Sie ein partielles Nephrektomiemodell in der Maus einrichten.