Ein Mausmodell zur Bewertung der langfristigen strukturellen und funktionellen Ergebnisse nach der Umkehrung einer anhaltenden einseitigen Harnleiterobstruktion

Mein Labor arbeitet an den Mechanismen und der Therapie zur Verbesserung der Langzeitergebnisse nach einem Nierenversagen, und der spezifische Schwerpunkt dieses Protokolls liegt auf der Entwicklung eines Instruments zur Untersuchung der Langzeitergebnisse nach Umkehrung der Harnwegsobstruktion. Wir haben ein Mausmodell der einseitigen reversiblen Harnleiterobstruktion entwickelt, das es uns ermöglicht, die langfristigen funktionellen und strukturellen Ergebnisse der Umkehrung der Harnwegsobstruktion in der Niere zu bewerten. Andere Methoden erfordern mehrere Operationen oder mikrochirurgische Expertise, zu der die meisten Labore keinen Zugang haben. Da es sich um eine einseitige Obstruktion handelt, ermöglichen die meisten anderen Methoden keine funktionelle Bewertung der Genesung ohne Durchführung von Split-Nierenfunktionstests. Es gibt wirklich nur zwei. Die erste ist die konsequente Platzierung der Gefäßklemme an der gleichen Position auf dem proximalen Harnleiter in jedem Experiment, und die zweite ist die Entfernung der Gefäßklemme einige Tage später, ohne den Harnleiter oder die Niere zu schädigen.

[Rachel] Bereiten Sie zunächst die chirurgische Seite einer anästhesierten Maus mit Antiseptika vor. Machen Sie mit einer Schere und Pinzette einen 1,5 Zentimeter langen dorsalen Längsschnitt entlang der Mittellinie durch die Haut und die Unterhautschichten. Machen Sie einen kleinen Schnitt durch den linken Flankenmuskel und die Faszie oberhalb der Niere. Äußere dann mit einer Pinzette die linke Niere. Mit einer stumpfen Pinzette. Präparieren Sie vorsichtig das Fett am unteren Pol und etwas Bindegewebe in der Nähe des Harnleiters. Lokalisieren Sie den Harnleiterbereich. Trennen Sie dann den Harnleiter samt Bindegewebe vom Nierenstiel, um zu vermeiden, dass die Nierenvene und die Arterie mit der Klemme einbezogen werden. Öffnen Sie die Gefäßklemme mit Klemmappen und positionieren Sie sie direkt unterhalb des Nierenbeckens auf dem Harnleiter. Verwenden Sie die Markierungen auf der Klemme, um sicherzustellen, dass ein gleichmäßiger Druck auf alle Mäuse ausgeübt wird. Schiebe nun mit einem in Kochsalzlösung getränkten sterilen Wattestäbchen die Niere mit der Klemme vorsichtig zurück in den retroperitonealen Raum. Vernähen Sie dann die Muskelschicht mit einer resorbierbaren Naht. Verwenden Sie Hautklammern, um die Hautschicht zu schließen. Um die Harnleiterklemme zu entfernen, entfernen Sie die Wundklammern und reinigen Sie dann den Operationsbereich, ohne ihn neu zu formen, indem Sie die ursprünglichen Schnitte verwenden, um an die Klemme zu gelangen. Öffnen Sie die Muskelschicht wieder und legen Sie den retroperitonealen Raum frei. Verwenden Sie eine Pinzette, um die Klemme vorsichtig im retroperitonealen Raum zu positionieren, ohne die Niere nach außen zu verlagern. Öffnen Sie die Klemme vorsichtig mit Klemmappen, während Sie das umgebende Gewebe mit einer Pinzette wegziehen, um es sicher zu entfernen. Äußere nun die Niere, um das Nierenbecken auf Obstruktion zu untersuchen. Ein geschwollenes Nierenbecken bestätigt die Hydronephrose. Schieben Sie die Niere mit einem mit Kochsalzlösung getränkten sterilen Wattestäbchen zurück in den retroperitonealen Raum und nähen Sie den Schnitt wie gezeigt zu. Um eine kontralaterale Nephrektomie durchzuführen, öffnen Sie die dorsale Stelle mit dem ursprünglichen Hautschnitt wieder. In der Größe, dem rechten Flankenmuskel und der Faszie über der Niere. Äußere der rechten Niere dann mit einer Pinzette. Halten Sie die rechte Niere mit einer glatten, gebogenen Pinzette fest und präparieren Sie den oberen und unteren Pol frei vom umgebenden Gewebe. Nach der Befreiung der Niere binden Sie eine Foro-Seidennaht mit einem doppelten chirurgischen Knoten um die Nierengefäße und den Harnleiter. Warten Sie etwa 30 Sekunden, bis sich die Niere verdunkelt. Halten Sie es dann mit der glatten, gebogenen Pinzette fest und entfernen Sie es, indem Sie es mit einer gebogenen Schere distal zum Knoten schneiden. Schieben Sie den verbleibenden Nierenstiel mit einem mit Kochsalzlösung getränkten sterilen Wattestäbchen vorsichtig in den retroperitonealen Raum zurück und verschließen Sie dann die Muskel- und Hautschichten mit Nähten und Clips. Typische Überlebens- und Nierenfunktionsmessungen wurden 84 Tage nach reversibler einseitiger Harnleiterobstruktion durchgeführt. In funktionellen Studien wurde die reversible einseitige Harnleiterobstruktion mit der Nephrektomie allein für den Blutharnstoffstickstoff, die transdermale glomeruläre Filtrationsrate und die Osmolarität des Urins nach 18 Stunden Wasserentzug verglichen. Die Osmolaritätswerte im Urin waren zu gleichen Zeitpunkten deutlich niedriger als bei Nephrektomie-Kontrollmäusen.