Methode für effiziente Umfaltung und Reinigung des Chemorezeptor-Liganden-bindende Domäne

Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, eine Chemorezeptor-Liganden-Bindungsdomäne aus Einschlusskörpern zu falten und sie für die Verwendung in strukturellen und funktionellen Studien zu reinigen. Um festzustellen, welche Signale ein bakterieller Chemorezeptor sendet und wie, kann man die isolierten Ligandenbindungsdomänen verwenden, um gegen kleine Molekülbibliotheken zu screenen oder die Struktur mit und ohne Liganden zu bestimmen. Die Unterdrückung der extrazellulären Ligandenbindungsdomäne in E.coli führt häufig zur Ablagerung in Einschlusskörpern.

Hier zeigen wir, wie eine Milligrammmenge an funktionellem Protein aus den Einschlusskörpern zurückgewonnen werden kann. Zu Beginn inokulieren Sie 150 ml sterile LB-Bouillon mit 50 Mikrogramm pro ml Ampicillin mit BL21-CodonPlus RIPL-Zellen, die mit dem pET151 D-TOPO-Vektor für die Expression von Hexahistidin TIp3-LBD transformiert wurden. Inkubieren Sie die Kultur über Nacht bei 200 U/min und 37 Grad Celsius.