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DOI: 10.3791/57149-v
Akihiro Isomura1,2, Ryoichiro Kageyama1,3,4,5
1Institute for Frontier Life and Medical Sciences,Kyoto University, 2Japan Science and Technology Agency,PRESTO, 3Institute for Integrated Cell-Material Sciences,Kyoto University, 4Graduate School of Medicine,Kyoto University, 5Graduate School of Biostudies,Kyoto University
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This article presents a protocol for analyzing cell-to-cell transfer of oscillatory information using optogenetic control and live monitoring of gene expression. The method allows for precise control and observation of gene expression dynamics, providing insights into cellular communication.
Hier präsentieren wir Ihnen ein Protokoll zu analysieren von Zelle zu Zelle Übertragung der oszillierenden Informationen durch optogenetische Kontrolle und Überwachung der Genexpression zu leben. Dieser Ansatz bietet eine einzigartige Plattform, um eine funktionale Bedeutung der dynamischen Ausdruck Genprogramme in mehrzelligen Systeme zu testen.
Das übergeordnete Ziel dieses Experiments ist es, den Zell-zu-Zell-Transfer von oszillatorischer Information durch optogenetische Kontrolle und Live-Monitoring der Genexpression zu beobachten. Diese Methode kann dazu beitragen, wichtige Fragen zu beantworten, wie Zellen über den Notch-Signalweg miteinander kommunizieren, insbesondere wie Zellen die oszillatorischen Informationen untereinander übertragen. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass wir die Dynamik der Genexpression mit sehr hoher Präzision steuern und überwachen können.
Akihiro Isomura, ein Forschungsstipendiat aus meinem Labor, der diese neue Technologie entwickelt hat, wird das Verfahren vorführen. Um Plasmidvektoren von Tol2-basierten optogenetischen Modulen zusammen mit dem Transposase-Expressionsvektor in C2C12-Zellen zu transfizieren, werden zunächst trypsinisierte Zellen mit einem Zellzähler gezählt. Platte 50.000 C2C12-Zellen pro Well in einer 12-Well-Platte einen Tag vor der Transfektion.
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