Name: Protokoll für akute und chronische Ökotoxizität Prüfung von Türkis Killifische Nothobranchius furzeri (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-04-24T14:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 43 s
Description: Erfahren Sie akute und chronische Bioassays zur Ökotoxizitätsprüfung mit Nothobranchius furzeri. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Stressoreffekten auf Mortalität, Wachstum und Fruchtbarkeit für umweltwissenschaftliche Risikobewertungen.

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Wir sind dankbar, die Kugel-Gruppe von der UAntwerpen und der Abteilung für Pflanzenschutz an der dringend für die Analyse von Wasserproben. Unterstützung bei diesem Projekt wurde von der Excellence Center bereitgestellt "Eco und sozio-evolutionäre Dynamik des Forschungsfonds KU Leuven (PF/10/007). AFG (11Q0516N) und ESJT (FWO-SB151323) wurden als Doktoranden gefördert und TP (12F0716N) als Post-Doktorand von FWO Flanders (Fonds Wetenschappelijk verwendet).

Alle hier beschriebene Methoden wurden von der Ethikkommission der KULeuven genehmigt.
(1) schlüpfen und allgemeine Wartung von N. Furzeri
<ol><li>Bereiten Fisch Medium (pH 7) bei einer Temperatur von 14 ° C und eine Leitfähigkeit von 600 µS/cm (24 ° C) gereinigtes Wasser Typ II, mit zusätzlichen standardisierte Salze hinzufügen.</li>
	<li>Wählen Sie aus Eiern von der GRZ (Gona-Rhe-Zhou) Labor-Linie, die unter standardisierten Bedingungen13gespeichert wurden. Wählen Sie Eiern in der DIII-Phase (d. h. bereit zu schlüpfen), erkennbar durch die Anwesenheit von goldenen Augen9 und sanft mit einem weichen Pinzette auf übertragen ein Kunststoff 2 L-Tank (nicht mehr als ca. 30 Eiern pro Tank). Hinweis: Um eine ausreichende Anzahl von gesunden Testorganismen haben, schlüpfen Sie doppelt so viele Eiern als die Anzahl der erforderlichen Fischlarven.</li>
	<li>1 cm des Mediums Fisch bei 12 ° C und die Wassertemperatur langsam auf Raumtemperatur (24 ° C)9konvergieren. Fisch wird innerhalb der ersten 12 h schlüpfen.</li>
	<li>Nach 24 h, füttern die Jungtiere eine konzentrierte Dosis von frisch geschlüpften Artemianauplii (für mehr Details über die Häufigkeit und Menge der Nahrung, beziehen sich auf die Zucht-Protokoll von Polačik Et Al. 20169) und die Wassertiefe auf 5 cm zu erhöhen Das Fisch-Medium hinzufügen.</li>
	<li>Nach 36 h füttern Sie die Jungtiere einer anderen konzentrierte Dosis von frisch geschlüpften Artemia-Nauplien und fügen Sie Fisch Medium um die Wassertiefe bis zu 10 cm zu erhöhen.</li>
	<li>Fisch-Container unter konstanter Temperatur-Bedingungen (z.B. in einem Inkubator, Klima oder beheizten Wasserbad) unter einer 14 H:10 h inkubieren hell: dunkel-Regime.</li>
	<li>Vor dem Start des Experiments Übernachtung komplexe Fisch Behälter (ohne Fisch) mit Verbindung durch Befüllen mit der höchsten Konzentration von Exposition Medium und verlassen sie die Belichtung um die Übertragung von Schadstoffen in den Container in der eigentlichen beschränken Experimentieren Sie.</li>
	<li>48 h nach dem Schlupf, wählen Sie gesunde lebhafte Larven um die Exposition Experiment zu beginnen. So genannte Bauch-Sliders, die waren nicht in der Lage, ihre Schwimmblase zu füllen und somit eine Beeinträchtigung Auftrieb zu verwerfen (ständig auf den Boden sinken).</li>
</ol>2. kurzfristige Exposition Protokoll
Hinweis: Forscher sollten mindestens 20 Wiederholungen (20 Fische in separaten Gläsern) pro Behandlung anstreben. Neben einem volle Kontrolle-Behandlung sollten ein Lösungsmittel-Steuerelement enthalten sein, wenn der Stammlösung der Verbindung bereit ist, mit Hilfe eines Lösungsmittels. Das Lösungsmittel Steuerelement sollte die Menge des Lösungsmittels gleich der Lösemittelkonzentration in der höchsten Expositionskonzentration enthalten.
<ol><li>Bereiten Sie die experimentelle Container (0,5 L Glasgläser) durch beschriften sie und füllt sie mit dem Medium angemessene Belichtung (verschiedenen giftigen Konzentrationen). Fügen Sie die Verbindung um die richtige Konzentration zu erhalten.</li>
	<li>Larven (48 h nach dem Schlupf) individuell auf die Behälter (1 Fisch pro Container für individuelle Überwachung) übertragen. Hinweis: Fische sind einzeln belichtet, um potenziell verwirrende Auswirkungen der sozialen Interaktion wie Konkurrenz um Nahrung und Aggression zu minimieren. Fische dürfen jedoch visuell in Übereinstimmung mit ethischen Standards für den Laboreinsatz Tier interagieren.</li>
	<li>Follow-up dieses akute Exposition für eine Dauer von bis zu 2 Wochen. Während dieser Zeit füttern die Fische Ad Libitum mit Artemia Nauplien zweimal pro Tag, 7 Tage/Woche.</li>
	<li>Aktualisieren Sie das Medium jeden zweiten Tag, Wasserqualität zu erhalten und mögliche Auswirkungen des zusammengesetzten Abbau zu minimieren. Zentrale Wasser-Variablen zu überwachen (gelöster Sauerstoff-Niveaus sollte mehr als 80 %, Leitfähigkeit sollte im Bereich zwischen 350 und 450 mg/L, die innerhalb des Bereichs der optimalen Aufzucht Bedingungen liegt zwischen 600 und 700 µS/cm, pH zwischen 7,8 und 8,2 und Härte (wie CaCO3) für N. Furzeri 9). Nehmen Sie Wasserproben, vor und nach der Aktualisierung des Mediums, um tatsächliche Verbindung Konzentrationen bestimmen.</li>
	<li>Endpunkte<ol>
<li>Überprüfen Sie Fisch für die Mortalität, Stress (z.B. abweichendes Verhalten: Schwimmen auf dem Kopf stehend) oder Krankheit täglich (morgens, abends). Wenden Sie sich an die Veröffentlichung der Shedd Et al. (1999) 12 für Details auf die Beobachtung der Sterblichkeit, Stress oder Krankheit.</li>
		<li>Berechnen Sie LC50 Werte basierend auf die Mortalität mit Dosis-Wirkungs-Kurven (Ritz und Streibig, 2005) zu verschiedenen Zeitpunkten. Verwenden Sie die Drm -Funktion in der DRK-Paket R v3.2.3 (R Development Core Team, 2016) oder ähnlichen statistischen Ansätzen.</li>
	</ol>
</li>
</ol>3. chronische Exposition Protokoll
Hinweis: Ziel ist es bei einem Minimum von 25 Fische/Zustand zu Beginn des Experiments, um Chancen auf einen verzerrten Geschlechterverhältnis zu minimieren und um mögliche Hintergrund Sterblichkeit aufgrund natürlicher Ursachen (zB. altersbedingte Mortalität).
<ol><li>Schraffuren (siehe Abschnitt 1)</li>
	<li>Phase-I (2 Tage nach dem Schlupf-16 Tage nach dem Schlupf)<ol>
<li>Protokoll zu folgen, wie unter 2.1-2.4</li>
		<li>Wie in der zweiten Phase des Experiments wird das Medium im Laufe der Woche (keine Erfrischung, siehe unten) abgebaut. Speichern Sie die erforderliche Menge des Mediums für eine Woche in großen inerten Behältern um ähnliche Abbau der Verbindung zu ermöglichen.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Phase II (16 Tage nach dem Schlupf-Ende)<ol>
<li>Bereiten Sie 2 L experimentelle Gläsern durch Komplexbildner sie mit der Verbindung. Füllen Sie die Gläser mit den korrekte Belichtung Medium und fügen ein Luftschlauch um das Glas zu belüften. Haus Fisch einzeln in diesen Gläsern für den Rest des Experiments. Erlauben Sie die visuelle Interaktion, ethische Standards unterzubringen.</li>
		<li>Das Medium einmal pro Woche zu aktualisieren. Übertragen Sie die Fische mit einem Netz auf eine neue JAR-Datei mit dem gleichen Belichtung Medium. Nehmen Sie Wasserproben jeden Tag während einer Woche, den Abbau der Verbindung in jeder Konzentration Behandlung zu überwachen. Berechnen Sie eine Abbau-Kurve für jede Behandlung wenn mehrere Stressoren sind (z. B. Toxizität eines Stoffes in verschiedenen Temperaturregime) getestet. Messen Sie abiotischer Parameter (pH-Wert, Temperatur, % gelösten Sauerstoff, Leitfähigkeit) dreimal pro Woche.</li>
		<li>2 Tage nach dem Schlupf (Dph) bis 23 Dph füttern Sie die Fische zweimal pro Tag, 7 Tage pro Woche ad libitum Artemia Nauplien. Ergänzen Sie von 24 Dph - 37 Dph die Ad LibitumArtemia Ernährung mit gehackten Chironomus -Larven. Von 38 Dph auf füttern Sie die Fische zweimal pro Tag, 7 Tage pro Woche Ad Libitum Chironomus Larven eingefroren.</li>
	</ol>
</li>
	<li>Endpunkte<ol>
<li>Überprüfen Sie täglich Fisch für Sterblichkeit, Stress oder Krankheit12.</li>
		<li>Um Wachstum zu bestimmen, Messen der Körpergröße auf einer wöchentlichen Basis (9 Dph - 16 Dph - 21 Dph -...) durch die Übertragung von Fisch zu einer Petrischale mit Medium aus ihrem Reservoir gefüllt. Fotografieren Sie 4-5 Größe kalibriert die Fische von oben (auf einer bestimmten Höhe) und analysieren sie Digital mit einer räumlichen Messprogramm (z.B. ImageJ). Hinweis: Für Erwachsene Fische, verwenden Sie eine höhere Petrischale, um Umgang mit Stress zu minimieren, indem man alle Fische unter Wasser während des gesamten Prozesses zu messen.</li>
		<li>Für männliche Reifung Sichtkontrolle Fisch täglich für die Färbung von 15 Dph ab. Überprüfen Sie die Flossen auf erste Anzeichen einer bräutlichen Färbung (sekundäre sexuelle Merkmal). Verwenden Sie den ersten Tag, an dem das für männliche Reifezeit als Proxy sichtbar ist.</li>
		<li>Paar nicht geschlechtlich Fisch mit Männchen der gleichen Behandlungsgruppe oder nicht-experimentellen Männer dreimal pro Woche von 30 Dph ab um weibliche Reifezeit (der Tag, den das erste Ei hinterlegt ist) zu bestimmen. Verwenden Sie dazu das Laichen Protokoll in 3.4.5 beschrieben.</li>
		<li>Fruchtbarkeit, paar Reifen Frauen mit Reife Männer 3 Mal / Woche ab 30 Dph ab, innerhalb ihrer Behandlungen eine Kreuzung-Schema verwenden.<ol>
<li>Bereiten Sie eine laichbeckens (1 L) für jedes Paar mit Exposition Medium aus dem männlichen Aquarium ergänzt mit Substrat Laichen (feiner Sand < 500 µm).</li>
			<li>Transfer der männlichen und weiblichen in den Laich Tank und es ihnen ermöglichen, zwei Stunden lang zu laichen. Minimieren Sie menschliche Aktivität oder Störungen rund um den Laichen Behältern während dieses Prozesses.</li>
			<li>Danach übertragen Sie sanft Fisch wieder auf ihre ursprüngliche Gehäuse-Container ohne unnötige Vermischung des Wassers, die die Eier im Substrat Laichen Wirbeln würde.</li>
			<li>Ausfiltern Sie die Eizellen durch Gießen das Laichen Substrat über ein Netz von 500 µm her. Zählen die Eizellen und übertragen Sie sie (mit weichen einer Pinzette) in feuchten Torf in Petrischalen9,14.</li>
			<li>Toten Eiern täglich zu entfernen. Nach eine Woche, Siegel der Petri dish mit Abdichtung Film und bewahren Sie es an eine Temperatur gesteuert Inkubator bei 28 ° C und einem 14:10 h hell: Dunkel-Zyklus für sofortige Entwicklung der DIII-Phase (d. h. bereit, schlüpfen nach etwa drei Wochen). Für die langfristige Lagerung speichern Sie die Eizellen bei 17 ° C in ständiger Dunkelheit auf dem Eiern geben Sie die Ruhephase und bleiben für mehrere Jahre lebensfähig. Bei der Einstellung von Fischen aus diesen ruhenden Eiern für Experimente, übertragen Sie die ruhenden Eiern auf 28 ° C mit 14:10 h hell: Dunkel-Zyklus für etwa drei Wochen, um Entwicklung der DIII-Phase zu ermöglichen.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Das kritische thermische Maximum (CTmax) (ein Maß für die Leistung15) geschlechtsreifer Fische zu messen.<ol>
<li>Verwenden Sie ein Wasserbad, das erhitzt wird mit einer Konstanten Rate von 0,33 ° C/min und in denen das Wasser zirkuliert kontinuierlich. Fügen Sie mehrere 1 L Aquarien für jeden einzelnen Fisch. Hinweis: Da Platzverhältnisse im Wasserbad, ist es notwendig, in mehreren Serien zu arbeiten. Mögliche Unterschiede in den Bedingungen unter Serien sollte berücksichtigt werden, bei der statistischen Analyse von einschließlich "Serie" als einen Zufallsfaktor.</li>
			<li>Die Testphase zu starten, indem Sie das Aquarium Fische hinzufügen, wenn das Wasser im Aquarium die experimentelle Aufzucht Temperatur der Fische (in der Regel 28 ° C) erreicht hat Überwachen Sie die Temperatur in der 1 L-Aquarien des CTmax Bades alle 5-min mit einem digitalen Thermometer (0,1 ° C-Skala).</li>
			<li>Am Ende der Verhandlung, wenn die Fische nicht dorsal-ventral aufrecht zu erhalten oder beginnt stark zucken16,17. Messen Sie die Temperatur in der 1 L-Aquarium, das die kritischen maximale Temperatur ist. Übertragen Sie den Fisch zurück zu seinem experimentellen Gehäuse für die Wiederherstellung.</li>
		</ol>
</li>
		<li>Messen Sie das Gewicht (0,1 mg Genauigkeit) der Fische am letzten Tag des Experiments, indem klopfte es trocken und übertragen es auf einem Boot mit einem Gewicht von. Hinweis: Alle Fische sollte vier Stunden nach der letzten Fütterung um Lebensmittel Gewicht im Darmtrakt zu standardisieren gemessen werden.</li>
		<li>Einschläfern der Fische mit 0,1 % Tricaine.</li>
	</ol>
</li>
</ol>4. transgenerationalen Exposition Protokoll
Hinweis: Zur Messung der transgenerationalen Auswirkungen von Schadstoffen auf N. FurzeriFolgen der chronischen Exposition Protokolls beschriebenen für die erste Generation.
<ol><li>Zweimal wöchentlich prüfen die Entwicklung der produzierten Eier (d. h. der zweiten Generation) bei 28 ° C gelagert 14:10 h hell: Dunkel-Zyklus Bedingungen durch die Überprüfung der Petrischalen für Embryonen in der DIII-Phase (siehe Polačik Et Al. 2016-9). Wenn mehr als 50 Wiederholungen jeder elterlichen Behandlung voll entwickelt sind, schlüpfen sie nach der 1.1-Protokolls.</li>
	<li>Gesunde, lebhafte Fisch zu den gleichen Aufbau und Behandlung als die elterliche Fische aussetzen.</li>
</ol>

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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Diese Arbeit beschreibt eine neue Bioassay mit Nothobranchius Furzeri, einer aufstrebenden Modellorganismus, um das Individuum zu studieren und langfristige Auswirkungen der Giftstoffe und andere Stressfaktoren kombiniert. Die vorgestellten Protokolle wurden erfolgreich eingesetzt, um die Empfindlichkeit der Gattung in ein Array von Schadstoffen (Kupfer, Cadmium, 3,4-Dichloroaniline und Chlorpyrifos) zu messen. Aufgrund seiner schnellen Lebenszyklus dieses Wirbeltiere Modell ermöglicht eine Beurteilung der suble...

Empfindlichkeit-Profile aus einer Reihe von Arten, strategisch ausgewählten Schadstoffen wurden beschrieben1 für die europäischen REACH-Gesetzgebung (Registrierung, Bewertung, Zulassung und Beschränkung von Chemikalien). Akute oder kurzfristige Toxizitätstests wurden meist für diesen Zweck eingesetzt, da sie einen schnellen Hinweis auf eine Art Sensibilität geben. Jedoch in ihrer natürlichen Umgebung Organismen sind über einen viel längeren Zeitraum ausgesetzt und vollständigen Lebenszyklus oder sogar mehrere Generationen möglicherweise betroffenen2. Darüber hinaus sind Organismen in verschmutzter Umgebung in der Regel ausgesetzt mehr als ein Stressor in einer Zeit, die miteinander interagieren kann, wodurch möglicherweise die synergistische Effekte3. Daher können sichere Konzentrationen berechnet basierend auf akute, einzelne Stressor Toxizitätstests unterschätzen die tatsächlichen Risiken von Schadstoffen in natürlichen Umgebungen. Es ist daher ratsam, auch die chronischen und Mehrgenerationen subletalen Konzentrationen von Schadstoffen in einem ökologisch relevanten Kontext untersuchen wie von der Europäischen Kommission4,5 und USEPA (United befürwortet States Environmental Protection Agency)6,7. Vor allem in vertebrate Forschung sind die Kosten in Bezug auf Arbeit, Geld und Zeit hoch, bei chronischen und Mehrgenerationen Belichtung Studien wegen der relativ langen Lebensdauer der Wirbeltiere im Vergleich zu Wirbellosen Modellorganismen. Daher ist es ratsam, die am besten geeignete Fische Modellorganismus, je nach Fragestellung wählen. Darüber hinaus sollte eine breite Palette von Wirbeltieren zur Verfügung, um die Allgemeingültigkeit der Antworten über Artgrenzen Regelungen basierend auf den empfindlichsten Arten anpassen können zu testen. Denn jetzt gibt es eine Notwendigkeit zur Entwicklung neuer, effizienter Protokolle mit vertebrate Model Art zeichnet sich durch kurze Lebenszyklen, senken Sie die Kosten für die Durchführung von chronischen und Mehrgenerationen-Risiken auf Wirbeltiere7,8.
Die türkisfarbenen Killifische Nothobranchius Furzeri ist ein interessantes Modell der Fisch in solchen langfristigen Exposition Experimenten wegen seiner kurzen Reifezeit und Lebenszyklus (weniger als 4 Wochen9Generationszeit) zu verwenden. Dies bedeutet, dass ökologisch relevanter Endpunkte wie Reifezeit und Fruchtbarkeit innerhalb eines kurzen Zeitraums im Vergleich zu anderen Fisch Modelle7studiert werden können. Außerdem produzieren diese Fische Trockenheit, ruhende Eizellen, die für mehrere Jahre lebensfähig, wenn unter normalen Bedingungen, wodurch die Notwendigkeit für eine kontinuierliche Kultur9gespeichert bleiben. Ökotoxikologische Untersuchungen bedeutet dies auch, dass replizieren, die Fische alle zum exakt gleichen Zeitpunkt ausgebrütet werden können was Zeit synchron für alle Tiere, auch unter den Chargen von Eiern zu unterschiedlichen Zeiten. Wir empfehlen das Labor GRZ Stamm Belichtung Experimente durchführen. Diese Belastung führt auch unter Laborbedingungen, ist homozygot (mit Ausnahme der Geschlechtschromosomen) und das Genom ist gut charakterisierten10,11.
In Ökotoxikologische Untersuchungen ist es wichtig, den entsprechenden Testkonzentrationen auszuwählen. Verschiedene ergänzende Methoden können zu diesem Zweck verwendet werden. Der nominale Konzentrationsbereich kann auf die Empfindlichkeit von einer verwandten Art, z. B. Nothobranchius aus12beruhen. Alternativ kann die Reichweite basieren auf die Empfindlichkeit des standard Fisch Modelle, z. B. Zebrafisch (Danio Rerio)2 , die eine vergleichbare Sensibilität für die meisten Giftstoffe (Philippe Et al. (im Rückblick)). In Kombination mit beiden Optionen sollte ein Experiment zur Dosisfindung durchgeführt werden, um die sollkonzentration Bereich auszuwählen. Für akute testen, sollten Forscher Konzentration Behandlungen mit 100 % Mortalität, zwischen Mortalität und 0 % Mortalität nach 24 Stunden nach der Exposition gegenüber der Schlüpfzeit anstreben. Für chronische testen, empfiehlt es sich, laufen die Dosisfindung Experiment für zwei Wochen zu überprüfen, ob larval Sterblichkeit in der Bedingung mit der höchsten Testkonzentrationen 10 % während dieses Bezugszeitraums nicht übersteigt.
Das Protokoll dient Prüfung potenzielle Auswirkungen der Stressoren auf individueller und zellulärer Ebene als Grundlinie, akute und chronische Exposition gegenüber Wasser Schadstoffe auf N. Furzeri, durchzuführen. Es kann auch verwendet werden, um Multi-Stressor Forschung angepasst eine höhere ökologische Relevanz, Mischen von verschiedenen toxischen Verbindungen oder Studium der Wechselwirkungen zwischen Luftverschmutzung und andere natürliche Stressoren (z.B. Raub) durchzuführen oder anthropogene Stressoren (z. B. Erwärmung infolge des Klimawandels).

<table><tbody><tr><td>gereinigtes Wasser Typ 1 (milli Q)</td><td>Millipore</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Meersalz</td><td>Instant Ocean</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2L Kunststofftank</td><td>SAVIC</td><td></td><td>Immer getrenntes Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen</td></tr><tr><td>1L Kunststofftank (Laichen)</td><td>Avamoplast</td><td></td><td>Immer getrenntes Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen</td></tr><tr><td>Netze</td><td>Aqua bilzen</td><td></td><td>Immer getrenntes Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen</td></tr><tr><td>2L Gläser</td><td>Sepac-Flacover</td><td></td><td>Immer separates Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen</td></tr><tr><td>0,5L Gläser</td><td>Sepac-Flacover</td><td></td><td>Immer separates Material für Kontroll- und Toxizitätsbehandlungen</td></tr><tr><td>Artemia Eier</td><td>Ocean Nutrition</td><td></td><td></td></tr><tr><td>chironomus</td><td>Ocean Nutrition</td><td></td><td>gefroren</td></tr><tr><td>tricaine</td><td>Sigma aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Petrischalen</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Parafilm</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pipetten</td><td>MLS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Pinzette</td><td>FST</td><td></td><td></td></tr><tr><td>500 &micro; m Maschensieb</td><td>/</td><td></td><td>selbstgebautes</td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhrchen (2ml)</td><td>MARKE</td><td></td><td>Zur Lagerung von Fisch in Gefrierglasfläschchen</td></tr><tr><td></td><td>Sigma aldrich</td><td></td><td>Für die Wasseranalyse</td></tr><tr><td>Wägeschiffchen</td><td>MLS</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Jiffy 7c Pellets</td><td>Jiffy</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Wasserbad</td><td>Gilac</td><td></td><td>für Ctmax</td></tr><tr><td>flüssiger Stickstoff</td><td>Air liquide</td><td></td><td></td></tr><tr><td>digitales Thermometer</td><td>Testo AG</td><td>testo 926</td><td></td></tr><tr><td>HETO therm Heizung</td><td>Anker Schmitt</td><td></td><td></td></tr><tr><td>kalibrierte Waage</td><td>Mettler-Toledo AG</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Kamera</td><td>/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Plattform für Kamera</td><td>/</td><td></td><td>Selbstbau</td></tr><tr><td>Multiparameter-Kit</td><td>HACH</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Gefrierschrank (-80°; C)</td><td>Panasonic Ultratiefkühlschrank</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td>Katalognummer</td><td>Kommentare</td></tr><tr><td>Fysio</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Homogenisierungspuffer</td><td>VWR</td><td></td><td>0,1&nbsp; M TRIS&ndash; HCl, pH 8,5, 15&nbsp;% Polyvinylpyrrolidon, 153&nbsp; &Mikro; M MgSO4&nbsp; und 0,2 % Triton X-100</td></tr><tr><td>Chloroform:Methanol</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Glyceryltripalmitat</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Amyloglucosidase</td><td>Sigma Aldrich</td><td>A7420</td><td></td></tr><tr><td>Glukoseassay-Reagenz</td><td>Sigma Aldrich</td><td>G3293</td><td></td></tr><tr><td>Biorad Proteinfarbstoff</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>96-Well-Mikrotiterplatte</td><td>Greiner Bio-one</td><td></td><td></td></tr><tr><td>384 Mikrotiterplatten</td><td>Greiner Bio-one</td><td></td><td></td></tr><tr><td>2 ml Glasröhrchen</td><td>Fiers</td><td></td><td>Für die Fettanalyse</td></tr><tr><td>2,5ml eppendorf Röhrchen</td><td>VWR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Homogenisator</td><td>Ultra-turrax TP 18/10</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Photospektrometer</td><td>Infinite M200 TECAN</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Heizung für Glasröhrchen</td><td>Hach CSB REACTOR</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge</td><td>Eppendorf Centrifuge 5415 R</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Inkubator</td><td>Bumako</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

protokoll für akute und chronische Ökotoxizität prüfung von türkis killifische nothobranchius furzeri

Protocol for Acute and Chronic Ecotoxicity Testing of the Turquoise Killifish Nothobranchius furzeri

Killifische Nothobranchius Furzeri ist eine aufstrebende Modellorganismus auf dem Gebiet der Ökotoxikologie und ihre Anwendbarkeit bei akuten und chronischen Ecotoxicity Tests nachgewiesen. Insgesamt ist die Empfindlichkeit der Spezies zu toxischen Verbindungen im Bereich mit, oder höher als die der anderen Modell-Arten.
Diese Arbeit beschreibt Protokolle für akute, chronische und Mehrgenerationen Bioassays Einzel- und kombinierte Stressor Auswirkungen auf N. Furzeri. Aufgrund seiner kurzen Reifezeit und Lebenszyklus erlaubt dieses Wirbeltiere Modell die Studie von Endpunkten wie Reifezeit und Fruchtbarkeit innerhalb von vier Monaten. Transgenerationalen Ökobilanz-Belichtung Studien können in weniger als 8 Monaten durchgeführt werden. Da diese Sorte produziert Eizellen, die Trockenheit sind und bleiben für Jahre lebensfähig, die vor-Ort-Kultur der Arten ist nicht erforderlich, aber Einzelpersonen können rekrutiert werden, wenn erforderlich. Die Protokolle sind auf Maß Lebensgeschichte Züge (Mortalität, Wachstum, Fruchtbarkeit, Gewicht) und kritische thermische Maximum konzipiert.

Zeigen Sie die Ergebnisse der akuten Exposition von N. Furzeri , unterschiedliche Konzentrationen von Kupfer, berechnet wie in 2.5.2, Cleardose-Wirkungs-Beziehungen (Abbildung 1). Gibt es eine Zunahme der Mortalität mit zunehmender vergiftendes Konzentration. LC50 Werte sinken im Laufe der Zeit, was bedeutet, dass mit abnehmender Konzentration, mehr Zeit, vor 50 % der Wiederholungen sterben vergeht. Für detaillierte Ergebnisse auf die akut...

In dieser Arbeit beschreiben wir eine akute, chronische und Mehrgenerationen Bioassay zur Untersuchung der Auswirkungen von Einzel- und kombinierte Stressoren auf die türkisfarbene Killifische Nothobranchius Furzeri. Dieses Protokoll dient zur Lebensgeschichte Züge (Mortalität, Wachstum, Fruchtbarkeit, Gewicht) und kritische thermische Maximum zu studieren.

Protokoll für akute und chronische Ökotoxizität Prüfung von Türkis Killifische Nothobranchius furzeri

The killifish Nothobranchius furzeri is an emerging model organism in the field of ecotoxicology and its applicability in acute and chronic ecotoxicity ...

Das übergeordnete Ziel dieses Experiments ist es, die Auswirkungen von Giftstoffen auf den türkisfarbenen Killifisch Nothobranchius furzeri zu untersuchen. Diese Methode kann helfen, Schlüsselfragen auf dem Gebiet der Ökotoxikologie zu beantworten, wie z.B. die langfristigen Auswirkungen von Stressoren auf wichtige lebensgeschichtliche Merkmale, wie z.B. die Reifezeit, das Wachstum oder die Fruchtbarkeit. Der Hauptvorteil dieses Experiments besteht darin, dass wir ein Wirbeltier mit einem sehr schnellen Lebenszyklus verwenden, was zu zeit- und kosteneffizienten Experimenten führt.Diese Killifische sind ideale Modelle, um die Auswirkungen langfristiger und generationenübergreifender Auswirkungen von Stressoren zu untersuchen. Letztendlich werden sie zu einem besseren Verständnis der Umweltauswirkungen von Giftstoffen beitragen. Obwohl diese Methode neue Einblicke in die kombinierte Wirkung von Giftstoffen und Temperatur liefern kann, kann sie auch auf andere Stressfaktoren wie UV-Strahlung, Nahrungsentzug und PH-Veränderungen angewendet werden.Es ist schwierig, mit Killifischen zu arbeiten, da es sich um ein neues Modellsystem in der Ökotoxikologie handelt und ihre Empfindlichkeit g

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Research

Forschung

JoVE Journal

Environment

Umwelt

Diese Studie bezieht sich auf die Entwicklung und Standardisierung eines wertvollen methodischen Protokoll, um langfristig (14 Tage) letale Toxizität von chemischen Substanzen, industrielles Abwasser oder Abwasser und flüssigen Umweltproben auf dem Salzwasser Krustentier ausgeübt zu...

Langfristige letale Toxizität Test mit dem Krustentier Artemia franciscana</em

Die Messung der Auswirkungen von Umweltschadstoffen auf Fischverhalten ist oft subjektiv und eine Herausforderung vor allem, wenn mit subletalen Endpunkten zu tun haben. Wir beschreiben Methoden , einschließlich Videotechnik Schwimmverhalten der frühen Lebensphase weißen Stör (Acipenser transmontanus) während und nach 96 Stunden akute Exposition gegenüber verschiedenen Konzentrationen von Kupfer zu quantifizieren.

Quantifizieren Fisch Schwimmverhalten in Reaktion auf akute Exposition von wässrigen Kupfer Form von computergestützten Video und digitale Bildanalyse

Endokrin wirksame Stoffe (EDC) stellen ein erhebliches Risiko für die aquatische Umwelt. Kommunale Kläranlagen leisten einen wesentlichen Beitrag zur östrogene Potenz von Oberflächengewässern. Die Methodik in diesem Papier geliefert wird, ermöglicht eine Beurteilung der Wirksamkeit und Eignung von Abwasserbehandlungsverfahren in Bezug auf EDC Entfernung.

Die Verwendung einer Batterie von chemischen und ökotoxikologischen Methoden zur Beurteilung der Wirksamkeit von Abwasserbehandlungsprozesse zu entfernen Estrogenic Potency

Diese Studie umfasst Methoden, um Auswirkungen auf ein Modell Fisch-Host folgende Veränderung der Haut und Darm microbiome Gemeinden Zusammensetzung durch ein Antibiotikum zu offenbaren.

Die Prüfung der Host-Phänotypen in<em&gt; Gambusia affinis</em&gt; Nach der Behandlung mit Antibiotika

Diese Arbeit beschreibt ein neues Protokoll zur Bewertung der Ökotoxizität von Schadstoffen, einschließlich auftauchender Verunreinigungen wie Nanomaterialien, unter Verwendung des marinen Bakteriums Vibrio anguillarum . Diese Methode ermöglicht die Bestimmung der LC 50 oder der Mortalität, die Konzentration, die eine 50% ige Abnahme der Bakterien-Kulturfähigkeit verursacht, nach einer 6-stündigen Exposition.

Ökotoxikologische Methode mit Meeresbakterien<em&gt; Vibrio anguillarum</em&gt; Zur Beurteilung der akuten Toxizität von Umweltschadstoffen

Labor-Gehäuse von Türkis, die Killifische unterzubringen und effizient erhöhen Tausende von einzelnen Fische in eine zentralisierte Wasserfilter-System, mit der gleichen Infrastruktur für standard Zebrafisch genutzt skaliert werden kann. Hier zeigen wir eine Liste von standardisierten Verfahren, die effiziente Killifische Wartung ermöglichen.

Ein Protokoll für Labor Housing von Türkis Killifische (Nothobranchius Furzeri)

In dieser Arbeit werden standardisierte ökotoxikologische Methoden zur Bewertung von Biomarkern in neotropischen Anura-Arten vorgestellt. Insbesondere werden in diesem Artikel verschiedene Methoden auf verschiedenen Ebenen der ökotoxikologischen Bewertung beschrieben, wie z. B. auf genetischer, zellulär-histologischer, biochemischer, morphologischer und individueller Ebene.

Ökotoxikologische Methoden zur Bewertung von Biomarkern auf verschiedenen Skalen in neotropischen Anuren

Dieses Protokoll enthält häufig verwendete Zytotoxizitätstests (Alamar Blue [AB], CFDA-AM-, Neutral Red- und MTT-Assays), die für die Bewertung der Zytotoxizität in Zebrafischembryo- (ZEM2S) und Leberzelllinien (ZFL) in 96-Well-Platten geeignet sind.

Zytotoxizitäts-Assays mit Zebrafisch-Zelllinien

Hier stellen wir eine umfassende Verhaltenstestbatterie vor, einschließlich der neuartigen Aquarien-, Schwarm- und Sozialpräferenztests, um die potenziellen neurotoxischen Wirkungen von Chemikalien (z. B. Methamphetamin und Glyphosat) auf erwachsene Zebrafische mit einem einzigen Tank effektiv zu bestimmen. Diese Methode ist für die Neurotoxizität und die Umweltforschung relevant.

Bewertung der Neurotoxizität bei erwachsenem Danio rerio mit einer Reihe von Verhaltenstests in einem einzigen Tank

Dieses Protokoll beschreibt ein Wirkstoffscreening-Verfahren bei Zebrafischlarven 3-7 Tage nach der Befruchtung, gefolgt von einer morphologischen Beurteilung.

Screening kleiner Moleküle und Toxizitätstests an Zebrafischlarven im Frühstadium

Erfahren Sie akute und chronische Bioassays zur Ökotoxizitätsprüfung mit Nothobranchius furzeri. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Stressoreffekten auf Mortalität, Wachstum und Fruchtbarkeit für umweltwissenschaftliche Risikobewertungen.

Protokoll für akute und chronische Ökotoxizität Prüfung von Türkis Killifische Nothobranchius furzeri

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