Identifizierung von Cyclin-abhängige Kinase 1 spezifische Phosphorylierung Websites durch eine In-vitro- Kinase Assay

Das übergeordnete Ziel dieses in vitro Kinase-Assays ist es, Phosphorylierungsstellen in einem Protein von Interesse zu identifizieren, die spezifisch für die Kinase-Cyclin-abhängige Kinase 1 sind. Die Identifizierung von CDK1-spezifischen Phosphorylierungsstellen ist wichtig, da sie mechanistische Einblicke in die Art und Weise liefern, wie CDK1 den Zellzyklus steuert. Die Regulation des Zellzyklus ist entscheidend für die Phasen-Voll-Chromosomensegregation, und Defekte führen zu Chromosomenaberrationen und Krebs.

Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie auf gereinigten Proteinen beruht und daher auf jeden Modellorganismus angewendet werden kann und zuverlässige Ergebnisse liefert, insbesondere in Kombination mit funktionellen Studien in Zellen. Diese Methode ist wichtig, da die bekannte Anzahl von CDK1-Zielen immer noch gering ist, obwohl CDK1 schätzungsweise acht bis 13% des Proteums phosphoryliert. Obwohl dieses Verfahren CDK1-spezifische Phosphorylierungsstellen identifiziert, kann es modifiziert werden, um Phosphorylierungsstellen für andere Kinasen zu identifizieren, vorausgesetzt, dass die gereinigte Kinase verfügbar ist.