Name: Ein Temperaturgradient Assay thermische Präferenzen der Drosophila Larven bestimmen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-06-25T14:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 59 s
Description: Lernen Sie einen kontinuierlichen Temperaturgradienten-Assay zur Bestimmung thermaler Präferenzen von Drosophila melanogaster-Larven. Diese Methode ermöglicht reproduzierbare Ergebnisse zur Somatosensation.

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<li>Palkar, R., Lippoldt, E. K., McKemy, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+molecular+and+cellular+basis+of+thermosensation+in+mammals%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Opin+Neurobiol%22%5BJournal%5D)">The molecular and cellular basis of thermosensation in mammals.</a> Curr Opin Neurobiol. 34, 14-19 (2015).</li>
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<li>Sokabe, T., Chen, H. S., Luo, J., Montell, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+switch+in+thermal+preference+in+Drosophila+larvae+depends+on+multiple+rhodopsins%5BTitle%5D)+AND+%22Cell+Rep%22%5BJournal%5D)">A switch in thermal preference in Drosophila larvae depends on multiple rhodopsins.</a> Cell Rep. 17, 336-344 (2016).</li>
<li>Ni, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Ionotropic+Receptors+IR21a+and+IR25a+mediate+cool+sensing+in+Drosophila%5BTitle%5D)+AND+%22Elife%22%5BJournal%5D)">The Ionotropic Receptors IR21a and IR25a mediate cool sensing in Drosophila.</a> Elife. 5, 13254(2016).</li>
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</ol>

Die Autoren haben nichts preisgeben.

Um den Erfolg dieses Protokolls sicherzustellen, ist es wichtig, Maßnahmen ergreifen, um eine ausreichende Anzahl von Larven, die Experimente durchführen zu erhalten. Dazu gehören Pre-Fütterung die fliegen in Hefe einfügen-haltigen Fläschchen für 2-3-d zur Eiablage zu verbessern. Die Fläschchen müssen platziert in einer Schale mit Wasser Fläschchen und eingeschlossen in eine klare Plastiktüte, die bewahrt der Feuchtigkeit der Nahrung und fördert effektive Fütterung durch die Larven während der Exposition gegenüber normal...

Thermotaxis wird durch mobile Tiere eingesetzt, um eine Umgebung mit den günstigsten Bedingungen1,2,3auswählen. Wenn das Klima übermäßig heiß oder kalt, dieses Verhalten ist wichtig für das Überleben ist. Darüber hinaus viele Tiere reagieren empfindlich auf sehr kleine Unterschiede in der Temperatur im Bereich von komfortablen und Umgebung mit einer idealen Temperatur aufsuchen. Dies ist von besonderer Bedeutung für wechselwarme Organismen wie Fruchtfliegen, die ihre Körpertemperatur mit der Umgebung equilibrate. Assays, Larven Thermotaxis überwachen wurden maßgeblich bei der Identifizierung und Klärung der Rolle der molekularen Sensoren wie Drosophila Transienten Rezeptor Potential (TRP) Kanäle4,5,6, rhodopsine7,8und Ionotropic Rezeptor-Rezeptoren (IRs)9, die diese Tiere mit Temperatur Empfindlichkeiten in verschiedenen Temperaturbereichen zu verleihen.
Ein zwei-Wege-Choice-Test bietet einen Ansatz zur Untersuchung der thermischer Präferenzen in Larven6,7. Der Test beinhaltet zur Gründung zwei unterschiedliche Temperaturzonen und erlaubt den Tieren, eine Seite über die andere auswählen. Die Ergebnisse von zwei-Wege-Choice-Tests sind robust, vor allem wenn die Temperaturunterschiede zwischen den beiden Optionen groß sind. Darüber hinaus da jedes Assay tabellarisieren nur zwei Gruppen umfasst, können die Daten als einfache Präferenz-Index ausgedrückt werden. Die Leichtigkeit und Einfachheit der zwei-Wege-Wahl-Assays sind auch genetische Bildschirme zugänglich. Eine große Einschränkung ist jedoch, dass viele Experimente erforderlich sind, um die gewünschte Temperatur der Wildtyp oder mutierte Tiere zu etablieren.
Ein gradienter Assay bietet die Möglichkeit, die gewünschte Temperatur in einem einzigen Test8aufzunehmen. Darüber hinaus ermöglicht es im Gegensatz zu den zwei-Wege-Choice-Test, die Auswertung der Verteilung der einer Gruppe von Tieren, konfrontiert mit einer kontinuierlichen Reihe von Temperaturen. Ein gradient Assay verwendet eine Petrischale und Einzeltiere und eignet sich gut für die Charakterisierung von detaillierten Verhaltens einzelner Tiere10. Jedoch da Petrischalen Runde sind, die Größen der Temperaturzonen variieren und sind abhängig von der Entfernung vom Zentrum nach und nach kleiner. Dieses Setup ist daher nicht ideal für die Überwachung der Temperatur-Auswahl der Populationen von Tieren.
Eine kontinuierliche thermischen Gradienten Apparat, der gut geeignet, um die Temperatur-Einstellungen von Gruppen von Larven zu beurteilen ist eine rechteckige Arena beschäftigt und wird hier beschrieben. Das Gerät ist einfach zu konstruieren und montieren. Die Steigung ist linear und ist flexibel, da es verwendet werden kann, inwieweit Thermotaxis über große Temperaturbereiche von 10 ° C bis 42 ° C. Der Test ist schnell und unkompliziert durchzuführen und liefert reproduzierbare Daten. Neben der Berichterstattung der bevorzugten Temperatur der Larven, zeigt es die Präferenzen der Bevölkerung von Tieren über eine gesamte lineare Bereich in einem einzigen Experiment. Aufgrund dieser Vorteile ist es eine ausgezeichnete Wahl für die Identifizierung von Genen, die für Thermotaxis erforderlich.

<table><tbody><tr><td>Gradienten-Assay-Gerät</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>PolyScience 9106, gekühltes/beheiztes 6-Liter-Zirkulationsbad</td><td>Thomas Scientific</td><td>9106</td><td>Dieses Modell wird nicht mehr hergestellt. Zu den aktualisierten Ersatzmodellen gehören: 1186R00 und 1197U04 für 120 V, 60 Hz oder 1184L08 und 1197U04 für 240 V, 50 Hz.</td></tr><tr><td>Aluminium-Prüfplatte (für einseitigen Gradienten)</td><td></td><td></td><td>Außenmaße: 14 x 10,1 x 0,9 cm, Innenmaße: 12,9 x 8,7 x 0,8 cm, schwarz eloxiert.</td></tr><tr><td>Aluminiumplatte (für bidirektionales Gefälle)</td><td></td><td></td><td>25 x 22 x 0,2 cm, schwarz eloxiert.</td></tr><tr><td>Aluminiumblock</td><td></td><td></td><td>Außenmaße: 25,5 x 5 x 1,4 cm, die Parameter der Innenkanäle sind in Abbildung 1D dargestellt.</td></tr><tr><td>Verbinder für Aluminiumblöcke und -schläuche</td><td>McMaster-Carr</td><td>91355K82</td><td></td></tr><tr><td>Tygon Sanitärsilikonschlauch</td><td>Tygon</td><td>57296</td><td>1/4" ID x 3/8" OD x 1/16" Wand</td></tr><tr><td>Name</td><td><>Unternehmen<</td><td>strong>Katalognummer</td><td><>Kommentare</td></tr><tr><td>Artikel und Reagenzien für Assay</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Stößel</td><td>USA Scientific</td><td>17361</td><td>Stößel für 1,5 mL Mikrozentrifugenröhrchen</td></tr><tr><td>Thermometer</td><td>Fluke</td><td>51II</td><td></td></tr><tr><td>Thermoelement</td><td>Fluke</td><td>K Typ</td><td></td></tr><tr><td>Universal Mikroplattendeckel</td><td>Corning</td><td>6980A77</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Schale</td><td>Corning</td><td>9380D40</td><td></td></tr><tr><td>Beschriftungsband (für bidirektionalen Gradienten)</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-951</td><td>Fisherbrand Beschriftungsband 2 Zoll x 14 yds</td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Invitrogen</td><td>16500500</td><td>1%ige Lösung vorbereiten</td></tr><tr><td>Saccharose</td><td>Sigma</td><td>S0389-5KG</td><td>18%ige Lösung direkt vor Beginn des Assays</td></tr><tr><td>Pinsel</td><td>Fisher Scientific</td><td>11860</td><td></td></tr><tr><td>50 mL Zentrifugenröhrchen</td><td>Denville</td><td>C1062-P</td><td></td></tr><tr><td>Scoopula</td><td>Fisher Scientific</td><td>14-357Q</td><td></td></tr><tr><td>500 mL runde Weithalsflasche</td><td>Pyrex</td><td>1395-500</td><td></td></tr><tr><td>Zellsieb (300 mm Pore)</td><td>PluriSelect</td><td>43-50300</td><td>Optionaler Artikel zum Waschen von Larven</td></tr><tr><td>Karton (Fläschchenschale)</td><td>Genesee Scientific</td><td>FS32-124</td><td></td></tr><tr><td>Name</td><td>Company</td><td><>Katalognummer</td><td>Comments</td></tr><tr><td>Drosophila food</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Destilliertes Wasser</td><td></td><td></td><td>22.400 mL</td></tr><tr><td>Maismehl, gelb (extra feinmaschig, beflockt) 20 kg</td><td>LabScientific Inc.</td><td>NC0535320</td><td>1.609 g</td></tr><tr><td>Bierhefe 100 lbs</td><td>MP Biomedicals</td><td>ICN90331280</td><td>379 g</td></tr><tr><td>NutriSoy&reg; Sojamehl (10 kg/Einheit)</td><td>Genesee Scientific</td><td>62-115</td><td>221 g</td></tr><tr><td>Drosophila Agar, Typ II (5 kg)</td><td>Genesee Scientific</td><td>66-103</td><td>190 g</td></tr><tr><td>Karo leichter Maissirup</td><td>Karo</td><td></td><td>1.700 mL</td></tr><tr><td>Methyl-4-hydroxybenzoat (suspendiert in 200 proof Ethanol)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>H5501-5KG</td><td>72 g/240 mL</td></tr><tr><td>Propionsäure puriss. p.a., >99,5% (GC)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>81910-1 L</td><td>108 mL</td></tr><tr><td>Phosphorsäure&nbsp; ACS-Reagenz, &ge; 85 Gew.-% in H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>438081-500 mL</td><td>8,5 mL</td></tr></tbody></table>

ein temperaturgradient assay thermische präferenzen der drosophila larven bestimmen

A Temperature Gradient Assay to Determine Thermal Preferences of Drosophila Larvae

Viele Tiere, einschließlich der Taufliege Drosophila Melanogaster, sind in der Lage, unterscheidende winzige Unterschiede in der Umgebungstemperatur, die ihnen ermöglicht, ihre bevorzugten Thermenlandschaft suchen. Um die Temperatur-Einstellungen von Larven über einen definierten linearen Bereich zu definieren, haben wir einen Test mit einem Temperaturgradienten entwickelt. Um einen Single-direktionalen Verlauf zu etablieren, sind zwei Aluminium-Blöcke mit unabhängigen Wasserbäder, verbunden, die jeweils die Temperatur der einzelnen Blöcke steuert. Die beiden Blöcke setzen die unteren und oberen Grenzen des Farbverlaufs. Der Temperaturgradient entsteht durch eine Agarose-beschichteten Alu-Platte über die zwei Wasser-gesteuerte Blöcke platzieren, damit die Platte erstreckt sich über den Abstand zwischen ihnen. Die Enden der Aluminiumplatte, die oben auf dem Wasser-Blöcke festgelegt ist definiert die minimalen und maximalen Temperaturen und die Regionen zwischen den beiden Blöcken bilden ein linearer Temperaturgradient. Der gradient-Test kann an Larven verschiedener Altersstufen angewendet werden und kann verwendet werden, um durch Mutation entstehende Variationen zu identifizieren, die Ausstellung Phänotypen, wie jene mit Mutationen Gene codieren, TRP-Kanäle und Opsins, die für Temperatur Diskriminierung erforderlich sind.

Um eine 18 ° C - 28 ° C Single-direktionale etablieren soll Gefälle, wir die Temperaturen der zwei Wasserbäder 16,8 ° C und 31 ° C. Wir erreichen die Temperaturen auf 13 Punkte durch Messen der Temperatur bei 26 Positionen innerhalb der oberen und unteren Abschnitte aller 6 Zonen, die Grenzlinien zwischen den Zonen und an den äußersten Enden der Agarose-Gel-Oberfläche (Abbildung 2, 2E). Die Temperaturverteilung entlang der Steigung war fast l...

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um die bevorzugte Umgebungstemperatur von Drosophila -Larven mit einem kontinuierlichen Temperaturgefälle zu bestimmen.

Ein Temperaturgradient Assay thermische Präferenzen der Drosophila Larven bestimmen

Many animals, including the fruit fly, Drosophila melanogaster, are capable of discriminating minute differences in&#160;environmental temperature, which ...

Diese Methode kann verwendet werden, um eine Schlüsselfrage auf dem Gebiet der Somatoempfindung zu beantworten, dem Mechanismus, durch den ein Tier, wie z. B. Drosophila melanogaster, seine bevorzugte Umgebungstemperatur wählt. Der Hauptvorteil dieser Technik besteht darin, dass sie die bevorzugte Temperatur der Larvengruppe in einem einzigen Assay ermitteln kann, wenn sie mit einem kontinuierlichen Temperaturbereich konfrontiert wird. Neben dem Einblick in die Temperaturpräferenzen von Drosophila-Larven kann die Impress-Platte auch für den Einsatz mit anderen Modellorganismen wie dem Wurm C. elegans angepasst werden.Zuerst Hefepaste herstellen, um Fläschchen für ein Kreuz vorzubereiten. Hefegranulat in destilliertem Wasser mischen und mit einem Stößel zu einer Paste mahlen. Fügen Sie dann einen Klecks Hefepaste in der Nähe der Innenwände von Standard-Drosophila-Fläschchen direkt über der Oberfläche des Lebensmittels hinzu.Um die Larven zu produzieren, sammeln Sie 12 bis 35 Weibchen und bis zu halb so viele Männchen, aber nicht mehr als 10 Männchen. Kombinieren Sie diese Gruppen in der Durchstechflasche mit Hefepaste. Legen Sie die vorbereiteten Fläschchen in ein Tablett mit 100 Fläschchen.Legen Sie 20 offene Fläschchen mit Wasser in die Schale, um für Feuchtigkeit zu sorgen. Verschließen Sie dann das Tablett in einer durchsichtigen Plastiktüte und inkubieren Sie es 48 Stunden lang bei 25 Grad Celsius. Nach 48 Stunden Fütterung und Paarung füllen Sie die Fliegen in neue Futterfläschchen um, um Eier zu sammeln.Tippen Sie darauf. Verwenden Sie kein Kohlendioxid. Lassen Sie die Fliegen dann drei Stunden lang bei 25 Grad Celsius Eier legen.Nehmen Sie später die erwachsenen Tiere heraus und legen Sie die Fläschchen mit den Eiern zurück in die Schale mit den Wasserfläschchen und schließen Sie den Beutel. Dann entwickeln Sie die Eier bei 25 Grad Celsius bis zum gewünschten Larvenstadium. Um einen einzelnen Richtungsgradienten vorzubereiten, erstellen Sie zunächst eine menschliche Umgebung für den Assay.Legen Sie zwei Aluminiumblöcke, die zu separaten Wasserbädern verbunden sind, im Abstand von 10 Zentimetern auf nasse Papiertücher. Die Wasserbäder müssen im Vorfeld aufgewärmt werden. Stellen Sie anschließend 100 Milliliter 1%Agarose her und geben Sie 25 Milliliter auf jede Assay-Platte auf einer ebenen Fläche.Sobald die Agarose fest geworden ist, reiben Sie die Oberfläche vorsichtig mit einem Melaminschwamm ab, um sie leicht grob zu machen. Um eine effiziente Temperaturübertragung zu fördern, füllen Sie dann alle Lücken zwischen den Aluminiumblöcken in den Assay-Platten mit Wasser, das aus einer Sprühflasche geliefert wird. Platzieren Sie nun die Testplatten auf den Aluminiumblöcken und stellen Sie sicher, dass die Abgrenzungen zwei Zentimeter von jeder Kante entfernt sind, um genau mit den Kanten der Aluminiumblöcke übereinzustimmen.Sprühen Sie anschließend einen Wasserfilm auf die Oberfläche der Platten, damit die Gele nicht austrocknen. Decken Sie als Nächstes das System mit einem Karton ab, um die Verdunstung zu reduzieren und die Temperatur der Geloberfläche zu stabilisieren. Warten Sie fünf bis 10 Minuten, damit sich die Temperatur ausgleichen kann.Überprüfen Sie dann die Oberflächentemperatur auf der Platte an mindestens 12 Stellen, um sicherzustellen, dass überall eine gleichmäßige Temperatur von zwei Grad Celsius herrscht oder nicht. Setzen Sie dann den Deckel der Box wieder auf, bis der Assay durchgeführt wird. Um saubere Larven zu isolieren, geben Sie zunächst etwa 40 Milliliter 18%ige Saccharoselösung in ein 50-Milliliter-Reagenzglas.Setzen Sie dann die Larven aus den Futterhaufen mit einer Scoopula in die Lösung um. Als nächstes mischen Sie die Larven mit der Scoopula gründlich in der Lösung herum. Warten Sie nun 30 bis 60 Sekunden, bis die Larven in die oberste Schicht der Röhre geschwommen sind.Gießen Sie dann die Lösung mit den Larven in ein weiteres 50-Milliliter-Röhrchen ab und füllen Sie sie mit frischer 18%iger Saccharose auf. Warten Sie erneut, bis die Larven aufschwimmen. Das Vorhandensein von Lebensmitteln kann die Ergebnisse beeinflussen.Um reproduzierbare Ergebnisse zu erzielen, ist es daher wichtig, die Larven gründlich zu reinigen, um die Kontamination mit Lebensmitteln zu minimieren. Tun Sie dies vorsichtig, um Schäden an den Larven zu vermeiden. Legen Sie als Nächstes ein 300-Mikron-Zellsieb auf ein 50-Milliliter-Röhrchen und entfernen Sie dann alle toten Körper und Treibstoffe von der Oberfläche der Saccharoselösung.Gießen Sie nun die Larven durch das Sieb, um sie auf dem Maschensieb zu sammeln. Lassen Sie dann zweimal etwa 50 Milliliter Wasser durch das Sieb laufen, um die Larven weiter zu reinigen. Spülen Sie dann auf eine leere 35-Millimeter-Schale die meisten Larven mit Wasser vom Sieb ab.Verwenden Sie einen Pinsel, um die restlichen Larven auf das Netz zu übertragen. Saugen Sie dann den größten Teil des Wassers mit einer Mikropipette aus der Schale ab. Legen Sie dann den Deckel verkehrt herum auf die Schale, damit die Larven nicht entweichen können.Lassen Sie die Larven nun 10 bis 20 Minuten lang sich erholen, bevor Sie den Assay starten. Entfernen Sie zuerst den Karton über dem Gel und überprüfen Sie schnell die Oberflächentemperatur des Gels. Wenn die Oberfläche trocken ist, sprühen Sie eine kleine Menge Wasser auf die Oberfläche.Wenn das Gel gut ist, dann laden Sie 100 bis 200 Larven mit einem kleinen Pinsel in die Mitte jeder Platte. Setzen Sie dann einen Deckel über jede Testplatte, um die Larven einzufangen, und decken Sie das Setup mit einem Karton ab, um Lichteinwirkung zu verhindern. Die Analyse ist derzeit im Gange.Entfernen Sie nach 10 bis 30 Minuten den Karton und den Mikrotiterplattendeckel. Fotografieren Sie dann die Platten von oben, um die Position der Larven festzuhalten. Platzieren Sie die Box über der Kamera, um Reflexionen auf der Oberfläche des Gels zu vermeiden.Um die Platte zu reinigen, saugen Sie alle Larven dort ab, wo sie sich verstreut haben. Berechnen Sie nun die prozentuale Verteilung der Larven in jeder Zone mit Hilfe einer Bildanalysesoftware. Ziehen Sie alle zwei Zentimeter Linien, basierend auf den Abgrenzungen auf der Testplatte, und zählen Sie die Anzahl der Larven in jeder Zone.Ignorieren Sie bei der Zählung Larven, die in Rillen mit einem Abstand von 0,5 Zentimetern von jeder Kante verteilt sind, da die Geldicke und die Temperaturbedingungen in der Nähe der Kante nicht einheitlich sind. Bei 18 Grad Celsius bis 28 Grad Celsius wurde ein einseitiger Gradient mit Wasserbädern von 16,8 Grad Celsius und 31 Grad Celsius erzeugt. Es zeigte sich, dass die Temperaturverteilung entlang des Gradienten nahezu linear ist.Kontrolllarven wurden in verschiedenen Altersstufen untersucht. Die erste, zweite und frühe dritte Larve des Stadiums zeigten Spitzenpräferenzen für die 24-Grad-Celsius-Zone. In der Mitte des dritten Stadiums sammelten sich die meisten Larven im 18-Grad-Celsius-Bereich an.Nicht wandernde Larven im späten Drittel des Stadiums waren dicht gedrängt in der 18-Grad-Celsius-Zone. Die Neigung zur Akkumulation in der 18-Grad-Celsius-Zone im Kontrollstamm, bei dem es sich um White 1118 handelte, war nicht auf einen Kanteneffekt zurückzuführen, da sich die Larven des späten Drittels immer noch in der 18-Grad-Celsius-Zone ansammelten, wobei ein bidirektionaler Gradient verwendet wurde. Als wir Larven im späten Drittel des Stadiums analysierten, die Mutationen beherbergten, die für die Temperaturunterscheidung erforderlich sind, änderten sich die Ergebnisse.Larven mit einer Nullmutation in trpA1, die gleichmäßig über den gesamten Gradienten von 18 Grad Celsius bis 28 Grad Celsius verteilt sind. Larven, denen nur die A- und B-Isoformen oder die C- und D-Isoformen von trpA1 fehlten, zeigten ebenfalls starke Beeinträchtigungen. Larven mit einer Mutation in einem von zwei Genen, die für Phospholipase c beta, norpA, kodieren, wurden ebenfalls gestört.Larven mit einer Mutation in einem Gen, das für die andere Phospholipase c beta, plc21c, kodiert, verhielten sich jedoch normal. Nachdem Sie sich dieses Video angesehen haben, sollten Sie ein klares Verständnis davon haben, wie Sie mit einem kontinuierlichen thermischen Gradienten reproduzierbare Ergebnisse erzielen können, der es Ihnen ermöglicht, die Temperaturpräferenzen von Wildtyp- und mutierten Drosophila-Larven zu vergleichen. Einmal gemeistert, kann diese Technik in 30 Minuten für einen einzigen Assay durchgeführt werden.Bei diesem Verfahren ist es wichtig, auf den Zustand der Fliegenfläschchen zu achten und die Larven nicht zu verwenden, wenn sie ausgetrocknet sind. Diese Technik vereinfacht die Entdeckung neuer Gene, die Drosophila-Larven benötigen, um ihre Lieblingstemperatur im angenehmen Bereich zu wählen.

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In diesem Artikel zeigen wir, Assays, um thermische Nozizeption in...

Lokale und globale Methoden zur Beurteilung der thermischen Nozizeption in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larven

Dieses Video beschreibt den Geschmackspräferenz-Assay, eine Verhaltensmethode, die verwendet wird, um die Anziehungskraft oder Vermeidung von farbigen Lösungen, die anders schmecken, zu messen, indem die Bauchfärbung der Fliege nach der Einnahme der bevorzugten Substanz bewertet wird. Das vorgestellte Protokoll demonstriert das Verfahren, mit dem die Präferenz von Fliegen für Lösungen mit unterschiedlichen Saccharosekonzentrationen gemessen wird.

Geschmackspräferenz-Assay: Eine Methode zur Messung des Fressverhaltens bei Drosophila

Drosophila-Larven haben dedizierte sensorische Neuronen - Nozizeptoren -, deren Reaktion auf potenziell schädliche thermische Reize aversives – oder sogenanntes "nozifensives" – Verhalten im Tier auslöst. Dieses Video beschreibt eine Methode zur Beurteilung der thermischen Nozizeption durch Aufzeichnung des Larvenverhaltens als Reaktion auf die lokale Anwendung einer Wärmesonde auf die Nagelhaut. Diese Methode wird daher als lokaler Wärmesonden-Assay bezeichnet.

Lokaler Wärmesonden-Assay: Eine Methode zur Beurteilung der Nozizeption hoher Temperaturen bei Drosophila-Larven

Drosophila-Fruchtfliegen können kleine Temperaturänderungen erkennen und daher Umgebungen mit günstigen thermischen Bedingungen auswählen. Dieses Video beschreibt einen Verhaltensassay, der die Temperaturpräferenz von Drosophila-Larven auf einem linearen thermischen Gradienten testet.

Temperaturgradienten-Assay: Eine Methode zum Testen der Temperaturpräferenz bei Drosophila-Larven

Wir haben vor kurzem eine neuartige Drosophila circadiane Ausgabe, Temperaturpräferenz Rhythmus (TPR), in dem die bevorzugte Temperatur in Fliegen steigt während des Tages und fällt während der Nacht identifiziert. TPR wird unabhängig von einem anderen zirkadianen Ausgang, der Motoraktivität, reguliert. Hier beschreiben wir das Design und die Analyse von TPR in Drosophila.

Design und Analyse des Temperaturpräferenzverhaltens und seines circadianen Rhythmus in Drosophila

Dieser Bericht beschreibt eine Methode zur Messung der Larvenaktivität von Drosophila mit dem TriKinetics Drosophila Activity Monitor. Das Gerät nutzt Infrarotstrahlen, um die Bewegungen von bis zu 16 einzelnen Tieren zu erkennen. Die Daten können analysiert werden, um Bewegungsparameter wie Raten und die Positionen der Tiere in den Assay-Kammern darzustellen.

Die Messung der Aktivität in der Larven<em&gt; Drosophila</em&gt; Activity Monitor

Hier zeigen wir einen neuen Assay kalt Nozizeption in Drosophila - Larven zu studieren. Dieser Test verwendet eine speziell angefertigten Peltier Sonde, die eine Brenn schädliche Kältereiz Anwendung und führt zu einer quantifizierbaren kalt spezifischen Verhaltensweisen. Diese Technik wird weiter zelluläre und molekulare Präparation von kalter Nozizeption ermöglichen.

Neuartige Assay für kalte Nozizeption in<em&gt; Drosophila</em&gt; Larvae

Hier präsentieren wir ein Protokoll, um automatisch bestimmen die lokomotorische Leistung von Drosophila bei schwankenden Temperaturen mit einer programmierbaren temperaturgeführte Arena, die schnell und präzise Temperaturänderungen in Zeit und Raum produziert.

Eine automatisierte Methode zur Bestimmung der Leistungsfähigkeit von Drosophila als Reaktion auf Temperaturänderungen in Raum und Zeit

Thermische Grenzwerte können die Umwelt, die Organismen tolerieren, vorhersagen, was angesichts des raschen Klimawandels wertvolle Informationen ist. Hier werden Protokolle mit hohem Durchsatz beschrieben, um kritische thermische Minima und Wärmeabstoßzeiten bei Insekten zu bewerten. Beide Protokolle maximieren den Durchsatz und minimieren die Kosten der Assays.

High-Throughput-Tests kritischer thermischer Grenzwerte bei Insekten

Insekten haben einen optimalen Umgebungstemperaturbereich, in dem sie bleiben möchten, und viele externe und interne Faktoren können diese Präferenz ändern. Hier beschreiben wir eine kostengünstige und einfache Methode zur Untersuchung der Temperaturwahl, die es Insekten ermöglicht, ihr natürliches Verhalten frei zu zeigen.

Bestimmung der Temperaturpräferenz von Moskitos und anderen Ektothermen

Dieser Bericht beschreibt eine Methode zur Messung der Zeit bis zum Knockdown bei adulten Drosophila melanogaster mit einem Drosophila Activity Monitor (DAM2) als Reaktion auf einen Luftleitungs-Wärmestressor in einer Inkubatorkammer. Das DAM2 misst die Aktivität, indem es einzelne Flugbewegungen aufzeichnet, wenn sie einen Infrarotstrahl überqueren. Die Datenanalyse wird durch eine neuartige ausführbare Datei erleichtert, die von den Autoren erstellt wurde.

Hitzetoleranz-Assays mit dem Drosophila Activity Monitor System: Ein Leitfaden für eine ausführbare Anwendung zur Datenanalyse

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