Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in <em>Bacillus subtilis</em> Spores

Juan Wen; Raymond Pasman; Erik  M.M. Manders; Peter Setlow; Stanley Brul

doi:10.3791/59388

Visualisierung von Germinosomes und die innere Membran in Bacillus Subtilis Sporen

JoVE Journal
Bioengineering

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Visualization of Germinosomes and the Inner Membrane in Bacillus subtilis Spores

Visualisierung von Germinosomes und die innere Membran in Bacillus Subtilis Sporen

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08:58 min

April 15, 2019

DOI: 10.3791/59388-v

Juan Wen¹, Raymond Pasman¹, Erik M.M. Manders*^2,3, Peter Setlow*⁴, Stanley Brul*¹

¹Molecular Biology and Microbial Food Safety, Swammerdam Institute for Life Sciences,University of Amsterdam, ²Van Leeuwenhoek Centre for Advanced Microscopy, Swammerdam Institute for Life Sciences,University of Amsterdam, ³Confocal.nl BV., ⁴Dept. of Molecular Biology and Biophysics,UConn Health

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Germinant Rezeptor-Proteine-Cluster in "Germinosomes" in der inneren Membran der Bacillus Subtilis Sporen. Wir beschreiben ein Protokoll mit Superresolution Mikroskopie und Leuchtstoffröhren Reporter Proteine, um Germinosomes zu visualisieren. Das Protokoll zeigt auch Spore innere Membrandomänen, die bevorzugt mit dem Membran-Farbstoff FM4-64 gefärbt sind.

Die superauflösende strukturierte Beleuchtungsmikroskopie 3D-SIM ist eine innovative Technik zur Visualisierung fluoreszierender Reporterproteine von Keimrezeptorclustern in Sporenmembranen. Mit diesen Verfahren, unübertroffene Auflösung der germinosome Lokalisation und Sporen innere Membran Lipid Domänen erreicht werden können. Die Technik wird von Doktorand Juan Wen und Master of Science Student Raymond Pasman von unserem Labor demonstriert werden.

Reinigen Sie vor Beginn des Verfahrens hochpräzise Abdeckungen mit ein-molaren Salzsäure für 30 Minuten in einem sanft schüttelnden Wasserbad, gefolgt von zwei, fünfminütigen Wärern in reinem Typ 1 Wasser. Nach der zweiten Wäsche die Deckellipsen etwa drei Minuten in 100%Ethanol geben, bevor Sie die Deckellipsen trocknen und ihre Klarheit überprüfen. Anschließend gleitet das Glasmikroskop eine Minute lang mit 70% Ethanol, bevor die Dias trocknen und deren Klarheit überprüft wird.

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