February 14th, 2021
Dieser Artikel beschreibt die grundlegenden Laborbedingungen und Protokolle für ein inkrementelles Temperaturregime zur Stimulierung des maximalen Laichens beim mexikanischen Salmler Astyanax mexicanus, einem aufstrebenden Modell für Entwicklungs- und Evolutionsstudien.
So wie der Astyanax mexicanas ein kleiner Fisch ist. Sie ist im Nordosten Mexikos und im Süden von Texas beheimheimischt. Das Wichtige daran ist, dass es in zwei Formen existiert.
Eine Form ist ein oberflächenbewohnender Fisch mit großen Augen und Pigmentierung, und die andere Form ist ein höhlenbewohnender Fisch, der seine Augen und seine Pigmentierung verloren hat. Sie sind immer noch in der Lage, zu laichen, miteinander zu hybridisieren, so dass sie in einer vorwärts gerichteten genetischen Analyse verwendet werden können, um Genetik und Entwicklung zu studieren. Haben auch große Embryonen, die transparent sind, und sie können verwendet werden, um vergleichende Entwicklungsbiologie zu studieren.
Sie werden also seit vielen Jahren als System verwendet, um die Entwicklung der Entwicklung zu verstehen. Einige Tage bevor das Laichen gewünscht wird, beginnen wir, die Fische besser zu füttern. Wir erhöhen auch die Temperatur schrittweise, so dass sie innerhalb der Zeit, in der wir sie laichen sollen, etwa zwei oder drei Tage übermäßig laichen und eine große Anzahl befruchteter Embryonen produzieren, die sich gut und durch die Larvenstadien zu Erwachsenen entwickeln.
Nachdem Sie den Fisch um 10:00 Uhr .m mit einer Prise Tetra-Flocken gefüttert haben, überprüfen Sie den Inkubator, in dem Fingerschüsseln mit sich entwickelnden Embryonen untergebracht werden, und wechseln Sie bei Bedarf das Wasser. Überprüfen Sie den Wasserstand in allen Stauseen und fügen Sie Systemwasser zu allen Reservoirs hinzu, die zur Neige gehen.
Dann stellen Sie den Inkubator auf 23 Grad Celsius Mindestens 30 Minuten nach der ersten Fütterung füttern Sie die Fische in den Zuchtbecken mit einer Prise Eigelbflocken, genügend schwarzen Wurmclustern, damit jeder Fisch im Tank etwa fünf bis 10 Würmer oder beides verzehren kann. Mindestens eine Stunde nach der zweiten Fütterung die Zuchtbecken nach Bedarf schrubben und vorsichtig Zuchtnetze aufstellen, ohne die Tankluftzufuhr zu beeinträchtigen. Entfernen Sie am nächsten Morgen die Zuchtnetze zwischen 9:00 und 10:00 Uhr von den Böden der Tanks des erwachsenen Systems.m.
und verwenden Sie den daran befestigten Schlauch, um die Embryonen vorsichtig in ein Handnetz zu spülen. Drehen Sie das Netz in eine Fingerschüssel mit sauberem Systemwasser um und übertragen Sie etwa 100 Embryonen pro Fingerschüssel in 200 Milliliter sauberes Systemwasser, ergänzt mit 0,00003% Methylenblau. Inszenieren Sie die Embryonen unter einem Lichtmikroskop, um den Zeitpunkt der Befruchtung gemäß dem A-mexicanas-Entwicklungszeitplan abzuschätzen.
Nach der Inszenierung die Fingerschalen für fünf bis sieben Tage in einen Inkubator stellen und die Kulturen mit lebenden Solegarnelen füttern. Notieren Sie für jeden Tank, in dem Embryonen abgeworfen wurden, das Datum und die Tanknummer und notieren Sie die Anzahl und Qualität der abgeworfenen Embryonen. Zeichnen Sie die durchschnittliche Laichzeit gemäß der Staging-Tabelle auf und notieren Sie die Temperatur des Systems zum Zeitpunkt des Laichens der Fische.
Überwachen Sie die Fingerschüsseln der Embryonen den ganzen Tag über, verwenden Sie eine Weidepipette, um tote oder deformierte Embryonen und Trümmer wie nicht gesöhnte Nahrung oder Kot zu entfernen, und wechseln Sie das blaue Wasser nach Bedarf. Um 13:00 Uhr füttern .m. die Fische in den Zuchtbecken wie vorgeführt und stellen die Wassertemperatur auf 24 Grad Celsius ein.
Entfernen Sie dann überschüssige Lebensmittel und Ablagerungen aus den Tanks und schrubben Sie die Tanks, bevor Sie die Netze zurücksetzen. Wiederholen Sie am Mittwoch und Donnerstag die Embryonentnahme und -auswertung, wie für Dienstag gezeigt. Füttern Sie die Fische und stellen Sie das Wasser auf die entsprechende Temperatur ein.
Überprüfen Sie die Embryonen im Inkubator und ersetzen Sie das Fingerschüsselwasser durch frisches methylenblau behandeltes Systemwasser. Reinigen Sie dann die Zuchtbecken nach Bedarf und setzen Sie die Netze zurück. Stellen Sie am Freitag nach der Fütterung der Fische die Wassertemperatur auf 23 Grad Celsius ein und überprüfen Sie die Embryonen im Inkubator.
Am Samstag und Sonntag füttern Sie die Fische. In dieser Abbildung sind die Brutdaten von Juli 2017 bis März 2020 für die Rio Choy und Texas Surface Fish sowie die Los Sabinos, Tinaha und Pachon Höhlenfische dargestellt. Die Daten wurden nach Brutwoche und der durchschnittlichen Anzahl der Embryonen analysiert, die pro Tag während einer einzigen Brutwoche gesammelt wurden.
Die Daten deuten darauf hin, dass die Zucht bei Rio Choy und Texas Surface Fischen sowie bei Pachon Höhlenfischen das ganze Jahr über kontinuierlich war. Die Quantität und Qualität der meisten Rio Choy-Oberflächenfische lag zwischen niedrig und hoch, während die Quantität und Qualität der meisten texanischen Oberflächenfische und Pachon-Höhlenfische zwischen niedrig und mittel lag. Das Laichen war bei Tinaja- oder Los Sabinos-Höhlenfischen nicht kontinuierlich, wobei das Laichen im Spätsommer bis Herbst bei diesen Fischen niedrig oder nicht vorhanden war.
Obwohl die niedrigsten Laichraten für Höhlenfische von Los Sabinos verzeichnet wurden, war die Qualität der Embryonen die beste. Insgesamt zeigte dieser Oberflächenfisch eine bessere Laichmenge und -qualität als Höhlenfische. Mit diesem System können wir Hunderte, tatsächlich Tausende von Eiern alle zwei Monate laichen, und diese Eier werden dann verwendet, diese Embryonen werden dann für viele verschiedene Zwecke verwendet.
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Dieser Artikel beschreibt die grundlegenden Laborbedingungen und Protokolle für ein inkrementelles Temperaturregime zur Stimulation der maximalen Laichbereitschaft bei der Mexikanischen Tetra Astyanax mexicanus, die ein aufstrebendes Modell für Entwicklungs- und Evolutionsstudien darstellt.