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DOI: 10.3791/61713-v
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This study presents a protocol for simultaneous live imaging of multiple specimens using light sheet-based fluorescence microscopy, addressing issues of ambient variance in developmental biology. By utilizing a cobweb holder for stacking embryos, the method enhances the efficacy of imaging while minimizing inconsistencies.
Die Lichtbogen-basierte Fluoreszenzmikroskopie ist das wertvollste Werkzeug in der Entwicklungsbiologie. Ein wichtiges Thema in vergleichenden Studien ist die Varianz der Umgebung. Unser Protokoll beschreibt ein experimentelles Framework für die gleichzeitige Live-Bildgebung mehrerer Proben und befasst sich daher proaktiv mit diesem Problem.
Probenkammerbasierte Lichtblatt-Floreszenzmikroskope sind eher für einen hohen Gehalt als für einen hohen Durchsatz ausgelegt. Live-Imaging-Assays müssen daher sequentiell durchgeführt werden und werden daher weniger von der Umgebungsvarianz beeinflusst. Unsere Spinnwebenhalter ermöglichen das Stapeln und gleichzeitige Imaging mehrerer Embryonen, wodurch Umgebungsschwankungen eliminiert und der Durchsatz erhöht werden.
Das Einsetzen von Embryonen in den Spinnwebenhalter erfordert eine gewisse Fingerspitzengefühl. Ein Erklärvideo eignet sich ideal, um die Abfolge der vielen kurzen Verhaltensgesten zu veranschaulichen. Zur Kalibrierung des Probenkammer-basierten Lichtblatt-Fluoreszenzmikroskops.
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