Probenvorbereitung für computertomographisch basierte dreidimensionale Visualisierung von Murinen Hintergliedmaßengefäßen

Hier beschreiben wir eine Visualisierungs- und Quantifizierungsmethode für murine Hintergliedmaßengefäße mittels Mikro-Röntgen-Computertomographie.

Es ist möglich, CT-Bilder von Blutgefäßen in den unteren Gliedmaßen und den Bauchorganen unter Verwendung des Schrittprotokolls aufzunehmen. Die Methode ermöglicht die Beurteilung der gesamten Blutgefäße umfassend. Darüber hinaus ist es möglich, nur Arterien oder gleichzeitig Arterien und Venen zu bewerten.

Es ist sehr wichtig, Blutgerinnsel, auslaufendes oder gut blutendes Blut zu verhindern und Luftblasen zu vermeiden. Vor der Operation wird 1 Einheit/Gramm Heparin in PBS in die intraperitoneale Höhle der Maus injiziert. Machen Sie nach 30 Minuten einen Mittellinienschnitt im Brustbein der eingeschläferten Maus und fixieren Sie den offenen Thorax mit Stiften.

Schneiden Sie die aufsteigende Aorta ab, bevor Sie das Herz entfernen, und entfernen Sie dann die Lunge, um die absteigende Aorta freizulegen. Schneiden Sie die absteigende Aorta diagonal ab, um den Querschnitt des Gefäßes freizulegen. Als nächstes führen Sie einen 22-Gauge-Katheter in die absteigende Aorta ein, während Sie den Vasodilatationspuffer laufen lassen.

Stecken Sie die Wurzel des Katheters fest und machen Sie einen Knoten, um ein Auslaufen aufgrund des Rückflusses zu verhindern. Sobald Sie fertig sind, beginnen Sie die Perfusion mit einer erwärmten gefäßerweiternden Lösung bei einem festen Druck zwischen 13 und 15 Kilopascal. Nach drei Minuten eine Lösung von 4% Paraformaldehyd in PBS für 3 min perfundieren.

Stoppen Sie die Perfusion und füllen Sie den mit dem Katheter verbundenen Verlängerungsschlauch mit 2 ml des frisch zubereiteten Kontrastmittels, das im Verhältnis 1: 1 verdünnt ist, um bei einem festen Wert zwischen 13 und 15 Kilopascal zu perfundieren. Um Arterien zu visualisieren, überprüfen Sie den Zehennagel des Mundes, um zu bestätigen, dass das Kontrastmittel die Arterie erreicht hat. Überprüfen Sie auf die gleiche Weise die untere Hohlvene des Zwerchfells, um die vollständige Zirkulation des Kontrastmittels zu bestätigen und alle Gefäße zu visualisieren.

Wenn die Zirkulation des Kontrastmittels abgeschlossen ist, schließen Sie den Drei-Wege-Absperrhahn und entfernen Sie das Rohr. Inkubieren Sie die Probe über Nacht bei 4 Grad Celsius. In diesem Protokoll wurden alle Gefäße in den unteren Extremitäten der Maus visualisiert.

Die Ergebnisse eines Ischämiemodells der hinteren Gliedmaßen bestätigten, dass die nicht ligierte Oberschenkelarterie parallel zur Oberschenkelvene verlief. Auch die Unterbrechung der Kontrastmittel machte es einfach, eine ligierte Oberschenkelarterie und die Entwicklung von Kollateralgefäßen zu sehen. Ein paar Gefäße, die mit dem Kontrastmittel gefüllt waren, konnten besichtigt werden.

Auf der anderen Seite wurde auch die Störung der Kontrastmittel aufgrund der Vermischung von nicht kontrastistischen Medien oder unzureichender Durchblutung festgestellt. Es war unmöglich, die Arterien auf der Körperoberfläche durch mikroskopische oder stereomikroskopische Beobachtung des Kontrastmittels zu betrachten, was die Beurteilung von Defekten im Gefäßsystem erleichterte. Es ist sehr wichtig, Luftblasen beim Einführen des Katheters zu vermeiden.

Da auch ihre Bauchorgane entspannt sind, ist es möglich, aus den Organen herauszunehmen und einen CT-Scan zu machen. Mit dieser Methode konnten wir ein neues Sättigungsquartal identifizieren.