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Neuroscience
Gleichzeitige Isolierung der wichtigsten Zelltypen des Zentralnervensystems aus adulten Autoimmun...
Gleichzeitige Isolierung der wichtigsten Zelltypen des Zentralnervensystems aus adulten Autoimmun...
JoVE Journal
Neuroscience
This content is Free Access.
JoVE Journal Neuroscience
Simultaneous Isolation of Principal Central Nervous System-Resident Cell Types from Adult Autoimmune Encephalomyelitis Mice

Gleichzeitige Isolierung der wichtigsten Zelltypen des Zentralnervensystems aus adulten Autoimmun-Enzephalomyelitis-Mäusen

Full Text
2,419 Views
08:49 min
October 6, 2023

DOI: 10.3791/65735-v

Christina B. Schroeter*1, Antonia Henes*1, Anna Vogelsang1, Alexander M. Herrmann1, Stefanie Lichtenberg1, Derya Cengiz1, Vera Dobelmann1, Niklas Huntemann1, Christopher Nelke1, Susann Eichler2, Philipp Albrecht1, Sven G. Meuth*1, Tobias Ruck1

1Department of Neurology, Medical Faculty,Heinrich Heine University Duesseldorf, 2Department of Neurology, Institute of Translational Neurology,University Hospital Muenster

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Overview

This study presents a novel protocol for the simultaneous isolation of all principal central nervous system (CNS) resident cell types from a single mouse, applicable in both naïve and experimental autoimmune encephalomyelitis (EAE) models. This method aims to address the limitations of current cell isolation technologies, allowing researchers to investigate complex cellular interactions during neuroinflammation while minimizing the number of mice used.

Key Study Components

Area of Science

  • Neuroscience
  • Cell Biology
  • Autoimmunity Research

Background

  • Existing protocols often focus on a single cell type or only postnatal mice.
  • The isolation of CNS-resident cells can significantly enhance our understanding of neuroinflammatory processes.
  • The need for a comprehensive and reproducible protocol for cell isolation is increasingly important in the context of autoimmune diseases.

Purpose of Study

  • To develop a reliable protocol for the isolation of all major CNS-resident cell types from one mouse.
  • To facilitate the analysis of cellular networks in health and disease.
  • To enable more accurate studies of inflammatory pathways in neuroinflammation.

Methods Used

  • The study utilizes a cell dissociation method applicable to both healthy and EAE mice.
  • Mice are positioned supine, with a detailed, stepwise dissection protocol to obtain brain and spinal cord tissue.
  • Cell precipitation, washing, and purification protocols are meticulously described, ensuring high yields of CNS cell types.

Main Results

  • The protocol facilitates the simultaneous isolation of microglia, oligodendrocytes, and other CNS-resident cell types for downstream analyses.
  • This method is expected to provide insights into cellular dynamics across different stages of EAE.
  • Critical improvements include reduced animal usage and enhanced data quality from single-mouse CNS preparations.

Conclusions

  • This study demonstrates a novel cell isolation technique that enhances research capabilities in neuroimmunology.
  • The method's ability to analyze complex biomolecular mechanisms from fewer samples presents significant implications for studying CNS disease models.
  • Overall, the protocol can aid in answering key questions regarding neuroinflammation and therapeutic interventions in autoimmune conditions.

Frequently Asked Questions

What are the advantages of this new protocol?
This protocol allows for the simultaneous isolation of multiple CNS cell types from a single mouse, enhancing data quality while reducing the number of animals needed for research.
How is the cell isolation performed?
The cell isolation involves a detailed dissection of the brain and spinal cord, followed by enzymatic digestion and centrifugation to obtain a high-quality cell suspension.
What types of cells can be isolated using this method?
All four major CNS-resident cell types, including microglia and oligodendrocytes, can be simultaneously isolated and analyzed.
Can this protocol be applied to other models?
Yes, it is applicable to both naïve and EAE mice, allowing broader applications in autoimmune research.
What insights can this protocol provide?
It enables investigations into dynamic cellular interactions and inflammatory pathways during the disease process, offering a comprehensive view of CNS conditions.
Are there any limitations to this method?
While the protocol significantly reduces the number of animals required, it still relies on the handling and dissection of live animals, which may introduce variability.

Bis heute sind Protokolle für die gleichzeitige Isolierung aller wichtigsten Zelltypen des Zentralnervensystems aus derselben Maus ein ungedeckter Bedarf. Das Protokoll zeigt ein Verfahren, das in naiven und experimentellen autoimmunen Enzephalomyelitis-Mäusen angewendet werden kann, um komplexe zelluläre Netzwerke während der Neuroinflammation zu untersuchen und gleichzeitig die erforderliche Anzahl von Mäusen zu reduzieren.

Um molekulare und zelluläre Mechanismen bei Autoimmunerkrankungen wie Multipler Sklerose zu untersuchen, ist die Generierung reproduzierbarer und ausgeklügelter Zellisolationsprotokolle ein ungedeckter Bedarf. Die meisten aktuellen Technologien zur Isolierung und Analyse von ZNS-residenten Zellen weisen gravierende Mängel auf, wie z. B. die Fokussierung auf nur einen Zelltyp oder nur postnatale Mäuse. Das derzeitige Protokoll zur gleichzeitigen Isolierung aller wichtigen ZNS-residenten Zelltypen aus einem ZNS-Replikat bietet die Möglichkeit, komplexe neuronale Netzwerke und neue Entzündungswege ex vivo aus einer einzigen Zellsuspension zu analysieren, die auf gesunde Mäuse und solche mit experimenteller autoimmuner Enzephalomyelitis anwendbar sind.

Unser Protokoll zur gleichzeitigen Isolierung aller vier wichtigen ZNS-residenten Zelltypen in gesunden und EAE-Mäusen könnte als hilfreiches Werkzeug für Forschungsgruppen verwendet werden, die neue Entzündungswege untersuchen, da es eine viel genauere Analyse komplexer biomolekularer Mechanismen und zellulärer Netzwerke ex vivo ermöglicht. Neue wissenschaftliche Fragen, die mit Hilfe unseres Protokolls beantwortet werden konnten, sind dynamische Untersuchungen bei EAE in verschiedenen Stadien des Krankheitsverlaufs, wie Neuroinflammation, Neurodegeneration und Remission. Auch Zell-Zell-Interaktionen und biochemische Signalwege konnten auf individueller Ebene untersucht werden.

Ebenso könnten funktionelle Assays mit kultivierten Zellen durchgeführt werden. Wir beabsichtigen, uns auf dynamische Studien des EAE-Kurses zur multi-omischen Analyse von einem einzelnen ZNS-Homogenat pro EAE-Zeitpunkt zu konzentrieren.

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