Name: Isolierung und Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnung von hippokampalen Mikroglia aus adulten Mäusen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2024-09-27T14:47:00.000+00:00
Duration: 8 min 34 s
Description: Lernen Sie die Isolierung und Patch-Clamp-Aufzeichnung von hippokampalen Mikroglia aus adulten Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Ionenkanalaktivität und physiologischen Funktionen in nativer Umgebung.

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<meta charset="utf8"></head><body>Elektrophysiologische Aufzeichnung von Hippocampus-Mikroglia von erwachsenen Mäusen

<ol><li>Ginhoux, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fate+mapping+analysis+reveals+that+adult+microglia+derive+from+primitive+macrophages%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Fate mapping analysis reveals that adult microglia derive from primitive macrophages.</a> Science. 330 (6005), 841-845 (2010).</li>
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<li>Wohleb, E. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Neuron-microglia+interactions+in+mental+health+disorders%3A+For+better%2C+and+for+worse%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Immunol%22%5BJournal%5D)">Neuron-microglia interactions in mental health disorders: For better, and for worse.</a> Front Immunol. 7, 544(2016).</li>
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<li>Sarkar, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglial+ion+channels%3A+Key+players+in+non-cell+autonomous+neurodegeneration%5BTitle%5D)+AND+%22Neurobiol+Dis%22%5BJournal%5D)">Microglial ion channels: Key players in non-cell autonomous neurodegeneration.</a> Neurobiol Dis. 174, 105861(2022).</li>
<li>Hanisch, U. K., Kettenmann, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Microglia%3A+Active+sensor+and+versatile+effector+cells+in+the+normal+and+pathologic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Microglia: Active sensor and versatile effector cells in the normal and pathologic brain.</a> Nat Neurosci. 10 (11), 1387-1394 (2007).</li>
<li>Collins, H. Y., Bohlen, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+culture+of+rodent+microglia+to+promote+a+dynamic+ramified+morphology+in+serum-free+medium%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Isolation and culture of rodent microglia to promote a dynamic ramified morphology in serum-free medium.</a> J Vis Exp. 133, e57122(2018).</li>
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<li>Li, Q., Lan, X., Han, X., Wang, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Expression+of+tmem119%2FSALL1+and+CCR2%2FCD69+in+FACS-sorted+microglia-+and+monocyte%2Fmacrophage-enriched+cell+populations+after+intracerebral+hemorrhage%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Expression of tmem119/SALL1 and CCR2/CD69 in FACS-sorted microglia- and monocyte/macrophage-enriched cell populations after intracerebral hemorrhage.</a> Front Cell Neurosci. 12, 520(2018).</li>
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<li>Delbridge, A. R. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organotypic+brain+slice+culture+microglia+exhibit+molecular+similarity+to+acutely+isolated+adult+microglia+and+provide+a+platform+to+study+neuroinflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Front+Cell+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Organotypic brain slice culture microglia exhibit molecular similarity to acutely isolated adult microglia and provide a platform to study neuroinflammation.</a> Front Cell Neurosci. 14, 592005(2020).</li>
<li>Volden, T. A., Reyelts, C. D., Hoke, T. A., Arikkath, J., Bonasera, S. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Validation+of+flow+cytometry+and+magnetic+bead-based+methods+to+enrich+cns+single+cell+suspensions+for+quiescent+microglia%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neuroimmune+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Validation of flow cytometry and magnetic bead-based methods to enrich cns single cell suspensions for quiescent microglia.</a> J Neuroimmune Pharmacol. 10 (4), 65-665 (2015).</li>
<li>Wulff, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+voltage-gated+kv1.3+k%28%2B%29+channel+in+effector+memory+t+cells+as+new+target+for+ms%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">The voltage-gated kv1.3 k(+) channel in effector memory t cells as new target for ms.</a> J Clin Invest. 111 (11), 1703-1713 (2003).</li>
<li>Tan, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biocytin-labeling+in+whole-cell+recording%3A+Electrophysiological+and+morphological+properties+of+pyramidal+neurons+in+CYLD-deficient+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Molecules%22%5BJournal%5D)">Biocytin-labeling in whole-cell recording: Electrophysiological and morphological properties of pyramidal neurons in CYLD-deficient mice.</a> Molecules. 28 (10), 4092(2023).</li>
<li>Manitz, M. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometric+characterization+of+microglia+in+the+offspring+of+polyi%3AC+treated+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Flow cytometric characterization of microglia in the offspring of polyi:C treated mice.</a> Brain Res. 1636, 172-182 (2016).</li>
<li>Xu, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+modified+protocol+of+mouse+hippocampal+primary+microglia+culture+by+using+manual+dissociation%2C+magnetic+activated+cell+sorting+and+tic+medium%5BTitle%5D)+AND+%22Sheng+Li+Xue+Bao%22%5BJournal%5D)">A modified protocol of mouse hippocampal primary microglia culture by using manual dissociation, magnetic activated cell sorting and tic medium.</a> Sheng Li Xue Bao. 71 (6), 883-893 (2019).</li>
<li>Zelenka, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+protocol+for+the+isolation+of+highly+purified+neonatal+murine+microglia+and+astrocytes%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Novel protocol for the isolation of highly purified neonatal murine microglia and astrocytes.</a> J Neurosci Methods. 366, 109420(2022).</li>
<li>Keren-Shaul, H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+unique+microglia+type+associated+with+restricting+development+of+alzheimer%27s+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">A unique microglia type associated with restricting development of alzheimer's disease.</a> Cell. 169 (7), 1276-1290.e17 (2017).</li>
<li>Yang, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Various+cell+populations+within+the+mononuclear+fraction+of+bone+marrow+contribute+to+the+beneficial+effects+of+autologous+bone+marrow+cell+therapy+in+a+rodent+stroke+model%5BTitle%5D)+AND+%22Transl+Stroke+Res%22%5BJournal%5D)">Various cell populations within the mononuclear fraction of bone marrow contribute to the beneficial effects of autologous bone marrow cell therapy in a rodent stroke model.</a> Transl Stroke Res. 7 (4), 322-330 (2016).</li>
<li>Gingras, M., Gagnon, V., Minotti, S., Durham, H. D., Berthod, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optimized+protocols+for+isolation+of+primary+motor+neurons%2C+astrocytes+and+microglia+from+embryonic+mouse+spinal+cord%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">Optimized protocols for isolation of primary motor neurons, astrocytes and microglia from embryonic mouse spinal cord.</a> J Neurosci Methods. 163 (1), 111-118 (2007).</li>
<li>Ramesha, S., Rayaprolu, S., Rangaraju, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Flow+cytometry+approach+to+characterize+phagocytic+properties+of+acutely-isolated+adult+microglia+and+brain+macrophages+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Flow cytometry approach to characterize phagocytic properties of acutely-isolated adult microglia and brain macrophages in vitro.</a> J Vis Exp. 160, e61467(2020).</li>
<li>Mccarthy, K. D., De Vellis, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Preparation+of+separate+astroglial+and+oligodendroglial+cell+cultures+from+rat+cerebral+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Preparation of separate astroglial and oligodendroglial cell cultures from rat cerebral tissue.</a> J Cell Biol. 85 (3), 890-902 (1980).</li>
<li>Sakmann, B., Edwards, F., Konnerth, A., Takahashi, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Patch+clamp+techniques+used+for+studying+synaptic+transmission+in+slices+of+mammalian+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Q+J+Exp+Physiol%22%5BJournal%5D)">Patch clamp techniques used for studying synaptic transmission in slices of mammalian brain.</a> Q J Exp Physiol. 74 (7), 1107-1118 (1989).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>100 mm Petrischale</td><td>Corning</td><td>353003</td><td></td></tr><tr><td>15 mL Falcon Röhrchen</td><td>BD</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>24-Well-Platten</td><td>BD</td><td>353047</td><td></td></tr><tr><td>35 mm Petrischale</td><td>Corning</td><td></td><td></td></tr> <tr><td>353001-50 mL Falcon Röhrchen</td><td>BD</td><td>352070</td><td></td></tr><tr><td>70 &mu; m-Zell-Screening</td><td>Miltenyi</td><td>130-095-823</td><td>Zur Entfernung von Zellklumpen vor der Zellsortierung</td></tr><tr><td>Erwachsenenmaus Gehirn Dissoziationskit</td><td>Miltenyi</td><td>130-107-677</td><td></td></tr><tr><td>Anti-CD11b Antikörper</td><td>Bio-Rad</td><td>MCA74</td><td>Ziege Anti-Maus IgG ebenfalls erhältlich. Zur Blockierung endogener Immunglobuline.</td></tr><tr><td>Anti-Iba 1 Antikörper</td><td>SYSY</td><td>234308</td><td>Ziege Anti-Meerschweinchen IgG) ebenfalls erhältlich. Zur Blockierung endogener Immunglobuline.</td></tr><tr><td>Axon Digidata 1440A</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Axon MultiClamp 700B Verstärker</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BSA Albumin Fraktion V</td><td>BioFrox</td><td>4240GR500</td><td>Serum</td></tr><tr><td>C57BL/6 Mäuse&nbsp;</td><td>Guangdong Medical Laboratory Animal Center</td><td></td><td></td></tr><tr><td>CD11 b/c Mikroperlen</td><td>Miltenyi</td><td>130-105-634</td><td></td></tr><tr><td>Chloralhydrat</td><td>Absin</td><td>abs47051394</td><td>Weit verbreitet als Anästhesie bei Mäusen</td></tr><tr><td>Clampfit 10.6</td><td>USA</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Konfokales Mikroskop</td><td>Zeiss</td><td>&nbsp; LSM 800</td><td></td></tr><tr><td>Nährmedium</td><td>Fisher Scientific</td><td></td> <td>C11995500BT-DAPI</td></tr> <tr><td>Farbstoff</td><td>Beyotime</td><td>C1002</td><td></td></tr><tr><td>Elektrodenabzieher</td><td>Narishige</td><td>PC-10</td><td></td></tr><tr><td>HBSS</td><td>Servicebio</td><td>G4203</td><td></td></tr><tr><td>Horizontaler Schüttler</td><td>SCILOGEX</td><td>SLK-O3000-S</td><td></td></tr><tr><td>Bildanalysesoftware</td><td>Fidschi</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MACS-Säulen</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-201</td><td></td></tr><tr><td>MACS-Separatoren</td><td>Miltenyi</td><td>130-042-102</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Fisher Scientific</td><td>T353-500</td><td>Verwenden Sie eine frische 4%ige Lösung in 1X PBS, pH 7,2-7,4.</td></tr><tr><td>Poly-L-lysin</td><td>Beyotime</td><td>&nbsp; C0313</td><td>Deckglasbeschichtung</td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr></tbody></table>

isolierung und ganzzell-patch-clamp-aufzeichnung von hippokampalen mikroglia aus adulten mäusen

Isolation and Whole-Cell Patch-Clamp Recording of Hippocampal Microglia from Adult Mice

Kurz gesagt, der Prozess beinhaltet die Isolierung von hippokampalen Mikroglia aus dem erwachsenen Mausgehirn, gefolgt von der Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnung dieser Zellen (Abbildung 1). Das Verfahren beginnt mit der Präparierung des Hippocampus von 3 bis 5 Monate alten erwachsenen C57BL/6J-Mäusen. Konkret wird das gesamte Gehirn nach der Perfusion entnommen und in eine Kulturschale mit eiskaltem PBS gegeben (Abbildung 2A). Um eine akute Isolierung der Zellen aus dem Hippocampus zu gewährleisten, wird die Großhirnrinde entfernt und das sichelförmige Hippocampusgewebe intakt isoliert (Abbildung 2B).
Für eine optimale Zellqualität und anschließende qualitativ hochwertige Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnungen ist es entscheidend, die Verdauungszeit während der Herstellung der Einzelzellsuspension zu kontrollieren. In der Studie wurde das Hippocampusgewebe im Enzymgemisch konsequent manuell gerührt und die Verdauungszeit streng auf nicht mehr als 15 min begrenzt (Abbildung 3). Die Zellen wurden dann mit der MACS-Methode isoliert, wobei eine Reinheit von 86,20 % ± 0,68 % erreicht wurde19,20. Um zu bestätigen, dass es sich bei diesen sortierten Zellen um Mikroglia handelte, wurden Mikroglia-Oberflächenmarker durch Immunfluoreszenz mit anti-Iba1- und anti-CD11b-Antikörpern getestet, die häufig zum Nachweis von Mikroglia18 verwendet werden. Die Ergebnisse deuteten darauf hin, dass die isolierten Zellen CD11b- und Iba1-positiv waren, was die erfolgreiche Isolierung von Mikroglia bestätigte (Abbildung 4).
Um zu beurteilen, ob die akut isolierten Mikroglia für Folgeexperimente von hoher Qualität sind, beschreiben wir, wie Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnungen durchgeführt werden, um die Kaliumströme der Mikroglia zu bewerten. Die aufgezeichneten Mikroglia hatten eine durchschnittliche Membrankapazität von 10,42 ± 2,05 (Abbildung 5). Die Ergebnisse zeigten, dass mikrogliale Kaliumströme aufgezeichnet werden konnten, was darauf hindeutet, dass die akut isolierten Mikroglia für neurobiologische Untersuchungen geeignet sind.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig01.jpg"> 
Abbildung 1: Überblick über den experimentellen Ablauf. Es gibt vier Hauptschritte: Das Hirngewebe wird sorgfältig entnommen und der Hippocampus wird bilateral präpariert; Hippocampusgewebe wird verdaut, um eine Einzelzellsuspension unter Verwendung einer Enzymmischung herzustellen, wie im Protokollabschnitt beschrieben; Die Zielzellen werden durch ein magnetisch aktiviertes Zellsortierverfahren isoliert; und Kaliumströme in akut isolierten Zellen werden durch Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnung untersucht. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig01large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 2" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig02.jpg"> 
Abbildung 2: Dissektion des Hippocampus. (A) Das gesamte Gehirn einer 3 bis 5 Monate alten Maus. (B) Isolierter bilateraler Hippocampus. Maßstab: 0,5 cm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig02large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 3" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig03.jpg"> 
Abbildung 3: Schematische Darstellung der Verdauung des Hippocampusgewebes. Illustration kritischer experimenteller Schritte, die sicherstellen, dass das Hippocampusgewebe durch Zugabe von Enzymmischungen bei 37 °C und kontinuierlichem Schütteln für bis zu 15 Minuten zu einer einzelligen Suspension verdaut wird. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig03large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 4" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig04.jpg"> 
Abbildung 4: Identifizierung akut isolierter hippokampaler Mikroglia. Repräsentative konfokale Bilder, die CD11b- (grün) und Iba1-positive Zellen (rot) zeigen, die aus dem Hippocampus gereinigt wurden, was bestätigt, dass es sich bei den isolierten Zellen um Mikroglia handelt. Maßstab: 10 μm. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig04large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
<img alt="Figure 5" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/67315/67315fig05.jpg"> 
Abbildung 5: Aufzeichnung von Kaliumströmen der Mikroglia der gesamten Zell. (A) Eine Aufzeichnungselektrode wird auf der Oberfläche isolierter hippocampaler Mikroglia positioniert. Maßstabsbalken: 20 μm. (B) Repräsentative Kaliumströme von akut isolierten hippokampalen Mikroglia unter Bedingungen der Spannungsklemme. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/67315/67315fig05large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>

Isolierung und Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnung von hippokampalen Mikroglia aus adulten Mäusen

Microglia are resident immune cells in the brain that interact with neurons to maintain the homeostasis of the central nervous system (CNS). Studies show ...

isolation-whole-cell-patch-clamp-recording-hippocampal-microglia-from

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Die Herstellung von akuten Hirnschnitten aus isolierten hippocampi, sowie die gleichzeitige elektrophysiologischen Ableitungen von Astrozyten und Neuronen...

Dual-Elektrophysiologische Recordings synaptisch-evozierte astrogliale und neuronale Antworten in Acute Hippocampusschnitte

Das Video demonstriert eine Technik zur Isolierung von Mikroglia aus der Rinde eines erwachsenen Mäusegehirns. Zunächst wird der Kortex segmentiert und homogenisiert, um Neuronen und andere Gliazellen zu entfernen und die Mikroglia zu erhalten. Anschließend wird die Zellsuspension magnetischen Anti-Myelin-Mikrokügelchen und einem Magnetfeld ausgesetzt, wodurch Mikroglia und myeloische Zellen effektiv von Myelin-Trümmern und myelinhaltigen Zellen getrennt werden.

Isolierung von Mikroglia aus der Hirnrinde eines adulten Mausgehirns

Das Video zeigt ein Protokoll zur Untersuchung synaptischer Interaktionen und neuronaler Reaktionen in einem transfizierten Hippocampus-Hirnschnitt der Maus. Dabei werden sensorische Neuronen mit großer Reichweite beleuchtet, um Aktionspotentiale auszulösen, und die daraus resultierenden exzitatorischen postsynaptischen Potentiale im aufgezeichneten Neuron unter Verwendung der Ganzzell-Patch-Clamp-Technik aufgezeichnet.

Photostimulation und Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnungen von Neuronen in Hippocampus-Schnitten der Maus

Dieses Video zeigt die Aufzeichnung von rhythmischen neuronalen Netzwerkaktivitäten, auch bekannt als Theta-Oszillationen, in einem isolierten Hippocampus. Elektroden werden in verschiedene Schichten und räumliche Positionen eingeführt, um Theta-Oszillationen zu erkennen und zu analysieren. Dies zeigt die einzigartige neuronale Zusammensetzung und die Konnektivität des neuronalen Netzwerks über verschiedene Schichten des Hippocampus hinweg.

In vitro Aufzeichnung von Theta-Oszillationen im Hippocampus der Maus

Ein Schlüssel zur erfolgreichen Untersuchung der Mikroglia-Biologie ist die Erhaltung der Immunfunktion Mikroglia ex vivo bei der Isolierung von ZNS-Gewebe. Trenn Mikroglia über Dreh Schütteln Ergebnisse in hochreiner und immunofunctional Zellkulturen durch Fluoreszenz-Bildgebung, Immunzytochemie, und ELISA folgenden Mikroglia-Aktivierung mit der proinflammatorische Stimuli Lipopolysaccharide (LPS) und Pam 3 4 CSK (Pam) bewertet.

Isolation kortikaler Mikroglia mit bewahrten Immunophänotyp und Funktionalität aus Murine Neugeborene

Kortikaler Netzwerke werden von einem kleinen, aber vielfältige Reihe von hemmenden Inter gesteuert. Funktionelle Untersuchung von Inter erfordert daher gezielte Aufnahme und strenge Identifizierung. Hier beschrieben wird, ist ein kombinierter Ansatz, der Ganzzellableitungen von einzelnen oder synaptisch gekoppelten Paare von Neuronen mit intrazelluläre Markierung, Post-hoc-morphologische und immunzytochemische Analyse.

Whole-Cell-Patch-Clamp-Aufnahmen aus Morphologically- und neurochemisch identifizierten Hippocampus Inter

Hier präsentieren wir ein Protokoll zur Aufzeichnung von rhythmischen neuronalen Netzwerk-Theta und Gamma-Oszillationen aus einer isolierten ganzen Hippocampus-Präparation. Wir beschreiben die experimentellen Schritte von der Extraktion des Hippocampus bis hin zu Details der Feld-, Einheits- und Ganzzell-Patch-Clamp-Aufnahmen sowie der optogenetischen Stimulation des Theta-Rhythmus.

Tuning in der Hippocampal Theta Band<em&gt; In vitro</em&gt;: Methoden für die Aufnahme aus dem isolierten Nagetier Septohippocampal Circuit

Wir bieten ein Protokoll zur Isolierung von Mikroglia aus verschiedenen sezierten Regionen einer erwachsenen Maushirnhälfte, gefolgt von halbautomatischer Bibliotheksvorbereitung für die tiefe einzelzellige RNA-Sequenzierung von Transkriptomen in voller Länge. Diese Methode wird dazu beitragen, die funktionelle Heterogenität von Mikroglia bei Gesundheit und Krankheit aufzuklären.

Isolierung von regionsspezifischer Mikroglia von einer Erwachsenenmaus Gehirnhälfte für tiefe einzellige RNA-Sequenzierung

Wir stellen ein Protokoll zur Vorbereitung von Akutscheiben aus dem dorsal-zwischengeschalteten Hippocampus von Mäusen vor. Wir vergleichen dieses transversale Präparat mit koronalen Schnitten in Bezug auf die Qualität der Aufnahmen und die Erhaltung morphologischer Merkmale aufgezeichneter Neuronen.

Vorbereitung von akuten Scheiben aus dem Dorsal Hippocampus für die Ganzzellaufnahme und neuronale Rekonstruktion im Dentate Gyrus von erwachsenen Mäusen

Diese Arbeit beschreibt eine Methode zur chronischen in vivo Beobachtung der ruhenden Mikroglia im Hippocampus CA1 der Maus mittels präzise kontrollierter Chirurgie und Zwei-Photonen-Mikroskopie.

Im lebenden Organismus Chronische Zwei-Photonen-Bildgebung von Mikroglia im Hippocampus der Maus

Wir beschreiben ein Protokoll zur Isolierung von Mikrogliazellen aus dem Hypothalamus der Maus (oder gleichwertigen kleinen Gehirnstrukturen) mittels magnetisch aktivierter Zellsortierung (MACS) in relativ kurzer Zeit. Die MACS-sortierten hypothalamischen Mikroglia können für die ex vivo-Analyse verwendet werden und können für die Durchführung von In-vitro-Assays plattiert werden.

Isolierung von hypothalamischen Mikroglia aus frisch perfundiertem adulten Mausgehirn durch magnetisch aktivierte Zellsortierung  

Lernen Sie die Isolierung und Patch-Clamp-Aufzeichnung von hippokampalen Mikroglia aus adulten Mäusen. Diese Methode ermöglicht die Untersuchung von Ionenkanalaktivität und physiologischen Funktionen in nativer Umgebung.

Isolierung und Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnung von hippokampalen Mikroglia aus adulten Mäusen

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