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DOI: 10.3791/51706-v
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Kortikaler Netzwerke werden von einem kleinen, aber vielfältige Reihe von hemmenden Inter gesteuert. Funktionelle Untersuchung von Inter erfordert daher gezielte Aufnahme und strenge Identifizierung. Hier beschrieben wird, ist ein kombinierter Ansatz, der Ganzzellableitungen von einzelnen oder synaptisch gekoppelten Paare von Neuronen mit intrazelluläre Markierung, Post-hoc-morphologische und immunzytochemische Analyse.
Das übergeordnete Ziel dieses Verfahrens ist es, GABA B-Rezeptor-vermittelte Effekte in identifizierten hippokampalen Parvalbumin-positiven Interneuronen zu charakterisieren. Dies wird erreicht, indem zunächst hochwertige akute Hippocampusschnitte hergestellt werden. Der zweite Schritt besteht darin, mit einem Videomikroskop Neuronen auf der Grundlage der venösen YFP-Expression und der bekannten Eigenschaften von paralen Albumin-positiven Neuronen auszuwählen.
Als nächstes werden Ganzzell-Patch-Clamp-Aufzeichnungen gemacht und entweder extrazelluläre Stimulation oder gepaarte Aufzeichnungen verwendet, um die durch den GABA-B-Rezeptor vermittelten Effekte zu untersuchen. Der letzte Schritt besteht darin, die Neuronen zu visualisieren und zu bestätigen, dass die aufgezeichneten Neuronen tatsächlich par-albumin-positiv sind und entweder parasomatische oder dendritische inhibitorische Neuronen sind. Letztendlich ermöglicht diese Methode die Charakterisierung von GABA B-Rezeptor-vermittelten inhibitorischen Effekten und ermöglicht eine eindeutige Klassifizierung der aufgezeichneten Interneuronen.
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