Name: Transplantation einer biotechnologisch hergestellten Lunge unter Verwendung von dezellularisierten Mauslungen und primären humanen Endothelzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-03-28T13:25:00.000+00:00
Duration: 10 min 13 s
Description: Lernen Sie ein standardisiertes Protokoll zur Dezellularisierung und Rezellularisierung von Mauslungen mit primären humanen Endothelzellen. Diese Methode ermöglicht skalierbare Forschung in der Organ-Bioengineering und Transplantation.

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</ol>

<table><tbody><tr><td>DEZELLULARISIERUNG</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>27 G x 1/2 Zoll BD PrecisionGlide Nadel</td><td>BD</td><td>305109</td><td>Oder gleichwertige 27 G Injektionsnadel</td></tr><tr><td>BD Insyte IV Katheter 20 GA X 1,8 8IN</td><td>BD</td><td>381237</td><td>Oder gleichwertiger 20 G IV Katheter</td></tr><tr><td>Klinge Seidennaht (4-0)</td><td>Nesco</td><td>GA04SB</td><td>Oder gleichwertiger</td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C5670</td><td></td></tr><tr><td>Katheter für die Halsvene der Ratte, PU 2Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C20PU-MJV1301</td><td>Empfohlen für Mäuse mit einem Gewicht von 30 g und darunter.</td></tr><tr><td>Katheter für Halsvene der Ratte, PU 3Fr 10 cm</td><td>Instech</td><td>C30PU-RJV1307</td><td>Empfohlen für Mäuse mit einem Gewicht von mehr als 30 g.</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>DN25</td><td></td></tr><tr><td>MgSO4</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7506</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S3014</td><td></td></tr><tr><td>PinPort Injektoren</td><td>Instech</td><td>PNP3M</td><td></td></tr><tr><td>PinPorts, 22 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F22-50</td><td>Passend für C30PU-RJV1307</td></tr><tr><td>PinPorts, 25 G</td><td>Instech</td><td>PNP3F25-50</td><td>Passend für C20PU-MJV1301</td></tr><tr><td>Natriumdesoxycholat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D6750</td><td></td></tr><tr><td>Sterile Spritze, 5 mL</td><td>Generisches</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9036-19-5</td><td></td></tr><tr><td>ZELLKULTUR</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>EGM-2 Endothelial Cell Growth Medium-2 BulletKit</td><td>Lonza</td><td>CC-3162</td><td></td></tr><tr><td>HUVEC &ndash; Endothelzellen der menschlichen Nabelvene</td><td>Lonza</td><td>C2519A</td><td></td></tr><tr><td>PERFUSIONSBASIERTER BIOREAKTOR</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>20 G Nadel</td><td>Generischer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>3-Wege-Absperrhahn</td><td>Generischer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Korkbohrer</td><td>Generisch</td><td></td><td>Bohrgröße, 6-10 mm</td></tr><tr><td>EasyLoad III Pumpenkopf</td><td>Cole-Parmer</td><td>243934</td><td></td></tr><tr><td>Glas Kanister</td><td>Hario</td><td>SCN-200T</td><td>Innendurchmesser: 80 mm</td></tr><tr><td>Heizmagnetrührer</td><td>Generische</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Köderverschraubung, PVDF, für Soft Tube</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-01</td><td>weiblich, passend für Schläuche mit I.D. 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Köderverschraubung, PVDF, für Soft Tube</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-01</td><td>männlich, passend für Schläuche mit ID 1,5 mm (L/S 14)</td></tr><tr><td>Köderverschraubung, PVDF, für Soft Tube</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9965-03</td><td>Buchse, passend für Schläuche mit Innendurchmesser 3 mm (L/S 16)</td></tr><tr><td>Köderverschraubung, PVDF, für weichen Schlauch</td><td>Nordson Medical</td><td>2-9964-03</td><td>Außengewinde, passend für Schläuche mit Innendurchmesser 3 mm (L/S 16)</td></tr><tr><td>Magnetrührstab</td><td>Generischer</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Digital Precision Modular Drive mit Remote I/O und Tischsteuerung</td><td>Cole-Parmer</td><td>07557-00</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Präzisions-Pumpenschläuche, PharMed BPT, L/S 16</td><td>Cole-Parmer</td><td>06508-16</td><td></td></tr><tr><td>Masterflex L/S Pricision Pumpenschläuche, platingehärtetes Silikon, L/S 14</td><td>Cole-Parmer</td><td>96410-14</td><td></td></tr><tr><td>Millex-GP Spritzenfiltereinheit, 0,22 & Mikro; m, Polyethersulfon, 33 mm, gammasterilisiert</td><td>Millipore</td><td>SLGPR33RS</td><td></td></tr><tr><td>Pyrex 250 mL Grasflasche, GL-45 Schraubverschluss</td><td>Corning</td><td>1395-250</td><td></td></tr><tr><td>Silikonsepten für GL45 Open Top PBT Schraubverschluss</td><td>Corning</td><td>1395-455S</td><td></td></tr><tr><td>Silikon Lichtstopper</td><td>IMG</td><td>07763-18</td><td>Oberer Durchmesser: 87 mm, Unterer Durchmesser: 75 mm</td></tr><tr><td>Sterile Spritze, 10 mL, 50 mL</td><td>Generisch</td><td></td><td></td></tr><tr><td>MAUSCHIRURGIE (Isolierung des Herz-Lungen-Blocks | </td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-0 Nylon-Krawatten</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>10-0 Seidenbinder</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>4-0 Seidenbinder</td><td>Kono Seisakusho</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Arterienklemme, 45 mm gebogen, gerillt</td><td>Natsume Seisakusyo</td><td>C-17-45</td><td></td></tr><tr><td>BD Insyte IV Katheter 24GA</td><td>BD</td><td>381512</td><td>Oder äquivalent 24G i.v. Katheter</td></tr><tr><td>Bulldog Gefäßzange 45mm gebogen</td><td>Natsume Seisakusyo</td><td>M2</td><td></td></tr><tr><td>Butorphanol Tartrat&nbsp;</td><td>Meiji Seika Pharma</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Cefazolin Sodium</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Dumont Pinzette #5/45</td><td>Fine Science Tools</td><td>1251-35</td><td></td></tr><tr><td>Feine Federschere im Vannas-Stil</td><td>Fine Science Tools</td><td>15403-08</td><td>45° Spitze, 0,01 x 0,06 mm</td></tr><tr><td>Gemini Cautery Kit</td><td>Harvard Apparat</td><td>RS-300</td><td></td></tr><tr><td>Halsted-Moskitoklemme gebogene Spitze, 125 mm</td><td>Bioresearch Center</td><td>16181670</td><td></td></tr><tr><td>Hegar Nadelhalter, 150 mm</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BM065R</td><td></td></tr><tr><td>Heparinlösung</td><td>Mochida Seiyaku</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Medetomidin</td><td>Nippon Zenyaku Kogyo</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozange gerade</td><td>B Braun/Aesculap</td><td>BD33R</td><td></td></tr><tr><td>Midazolam</td><td>Sandoz</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Maus Beatmungsgerät</td><td>Harvard Gerät</td><td>Modell 687&trade;</td><td></td></tr><tr><td>Normale Kochsalzlösung, klinische Qualität</td><td>Otsuka Pharmaceutical</td><td>N/A</td><td></td></tr><tr><td>Petrischale, 60 x 15 mm</td><td>BD</td><td>351007</td><td></td></tr><tr><td>Safelet Cath PU 20 Gauge Polyurethan-Katheter</td><td>Nipro</td><td>09-031</td><td></td></tr><tr><td>Sakaki Edelstahlschere gebogen 14 cm</td><td>Bioforschungszentrum</td><td>64152034</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellhalter</td><td>Bioforschungszentrum 16101040</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Rückzugssystem für Kleintiere</td><td>Fine Science Tools</td><td>18200-20</td><td></td></tr><tr><td>Ersatzskalpell #11</td><td>Muranaka Medical Instruments</td><td>567-001-03</td><td></td></tr><tr><td>Federschere, 15 cm</td><td>Bioforschungszentrum</td><td>PRI13-3736</td><td></td></tr><tr><td>Stereomikroskop</td><td>Leica Microsystems</td><td>M525</td><td>Chirurgisches Mikroskop in klinischer Qualität mit flexiblem Armsystem ist vorzuziehen.</td></tr><tr><td>Sugita Titan Aneurysma Clip gebogen schlank, Nr.98</td><td>Mizuho medical</td><td>17-001-98</td><td></td></tr><tr><td>Sugita Titan Clip Applier, 110 mm</td><td>Mizuho medical</td><td>17-013-53</td><td></td></tr><tr><td>Temperaturverstellbarer elektrischer Wärmer</td><td>Generika</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Ultrafeines Wattestäbchen</td><td>Generika</td><td></td><td></td></tr><tr><td>GEFÄSS- UND BRONCHIALMANSCHETTE</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Fein Schleifpapier</td><td>Generisches</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Venula 20 Gauge Teflon-Angiokatheter</td><td>Top</td><td>1160</td><td></td></tr><tr><td>Venula 22 Gauge Teflon-Angiokatheter</td><td>Top</td><td>1161</td><td></td></tr><tr><td>Venula 24 Gauge Teflon-Angiokatheter</td><td>Top</td><td>1124</td><td></td></tr></tbody></table>

transplantation einer biotechnologisch hergestellten lunge unter verwendung von dezellularisierten mauslungen und primären humanen endothelzellen

Transplantation of Bioengineered Lung Using Decellularized Mouse Lungs and Primary Human Endothelial Cells

Nach dem Dezellularisierungsprotokoll sind die Lungen von Mäusen sichtbar weiß und durchscheinend (Abbildung 6A). Zelluläre Bestandteile sollten vollständig entfernt werden, aber die Alveolarstruktur bleibt in der histologischen Betrachtung intakt (Abbildung 6B,C). Rezellularisierte Mauslungen mit 3 × 107 HUVECs mit 2-tägiger perfusionsbasierter Bioreaktorkultur zeigen eine homogene Verteilung der HUVECs (Abbildun...

Transplantation einer biotechnologisch hergestellten Lunge unter Verwendung von dezellularisierten Mauslungen und primären humanen Endothelzellen

Lung transplantation is a critical treatment for patients with end-stage lung diseases like idiopathic pulmonary fibrosis, but challenges such as donor ...

transplantation-bioengineered-lung-using-decellularized-mouse-lungs

Research

Forschung

JoVE Journal

Bioengineering

Biotechnik

Wir haben eine dezellularisierte Lunge extrazellulären Matrix und neuartige biomimetische Bioreaktor verwendet werden, um funktionelle Lungengewebe erzeugen können entwickelt werden. Durch Aussaat Zellen in die Matrix und die Kultivierung im Bioreaktor, generieren wir Gewebe, das effektive Gasaustausch zeigt, wenn in vivo für kurze Zeit transplantiert.

Vorgehensweise für Lung Technik

Die Dezellularisierung ganzer Organe erzeugt natürliche biologische Gerüste, die für die regenerative Medizin verwendet werden können. Die Beschreibung eines nichtmenschlichen Primatenmodells der Lungenregeneration wird vorgestellt, in dem ganze Lungen dezellularisiert und dann mit adulten Stammzellen und Endothelzellen in einem Bioreaktor besiedelt werden, der die Gefäßzirkulation und die Beatmung von Flüssigmedien erleichtert.

Dezellularisierung und Rezellularisierung der Lunge nichtmenschlicher Primaten mit einem spezialisierten Großorgan-Bioreaktor

Um die zellulären und molekularen Mechanismen neotissue Bildung und Stenose Entwicklung in Gewebezüchtungen Herzklappen zugrunde liegen, wurde ein Maus-Modell der heterotopen Herzklappentransplantation entwickelt. Eine Lungenherzklappe wurde mit der heterotopen Herztransplantation Technik, um Empfänger transplantiert.

Transplantation von Pulmonalklappe Mit einem Maus-Modell der heterotopen Herztransplantation

Die Rekapitulation der organspezifischen Mikroumgebung, die die lokale Angiogenese stimuliert, ist für eine erfolgreiche Regeneration von geschädigtem Gewebe unerlässlich. Dieser Bericht demonstriert eine neuartige Methode zur Implantation von Fibringelen auf die Lungenoberfläche lebender Mäuse, um zu untersuchen, wie die lungenspezifische Mikroumgebung die Angiogenese und Alveolärregeneration bei erwachsenen Mäusen moduliert.

Die Implantation von Fibrin Gel auf Maus Lung Lung spezifischen Angiogenese Studieren

Hier zur Gewebezüchtung Gefäßimplantate, die zum Pfropfen in Mäusen durch Impfen Doppel partiell pluripotenten Stammzellen funktional erzeugen präsentieren wir ein Protokoll (PiPSC) - abgeleiteten glatten Muskelzellen und PiPSC - abgeleitete Endothelzellen auf einer dezellularisierten Gefäßgerüst Bioreaktor.

Generierung und Pfropfen von Tissue Engineering Gefäße in einem Maus-Modell

Dieses Protokoll leitet effizient embryonalen Maus-Stammzellen abgeleiteten endgültigen Endoderm Epithelzellen der Atemwege zu reifen. Diese Differenzierung Technik verwendet 3-dimensional dezellularisierte Lungengerüste Lungen lineage Spezifikation, in einem definierten, serumfreien Kultureinstellung zu lenken.

Die Erzeugung von ESC-derived Maus Airway epithelialen Zellen unter Verwendung von Dezellularisierte Lung Scaffolds

Dieses Protokoll beschreibt eine Methode zur Erzeugung reproduzierbarer, kleinräumiger künstlicher Lungengewebe, indem dezellularisierte, präzisionsgeschnittene Lungenschnitte mit alveolären Epithel-Typ-2-Zellen, Fibroblasten und Endothelzellen neu besiedelt werden.

Technisches Lungengewebe aus dezellularisierten Lungenscheiben

In diesem Artikel wurden primäre Lungenendothelzellen aus neonatalen Mäusen isoliert und kultiviert.

Isolierung von primären Lungenendothelzellen der Maus

Hier wird ein Protokoll zur Isolierung von regional dezellularisiertem Lungengewebe vorgestellt. Dieses Protokoll bietet ein leistungsfähiges Werkzeug zur Untersuchung von Komplexitäten in der extrazellulären Matrix und Zell-Matrix-Interaktionen.

Dissektion und Isolierung von regionenspezifisch dezellularisiertem Lungengewebe

Hier stellen wir ein Protokoll vor, mit dem die transplantierte linke Lunge der Maus mittels Zwei-Photonen-Mikroskopie intravital abgebildet werden kann. Dies stellt ein wertvolles Werkzeug dar, um die zelluläre Dynamik und Wechselwirkungen in Echtzeit nach einer Lungentransplantation von Mäusen zu untersuchen.

Intravitale Zwei-Photonen-Mikroskopie der transplantierten Mauslunge

Lernen Sie ein standardisiertes Protokoll zur Dezellularisierung und Rezellularisierung von Mauslungen mit primären humanen Endothelzellen. Diese Methode ermöglicht skalierbare Forschung in der Organ-Bioengineering und Transplantation.

Transplantation einer biotechnologisch hergestellten Lunge unter Verwendung von dezellularisierten Mauslungen und primären humanen Endothelzellen (Video) | JoVE Journal

Transplantation einer biotechnologisch hergestellten Lunge unter Verwendung von dezellularisierten Mauslungen und primären humanen Endothelzellen

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