Name: 3D-Flipwell-Engineering für die Entwicklung asynchroner Systeme für toxikologische und immunmodulatorische Therapien in Bakterien-, Darm- und Immunzellen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-10-17T12:40:00.000+00:00
Duration: 11 min
Description: Erfahren Sie die 3D-Flipwell-Technik zur Entwicklung eines asynchronen Kokultursystems für toxikologische und immunmodulatorische Studien mit Darmbakterien, Epithel- und Immunzellen.

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<ol><li>Goldsmith, J. R., Sartor, R. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+diet+on+intestinal+microbiota+metabolism%3A+downstream+impacts+on+host+immune+function+and+health%2C+and+therapeutic+implications%5BTitle%5D)+AND+%22J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">The role of diet on intestinal microbiota metabolism: downstream impacts on host immune function and health, and therapeutic implications.</a> J Gastroenterol. 49 (5), 785-798 (2014).</li>
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</ol>

<table><tbody><tr><td>0,4 % PFA (siehe Rezept in Reagents and Solutions)</td><td>im Text beschrieben</td><td></td><td></td></tr><tr><td>10-ml-serologische Pipette</td><td>Corning</td><td>4488</td><td></td></tr><tr><td>12 Brunnen TC-Platte, &nbsp; Costar</td><td>Corning</td><td>3513</td><td></td></tr><tr><td>15-ml konische Röhren, SpectraTube</td><td>Alkali Scientific</td><td>C2715</td><td></td></tr><tr><td>200 & Mikro; l tips&nbsp;</td><td>USA Scientific</td><td>1111-1700</td><td></td></tr><tr><td>24-Bohrloch-Einsätze – Kultur-Einsätze für 24-Bohrlochplatten, PET 0,4 & Mikro; m&nbsp;</td><td>BrandTech Scientific</td><td>782710</td><td></td></tr><tr><td>3D-Flipwells vorgefertigt, UV-sterilisiert&nbsp;</td><td>Im Labor herstellen</td><td></td><td></td></tr><tr><td>4 % PFA (siehe Rezept in Reagents and Solutions)</td><td>im Text beschrieben</td><td></td><td></td></tr><tr><td>50 mM Sepiapterin-Brühe (SEP, siehe Rezept in Reagenzien und Lösung)</td><td>Karriere bei Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td>50-ml-konische Röhren</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227261</td><td></td></tr><tr><td>5-ml serologische Pipette</td><td>Corning</td><td>4487</td><td></td></tr><tr><td>70–95 % Ethanol (Ethylalkohol)</td><td>Decon Labs</td><td>04-355-151</td><td></td></tr><tr><td>Alufolie</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-213-100</td><td></td></tr><tr><td>Tier-Fütterungsnadeln, 20 Kaliber 1,5" Länge, Einmalnutzung&NBSP;</td><td>Fisher Scientific</td><td>01-208-87</td><td></td></tr><tr><td>Antikörper-Verdünnungspuffer (siehe Rezept in Reagents and Solutions)</td><td>im Text beschrieben</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Attofluorzellkammer&nbsp;</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A7816</td><td></td></tr><tr><td>Autoklavenband</td><td>Fisher Scientific</td><td>15-901-111</td><td></td></tr><tr><td>Bacillus subtilis wt (3A1T) Stämme im Glycerol-Bestand ()</td><td>Bacillus Genetic Stock Center (https:// bgsc. org/</td><td></td><td></td></tr><tr><td>BioGrip Pink Nitrile pulverfreie latexfreie Handschuhe</td><td>Hochwertige Fertigung</td><td>P2810</td><td></td></tr><tr><td>Blockpuffer (siehe Rezept in Reagenzien und Lösungen – 10 % normales Ziegenserum in PBS)</td><td>im Text beschrieben</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Blockpuffer (siehe Rezept in Reagents and Solutions)</td><td>im Text beschrieben</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Hellfeldmikroskop (Nikon oder äquivalent) Eclipse Ts2</td><td>Nikon</td><td>TS2</td><td></td></tr><tr><td>Caco-2-Zellen</td><td>ATCC</td><td>HTB-37</td><td></td></tr><tr><td>Zellkultur-Inkubator, 37°F; c, 5 % CO2 (Eppendorf CellXpert)</td><td>Eppendorf</td><td>6734010015</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifuge (Eppendorf, Zentrifuge 5804/5804 R oder äquivalent</td><td>Eppendorf</td><td>22622501</td><td></td></tr><tr><td>Zentrifugenröhren 50 ml SpectraTube</td><td>Alkali Scientific</td><td>C2750</td><td></td></tr><tr><td>Kultureinsätze für 12-Well-Platten, PET, 0,4 & Mikro; m, steril</td><td>BrandTech Scientific, BRAND Insert 2in1, BIO-CERT</td><td>782730</td><td></td></tr><tr><td>DAPI VectaShield Montagemedium</td><td>Vektorlabore</td><td>H-1000</td><td></td></tr><tr><td>Tiefe Petrischalenböden, 100 x 25 mm tiefe Polystyrol-Stapelbare Petrischale, steril;</td><td>USA Scientific</td><td>8609-0625</td><td></td></tr><tr><td>Drummond Pipet Aid XP</td><td>Drummond&nbsp;</td><td>4-000-101</td><td></td></tr><tr><td>Eppendorf 5804 Zentrifuge mit Schwenkschaufelrotor für 50 ml konische Röhren</td><td>Eppendorf</td><td>22622501</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette, Edelstahl, steril autoklaviert, 2x Sets</td><td>VWR</td><td>82027-438</td><td></td></tr><tr><td>Pinzette, Edelstahl, sterile Autoklaven, 2x-Sets, Probenzange</td><td>VWR</td><td>82027-438</td><td></td></tr><tr><td>Glasflasche 500 ml</td><td>Corning&nbsp;</td><td>4980-500</td><td></td></tr><tr><td>Hämatozomometer (Neubauer mit Deckungsschlägern)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>50-312-90</td><td></td></tr><tr><td>HT-29-MTX-E12-Zellen</td><td>Millipore Sigma</td><td>12040401</td><td></td></tr><tr><td>ImmunoPen (optional)</td><td>Fisher Scientific</td><td>4021761EA</td><td></td></tr><tr><td>Kevlar-basierte oder andere schneidresistente Handschuhe (optional)</td><td>Baumarkt oder Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Laborband oder Versandband</td><td>Fisher Scientific&nbsp;</td><td>159015R</td><td></td></tr><tr><td>Laminarstromhaube 1300 Serie A2 BSC Klasse II</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>1375</td><td></td></tr><tr><td>Laminarströmungshaube mit UV-Licht SterilGARD</td><td>Die Baker-Gesellschaft</td><td>SG403A-HE</td><td></td></tr><tr><td>Marker Lösungsmittelbeweis</td><td>VWR</td><td>52877-310 oder 95042-566</td><td></td></tr><tr><td>Medien für Caco-2-Zellen (DMEM High Glucose-basiert, siehe Rezept in Reagents and Solutions)</td><td>beschrieben in&nbsp; Text</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medien für HT-29-Zellen (DMEM High Glucose, siehe Rezept in Reagents and Solutions)</td><td>im Text beschrieben</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Medien für THP-1-Zellen (RPMI, siehe Rezept in Reagents and Solutions)</td><td>im Text beschrieben</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenrohr, 1,7 ml, steril & nbsp;</td><td>Alkali Scientific</td><td>C3017-ST</td><td></td></tr><tr><td>Mikrozentrifugenröhren</td><td>Thermo Fisher</td><td>3451</td><td></td></tr><tr><td>Miller LB Media (siehe Rezept in Reagents and Solutions)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; L3522</td><td></td></tr><tr><td>Nadelzange, 2x Sätze</td><td>Baumarkt oder Amazon</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Nitrilpulverfreie latexfreie Handschuhe Aurelia Amazing</td><td>MidSci</td><td>92885</td><td></td></tr><tr><td>Petrischalendeckel, sterile Falcon Petri Dish steril 100x15 mm Style</td><td>Corning Inc</td><td>351029</td><td></td></tr><tr><td>Phorbol-Myristatacetat (PMA) (100 ng/&mu; l, siehe Rezept in Reagents and Solutions)&nbsp;</td><td>InvivoGen</td><td>Tlrl-pma</td><td></td></tr><tr><td>Pipetspitzen (10 & Micro; L, 200 & Mikro; l, 1000 & Mikro; l) PurePoint oder äquivalent</td><td>Alkali Scientific&nbsp;</td><td>ST1010-CS, ST1200-CS, ST1000-CS</td><td></td></tr><tr><td>Frischhaltefolie</td><td>Lebensmittelgeschäft</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Purecol-Arbeitskollagenase-Lösung (100 & mikro; g/mL)</td><td>Advanced BioMatrix</td><td>5005-100ML</td><td></td></tr><tr><td>Runde Überdeckungsschlitze #1 1 oz (Corning Float Glass oder Fisherbrand)</td><td>Corning oder Fisherbrand</td><td>50143822 oder 12-546-2 25CIR-2</td><td></td></tr><tr><td>Skalpellklingen, steril, Einweg-&nbsp;</td><td>Mopec oder Feder #10</td><td>AJ136 oder 2975#10</td><td></td></tr><tr><td>Sepiapterin (SEP, 100 & Mikro; M, siehe Rezept in Reagents and Solution)</td><td>Karriere bei Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td>Schüttelinkubator eingestellt auf 220 U/min 37 Grad; C</td><td>Eppendorf, New Brunswick Scientific</td><td>M12990080</td><td></td></tr><tr><td>Silikon-Klebstoff Loctite Clear Silikon IDH oder 3M Marine Grade Silikondichtmittel Klar mit Nasenspitze</td><td>Loctite oder 3M</td><td>1745658 oder PN08019</td><td></td></tr><tr><td>Einkanal-Pipet Eppendorf Research Plus, 200 & micro; l</td><td>Eppendorf</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Einkanal-Pipetten (10 & Mikro; L, 200 & Mikro; l, 1000 & Mikro; l)</td><td>Eppendorf</td><td>2231001122</td><td></td></tr><tr><td>Spektrophotometer NanoDropOneC</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>13-400-519</td><td></td></tr><tr><td>Steriles, deionisiertes Wasser&nbsp; &nbsp;</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Steriles phosphatgepuffertes Serin (PBS) ohne Kalzium oder Magnesium</td><td>Fisher Scientific</td><td>&nbsp; BSS-PBS-1X6</td><td></td></tr><tr><td>Spritze 3 ml oder 5 ml mit Luer-Lok-Spitze</td><td>BD</td><td>309585 oder 309603</td><td></td></tr><tr><td>THP-1-Zellen</td><td>ATCC</td><td>TIB-202</td><td></td></tr><tr><td>Transfer-Pipets, steril</td><td>Fisherbrand</td><td>13-711-20</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Millipore Sigma</td><td>X100</td><td></td></tr><tr><td>Trypan-blaue Lösung</td><td>VWR</td><td>97063-702</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 0,25 %</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>25200-056</td><td></td></tr><tr><td>Wipes Kimwipes Professional mit LintGuard Anti-Stat Polyshield</td><td>Kimberly-Clark</td><td>34120</td><td></td></tr><tr><td><starke>Primäre Antikörper:&nbsp; </stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Anti-menschliche CD163</td><td>Abcam</td><td>156769</td><td></td></tr><tr><td>Anti-menschliches CD68</td><td>Novus Biologicals</td><td>NB100-683-0,1 mg</td><td></td></tr><tr><td>Anti-menschlicher CD80, E3Q9V</td><td>Zell-Signalisierungstechnologien</td><td>15416</td><td></td></tr><tr><td>Anti-menschlich CK20&nbsp;</td><td>Lebenstechnologien</td><td>PA5-82875</td><td></td></tr><tr><td>Anti-menschliches MUC2 (996/1)</td><td>ThermoFisher</td><td>MA5-12345</td><td></td></tr><tr><td><starke>Sekundärantikörper:</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 Ziegen-Anti-Kaninchen-IgG (für CD80 und CK20)</td><td>ThermoFisher</td><td>A11008</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 594 Ziegen-Anti-Maus-IgG (für MUC2 und CD68 oder CD163)</td><td>ThermoFisher</td><td>A11005</td><td></td></tr><tr><td><starke>Reagenzien und Lösungen:&nbsp; &nbsp; </stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><stark>Caco-2 Mittel: </stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM mit hohem Blutzucker (4,5 g/L) und 1 % (v:v) GlutaMax&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>FBS 10 % (v:v) hitzeinaktiviert</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Nicht-essentielle Aminosäuren 1 % für Caco-2-Medien</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11140076</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td><stark>HT-29-MTX Medium</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>DMEM mit hohem Blutzucker (4,5 g/L) und 1 % (v:v) GlutaMax&nbsp;</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>FBS 10 % (v:v) hitzeinaktiviert</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (10 mM Endkonzentration)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td><stark>THP-1 Mittel: </stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>FBS (10% v:v) hitzeinaktiviertes fetales Rinderserum</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Glukose (4,5 g/L Endkonzentration)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A249001</td><td></td></tr><tr><td>GlutaMax 1% (v:v)&nbsp; 2 mM Endkonzentration</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>35050061</td><td></td></tr><tr><td>HEPES (10 mM Endkonzentration)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15630080</td><td></td></tr><tr><td>Pen Strep 1% (v:v)</td><td>Sigma</td><td>F2242-500ML</td><td></td></tr><tr><td>Roswell Park Memorial Institute (RPMI)-1640 Medium</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11875119</td><td></td></tr><tr><td>Natriumpyruvat (1 mM Endkonzentration)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>11360070</td><td></td></tr><tr><td><stark>Purecol arbeitende Kollagenase-Lösung (Verdünnung auf 1:30 100 & Mikro; g/ml):</stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Purecol 3 mg/ml 1:30 bis 100 & Mikro; g/ml&nbsp;</td><td>Advanced BioMatrix</td><td>5005-100ML</td><td></td></tr><tr><td>steriles, deionisiertes Wasser</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td><stark>L-Sepiapterin-Serienlösung (50 mM): </stark></td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>L-Sepiapterin (SEP)</td><td>Karriere bei Henan Chemical Co</td><td>CAS#: 17094-01-8</td><td></td></tr><tr><td><stark>Phorbol-Myristatacetat-Fondlösung (PMA, 5 mg/mL)</stark></td><td>InvivoGen</td><td>Tlrl-pma</td><td></td></tr><tr><td>BSA 1% Rinderserumalbumin&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>5470</td><td></td></tr><tr><td>DMSO&nbsp;</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>D2650</td><td></td></tr><tr><td>Miller LB</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>&nbsp; L3522</td><td></td></tr><tr><td>Normales Serum derselben Spezies wie der sekundäre Antikörper</td><td>Sigma&nbsp;</td><td>NS02L-1ML</td><td></td></tr><tr><td>Paraformaldehyd</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>441244</td><td></td></tr></tbody></table>

3d-flipwell-engineering für die entwicklung asynchroner systeme für toxikologische und immunmodulatorische therapien in bakterien-, darm- und immunzellen

3D Flipwell Engineering for Developing Asynchronous Systems for Toxicologic and Immunomodulatory Therapies in Bacterial, Gut, and Immune Cells

3D-Flipwell-Engineering für die Entwicklung asynchroner Systeme für toxikologische und immunmodulatorische Therapien in Bakterien-, Darm- und Immunzellen

To study the roles of bacterial secretome in immune cell polarization and gut mucosal homeostasis, we developed a 3-dimensional co-culture model using ...

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Research

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Cancer Research

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Erfahren Sie die 3D-Flipwell-Technik zur Entwicklung eines asynchronen Kokultursystems für toxikologische und immunmodulatorische Studien mit Darmbakterien, Epithel- und Immunzellen.

3D-Flipwell-Engineering für die Entwicklung asynchroner Systeme für toxikologische und immunmodulatorische Therapien in Bakterien-, Darm- und Immunzellen (Video) | JoVE Journal

3D-Flipwell-Engineering für die Entwicklung asynchroner Systeme für toxikologische und immunmodulatorische Therapien in Bakterien-, Darm- und Immunzellen

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