Name: Navigieren in den massenspektrometrischen Proteomdaten mit kostenlosen Berechnungswerkzeugen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-08-19T14:40:00.000+00:00
Duration: 7 min 1 s
Description: Lernen Sie die Analyse massenspektrometrischer Proteomdaten mit kostenlosen Werkzeugen wie DIA-NN und MSFragger. Diese Methode ermöglicht Biologen die effiziente Validierung und Exploration öffentlicher Datensätze.

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HINWEIS: In Abbildung 1finden Sie einen Überblick über den Arbeitsablauf und in der Materialtabelle eine detaillierte Beschreibung der verwendeten Software.
<img alt="Figure 1" class="xfigimg" src="/files/ftp_upload/68707/68707fig1.jpg"> 
Abbildung 1: Überblick über das Studiendesign. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/68707/68707fig1large.jpg" target="_blank">Bitte klicken Sie hier, um eine größere Version dieser Abbildung anzuzeigen.</a>
1. Beispiel für ein Datei- und Software-Setup
HINWEIS: Alle Anwendungen sind für den individuellen Forschungsgebrauch kostenlos und können auf einem PC ausgeführt werden (Windows und Linux werden unterstützt).
<ol>
	<li>Erstellen Sie ein neues Verzeichnis für ein Projekt.</li>
	<li>Download JMU_LM2_8526_55.raw, JMU_LM2_8568_51.raw, JMU_LM2_8696_37.raw, JMU_LM2_2112_87.raw, JMU_LM2_2195_91.raw, JMU_LM2_2377_73.raw, 20150127_liver_XH03_T_01.raw, 20150127_liver_XH03_T_02.raw, 20150127_liver_XH03_T_03.raw, 20150127_liver_XH03_P_01.raw, 20150127_liver_XH03_P_02.raw, 20150127_liver_XH03_P_03.raw von PRIDE. HINWEIS: Die beiden Gruppen von Dateien können separat von https://www.ebi.ac.uk/pride/archive/projects/PXD039273 und https://www.ebi.ac.uk/pride/archive/projects/PXD006512 heruntergeladen werden (Abbildung 2).</li>
	<li>Laden Sie die erforderlichen Software-Tools herunter und installieren Sie sie.<ol>
		<li>Laden Sie die neueste Version von DIA-NN als .msi Datei herunter. DIA-NN ist als .msi Datei für Windows oder .zip Datei für Linux von https://github.com/vdemichev/DiaNN/releases/tag/2.0</li>
		<li>Laden Sie die neueste Version von MSFileReader als .exe Datei herunter. MSFileReader ist als .exe Datei von https://github.com/thermofisherlsms/MSFileReader/blob/main/MSFileReader_x64.exe frei verfügbar, die für die Verarbeitung von unformatierten Thermo Fisher DIA-Daten erforderlich ist.</li>
		<li>Laden Sie die neueste Version des .NET SDK als .exe Datei herunter. Das .NET SDK ist als .exe Datei von https://dotnet.microsoft.com/en-us/download frei verfügbar, die in Windows zum Ausführen von MSFileReader erforderlich ist.</li>
		<li>Laden Sie die neueste Version von FragPipe als .zip Datei herunter. FragPipe ist als .zip Datei von https://github.com/Nesvilab/FragPipe/releases frei verfügbar. Die Zip-Datei mit jre wird empfohlen, da sie eine Java-Runtime für Windows enthält, die zum Ausführen von FragPipe benötigt wird. MSFragger ist in die FragPipe eingebettet.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Laden Sie die neueste Version von R und Rstudio sowie die R-Skriptdateien aus der Zusatzdatei 1 und der Zusatzdatei 2 herunter. R und RStudio können kostenlos von https://cran.rstudio.com/bin/windows/base/R-4.5.0-win.exe und https://posit.co/download/rstudio-desktop/ heruntergeladen werden.</li>
	<li>Entpacken Sie die komprimierten Dateien und klicken Sie auf die . exe oder .msi Files , um die Anwendungen zu installieren.</li>
</ol>
2. DIA-Datenanalyse mit DIA-NN
<ol>
	<li>Laden Sie die Referenz-Proteome-Fasta-Datei von UniProt herunter. Um das Referenzproteom des Homo sapiens herunterzuladen (Isoforminformationen nicht enthalten), gehen Sie zu https://www.uniprot.org/proteomes/UP000005640 (Abbildung 3A).</li>
	<li>Klicken Sie auf die Schaltfläche FASTA hinzufügen , um die Referenzproteomdatei in DIA-NN zu laden.</li>
	<li>Wählen Sie die beiden Optionen FASTA-Digest für bibliotheksfreie Suche/Bibliotheksgenerierung und Deep-Learning-basierte Spektren, RTs und lMs-Vorhersage unter Precursor-Ionengenerierungsteil. Klicken Sie auf die Schaltfläche Run , um eine vorhergesagte Spektralbibliothek zu generieren (Abbildung 3B).<ol>
		<li>Nachdem die vorhergesagte Spektralbibliotheksdatei generiert wurde, verwenden Sie diese für andere Experimente innerhalb derselben experimentellen Aufnahmeeinstellungen, indem Sie auf die Schaltfläche Spektral klicken, um die vorhergesagte Bibliothek hinzuzufügen.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Deaktivieren Sie die beiden Optionen unter dem Teil zur Erzeugung von Vorläuferionen und klicken Sie auf die Schaltfläche Typ, die mit dem Dateiformat unter dem Eingabeteil korreliert, um die DIA-Daten zu laden.</li>
	<li>Legen Sie die Massengenauigkeit und die MS1-Genauigkeit unter Algorithmus auf 0,0 ppm fest.</li>
	<li>Passen Sie die Einstellungen für den Massenbereich des Vorläufers und des Fragments unter Teil zur Erzeugung von Vorläuferionen basierend auf den experimentellen Einstellungen an.</li>
	<li>Behalten Sie die anderen Standardeinstellungen bei.<ol>
		<li>Die Vorläufergeneration von DIA-NN verwendet Trypsin/P (spaltet nach K/R, es sei denn, es folgt Prolin) mit 1 fehlenden Spaltung, um einen partiellen Aufschluss zu modellieren; Deaktivieren Sie die N-Term-M-Exzision für nicht-kanonische Peptide (z. B. Immunpeptidomik) oder erhöhen Sie die verpassten Spaltungen auf 2 für längere Peptide.</li>
		<li>Aktivieren Sie explizit Variablenmodifikationen (standardmäßig deaktiviert) für posttranslationale Modifikationsstudien (PTM) (z. B. Ox (M) für die Oxidation, K-GG für die Ubiquitinierung) und erweitern Sie Peptidfilter (Länge: 7-30 aa; Ladung: 1-4+; Vorläufer m/z: 300-1800) entsprechend den experimentellen Einstellungen (z. B. Länge: 5-50 aa, Ladung=1-6) für große PTMs oder nicht-tryptische Verdaue.</li>
		<li>Die Algorithmuseinstellungen nutzen die automatische Kalibrierung (Massengenauigkeit = 0,0 ppm) für eine präzise Massenausrichtung – Überschreibung mit manuellen Toleranzen (z. B. 10 ppm) für Geräte mit niedriger Auflösung – und Match Between Runs (MBR) überträgt IDs über Läufe hinweg (Deaktivierung für heterogene Proben).</li>
		<li>Die Bewertung neuronaler Netze erhöht die Zuverlässigkeit der Identifizierung (es sei denn, die Datenqualität ist schlecht), während die quant unmarkierte Massenspektrometrie (UMS) eine hochpräzise markierungsfreie Quantifizierung ermöglicht. Umstellung auf MS2-Quantifizierung für isobare Tags (z. B. TMT). Verwenden Sie die bibliotheksfreie Suche nur mit hochauflösenden DIA-Daten, um die Anforderungen an die Spektralbibliothek zu umgehen.</li>
	</ol>
	</li>
	<li>Klicken Sie auf die Schaltfläche Ausführen . Warten Sie auf die Ergebnisse, bis Fertig in der Bedienoberfläche angezeigt wird, um anzuzeigen, dass der Lauf abgeschlossen ist (Abbildung 3C).</li>
</ol>
3. DDA-Datenanalyse mit FragPipe
<ol>
	<li>Klicken Sie nach der Installation auf das Fragpipe-Symbol im Ordner ~\FragPipe\fragpipe\bin. Alle abhängigen Einstellungen sind auf der Registerkarte "Konfiguration" zu sehen. Überprüfen Sie, ob die drei Module (MSFragger, IonQuant, diaTracer, DIA-NN und Python) auf Ihrem Computer vorhanden sind. Wenn nicht, laden Sie sie herunter, indem Sie auf Download/Update oder Download klicken (Abbildung 4A).</li>
	<li>Wechseln Sie zur nächsten Registerkarte, Workflow. Wählen Sie Standard für den Workflow aus und klicken Sie auf Workflow laden. Klicken Sie auf Dateien hinzufügen , um Dateipfade hinzuzufügen. Weisen Sie den Namen des Experiments und die Bioreplikationsnummer unter Dateien zuweisen zu oder lassen Sie es einfach (Abbildung 4B).</li>
	<li>Klicken Sie nun auf Datenbank und wenden Sie sich an diese Registerkarte. Laden Sie eine Fasta-Datei oder laden Sie Fasta-Dateien herunter, je nach Spezies der Proben. Wählen Sie während des Downloads die Optionen Nur überprüfte Sequenzen, Köder hinzufügen und Häufige Verunreinigungen hinzufügen für einen einfachen Lauf aus (Abbildung 4C).</li>
	<li>Klicken Sie dann auf MSFragger , um die Registerkarte zu ändern. Wählen Sie die Standardkonfiguration für die geschlossene Suche und klicken Sie auf Laden. HINWEIS: Die geschlossene Suche ist im Grunde eine Suche nach den Änderungen, die Sie vorgenommen haben, während die offene Suche alle möglichen Änderungen aus den Daten untersucht, was zeit- und speicherintensiver ist.</li>
	<li>Behalten Sie für den Peakabgleich die Standardeinstellungen bei, mit der Ausnahme, dass die Auswahl von Keine für Kalibrierung und Optimierung empfohlen wird, da dies Zeit spart.</li>
	<li>Für die Proteinverdauung passen Sie die Parameter entsprechend den Versuchsbedingungen an. Behalten Sie die folgenden Standardeinstellungen bei (Abbildung 5A). HINWEIS: Die Massentoleranzen für Vorläufer und Fragmente (± 20 ppm) definieren den maximal zulässigen Massenfehler für die Anpassung experimenteller Spektren an theoretische Peptide, wobei für hochauflösende Instrumente engere Werte empfohlen werden. Die Enzymregeln (striktes Trypsin) spezifizieren die Spaltungsspezifität (nach K/R, sofern nicht von P gefolgt wird), wobei fehlende Spaltungen (2) teilweise verdaute Peptide zulassen. Peptidlängen- (5-50 Reste) und Massenfilter (500-5000 Da) schließen unwahrscheinliche Kandidaten aus. Variable Modifikationen (z. B. +15,9949 Da auf Methionin für die Oxidation, +79,96633 Da auf S/T/Y für die Phosphorylierung) ermöglichen den Nachweis chemischer Veränderungen, während Max-Kombinationen (5) gleichzeitige Modifikationen pro Peptid begrenzen, um den Suchraum zu verwalten. Die maximale Anzahl variabler Mods pro Site (z. B. 3 auf M) steuert die Änderungshäufigkeit. Die geteilte Datenbank verbessert die Effizienz bei großen Proteomen, und der Isotopenfehler (0/1/2) erklärt falsch zugeordnete Isotopenpeaks. Diese Einstellungen sorgen für ein ausgewogenes Verhältnis zwischen Sensitivität, Spezifität und Rechenlast bei der Peptididentifizierung.</li>
	<li>Wechseln Sie zur Registerkarte Validierung. Deaktivieren Sie Predict RT und Predict spectra, die für DIA-Daten gelten (Abbildung 5B).</li>
	<li>Klicken Sie auf die Registerkarte Quant (MS1). Wählen Sie MS1 Quant ausführen aus und klicken Sie auf Load Quant defaults. Wählen Sie IonQuant aus, und behalten Sie die Standardeinstellungen bei (Abbildung 6A). Deaktivieren Sie MBR für instabile Retentionszeiten oder deaktivieren Sie die Intensitätsnormalisierung , wenn globale Skalierungsverzerrungen auftreten; Aktivieren Sie die Option Index auf Festplatte behalten , um RAM bei großen Datensätzen zu sparen. HINWEIS: Quant (MS1) optimiert standardmäßig die markierungsfreie Quantifizierung mit MaxLPQ (MaxLFQ-based Protein Quantification, ein Algorithmus, der die MaxLFQ-Methode auf Proteingruppen erweitert) und erfordert ≥1 einzigartiges Ion pro Protein (Erhöhung auf ≥2 für höhere Stringenz auf Kosten der Abdeckung). Match Between Runs (MBR) überträgt Identifikationen über Läufe hinweg unter Verwendung der Retentionszeittoleranz (RT) (Standard 0,4 min; anziehen auf 0,2 min für stabile Chromatographie oder lockern für Gradientenvariabilität) und der Ionenmobilitätstoleranz (IM) (Standard 0,05 1/k0 [inverse reduzierte Mobilität]; Anpassung basierend auf IM-Präzision), gefiltert nach ≤1 % FDR (False Discovery Rate; Standard-MBR-Ionen-FDR=0,01; niedriger auf 0,005 für Genauigkeit). Die Proteininferenz verwendet uniquer+rascor (Razor Peptide assignment for protein grouping). Bei der Merkmalserkennung wird eine Massentoleranz von 10 ppm verwendet (Erhöhung auf 20 ppm für MS mit niedriger Auflösung oder Verringerung auf 5 ppm für hochauflösende Auflösung).</li>
	<li>Klicken Sie nun auf die Registerkarte Ausführen . Wählen Sie Ausgabeverzeichnis aus. Klicken Sie auf RUN , um mit der Analyse der Daten zu beginnen (Abbildung 6B). HINWEIS: Für markierungsfreie Proteomik-Daten, die sich nicht auf Modifikationen konzentrieren oder eine markierungsbasierte Quantifizierung verwenden, werden keine PTMs, Glyko- und Quant (isobar) Registerkarten verwendet.</li>
</ol>
4. DIA-NN/FragPipe Downstream-Analyse
HINWEIS: Die in dieser Studie verwendeten detaillierten Codes sind als Zusatzdatei 1 und Zusatzdatei 2 enthalten. Die in dieser Studie verwendeten Paketversionen finden Sie in der Ergänzungsdatei 3.
<ol>
	<li>Öffnen Sie RStudio und lesen Sie die von DIA-NN oder FragPipe generierten Proteinexpressionsdaten. Proteingruppenmatrixdaten, die mit .pg_matrix.tsv enden, aus DIA-NN und kombinierte Proteindaten, die mit .tsv enden, von FragPipe werden normalerweise für die Analyse verwendet.</li>
	<li>Entfernen Sie die fehlenden Werte, ohne NA einzufüllen, und filtern Sie die Proteingruppen heraus, die mit weniger als zwei einzigartigen Peptiden identifiziert und quantifiziert wurden. HINWEIS: Die DIA-Zahlen in dieser Studie wurden von gefilterten Proteingruppen generiert, während die DDA-Zahlen von ungefilterten Proteingruppen stammten.</li>
	<li>Normalisieren Sie die Proteinintensitäten durch mediane Skalierung oder Quantilnormalisierung über Proben hinweg. Die DIA-Daten in dieser Studie wurden durch mediane Normalisierung normalisiert, während die DDA-Daten durch Quantilnormalisierung normalisiert wurden, um die beiden Methoden besser zu demonstrieren. HINWEIS: Die mediane Normalisierung ist robust gegenüber Ausreißern und eignet sich für Szenarien, in denen die Mehrheit der Proteine in allen Proben unverändert bleibt, was die mediane Proteinhäufigkeit zu einem stabilen Referenzpunkt macht. Es kann jedoch in Szenarien mit stark differentiell exprimierten Proteinenversagen 18. Die Quantilnormalisierung gewährleistet eine gleichmäßige Verteilung der Proteinhäufigkeiten über die Proben hinweg, was beim Vergleich von Proben mit unterschiedlichen Verteilungen hilfreich ist. Es hat sich gezeigt, dass es die statistische Aussagekraft verringert und die Daten übernormalisieren kann, wodurch möglicherweise echte biologische Unterschiede maskiert werden18. In der Proteomik wird die mediane Normalisierung häufig in markierungsfreien Studien verwendet, um systematische Verzerrungen im Zusammenhang mit der Leistung von MS-Instrumenten zu beseitigen. Die Quantilnormalisierung wird für großräumige Datensätze, die differentielle Expressionsanalyse und die Clusteranalyse bevorzugt19,20.</li>
	<li>Berechnen Sie log2-fache Veränderungen (z. B. PDAC-Serum im Vergleich zu Normal) und t-Test-p-Werte. Berechnen Sie korrigierte p-Werte mit der Benjamini-Hochberg-Methode. Definieren Sie Signifikanzschwellenwerte (z. B. |log2FC| &gt; 1, p_adj (FDR) &lt; 0,05). HINWEIS: Die in den Zahlen dieser Studie verwendeten Cutoff-p-Werte stellen Rohwerte dar, da die Verwendung von angepassten p-Werten (p_adj) alle nachweisbaren Proteine innerhalb der statistischen Aussagekraft dieser begrenzten Datensätze eliminieren würde.</li>
	<li>Prüfen Sie, ob fehlende/NA-Werte vorhanden sind, und schließen Sie diese aus. Generieren Sie ein Vulkandiagramm, um signifikante Treffer zu visualisieren.</li>
	<li>Wählen Sie signifikant dysregulierte Proteine aus. Wenden Sie die Z-Score-Normalisierung auf Proteinexpressionswerte an. Plotten Sie eine geclusterte Heatmap mit Beispielgruppenanmerkungen.</li>
	<li>Ordnen Sie Proteine Entrez-IDs zu, indem Sie org. Hs.eg.db. Führen Sie eine GO-Anreicherung (biologischer Prozess) und eine Analyse des KEGG-Signalwegs durch. HINWEIS: Kategorien biologischer Prozesse (BP) werden in der Genontologie-Analyse (GO) häufig ausgewählt, da sie die größeren Prozesse oder biologischen Programme beschreiben, die durch mehrere molekulare Aktivitäten erreicht werden20. Diese Begriffe konzentrieren sich auf zelluläre Funktionen, die bei Krankheiten wie Krebs schief gehen, einschließlich essentieller Prozesse wie Zellzyklusregulation, Stoffwechselprozesse usw. Neben dem Blutdruck umfasst die GO-Analyse auch die Kategorien Molekulare Funktion (MF) und Zelluläre Komponente (CC). MF-Begriffe beschreiben die biochemischen Aktivitäten von Genprodukten, wie z. B. den Ionentransport oder die DNA-Bindungsfähigkeit. CC-Begriffe definieren die zellulären Orte, an denen Genprodukte ihre Funktionen erfüllen, wie z. B. der Zellkern, die Mitochondrienmembran oder das Zytoskelett.</li>
	<li>Abfragen von STRINGdb für Interaktionen (Konfidenzbewertung ≥ 400). Generieren Sie ein interaktives Netzwerk mit visNetwork.</li>
</ol>

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<li>Zheng, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multi-omics+data+integration+using+ratio-based+quantitative+profiling+with+Quartet+reference+materials%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Multi-omics data integration using ratio-based quantitative profiling with Quartet reference materials.</a> Nat Biotechnol. 42 (7), 1133-1149 (2024).</li>
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<li>Leutert, M., Entwisle, S. W., Villén, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Decoding+Post-Translational+Modification+Crosstalk+With+Proteomics%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Proteomics%22%5BJournal%5D)">Decoding Post-Translational Modification Crosstalk With Proteomics.</a> Mol Cell Proteomics. 20, 100129(2021).</li>
<li>Schneider, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Scalable%2C+Web-Based+Platform+for+Proteomics+Data+Processing%2C+Result+Storage+and+Analysis%5BTitle%5D)+AND+%22Proteome+Res%22%5BJournal%5D)">A Scalable, Web-Based Platform for Proteomics Data Processing, Result Storage and Analysis.</a> Proteome Res. 24 (3), 1241-1249 (2025).</li>
<li>Jalili, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+Galaxy+platform+for+accessible%2C+reproducible+and+collaborative+biomedical+analyses%3A+2020+update%5BTitle%5D)+AND+%22Nucl+Acids+Res%22%5BJournal%5D)">The Galaxy platform for accessible, reproducible and collaborative biomedical analyses: 2020 update.</a> Nucl Acids Res. 48 (W1), W395-W402 (2020).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>.NET SDK v. 9.0.203</td><td>Microsoft</td><td></td><td>https://dotnet.microsoft.com/en-us/download</td></tr><tr><td>DIA-NN v. 2.1.0</td><td></td><td></td><td>https://github.com/vdemichev/DiaNN/releases/tag/2.0&nbsp;</td></tr><tr><td>FragPipe v. 22.0</td><td></td><td></td><td>https://github.com/Nesvilab/FragPipe/releases</td></tr><tr><td>MSFileReader v. 3.1&nbsp;</td><td>Thermo Fischer</td><td></td><td>https://github.com/thermofisherlsms/MSFileReader/blob/main/MSFileReader_x64.exe</td></tr><tr><td>R 4.5.0</td><td></td><td></td><td>https://cran.rstudio.com/bin/windows/base/R-4.5.0-win.exe</td></tr><tr><td>Rstudio v. 2024.12.1+563</td><td></td><td></td><td>https://posit.co/download/rstudio-desktop/</td></tr></tbody></table>

navigieren in den massenspektrometrischen proteomdaten mit kostenlosen berechnungswerkzeugen

Navigating the Mass Spectrometry-Based Proteomic Data Using Free Computational Tools

Um die Suche nach proteomischen Datensätzen besser zu veranschaulichen, haben wir zwei Arten von Datensätzen für diese Analyse ausgewählt. Mit dem Ziel, dysregulierte Proteine in klinischen Kontexten zu demonstrieren, suchten wir in PRIDE mit Schlüsselwörtern wie clinic. Konkret wählten wir einen für die DIA-Analyse geeigneten Datensatz des Clinical Proteomic Tumor Analysis Consortium (CPTAC)21 und einen weiteren, der für die DDA-Analyse geeignet ist, vom Chinese H...

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Mass spectrometry (MS)-based proteomics data, including Data-Dependent Acquisition (DDA) and Data-Independent Acquisition (DIA), are widely used in ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video demonstriert die Peptidaufreinigung durch das STAGE Tip-Verfahren. Eine Miniatursäule mit Harzkügelchen, die an lange Kohlenwasserstoffketten gebunden sind, erleichtert die Reinigung auf Basis hydrophober Wechselwirkungen. Beim Laden einer vorverdauten Peptidprobe in die Säule binden sich die Peptidfragmente an die Harzkügelchen, wodurch Verunreinigungen passieren können. Ein Elutionspuffer, der die hydrophobe Wechselwirkung stört, wird zur Eluierung der Peptidfragmente angewendet.

Ein STAGE-Spitzenverfahren zur Entsalzung und Reinigung von Peptiden

Hier stellen wir Protokolle für die Affinitätsreinigung von Proteinkomplexen und deren Trennung durch blaue native PAGE, gefolgt von Proteinkorrelationsprofilierungs freie quantitative Massenspektrometrie Label. Diese Methode ist nützlich Interaktom in verschiedene Proteinkomplexe zu lösen.

Auflösen von Affinity Purified Protein-Komplexen von Blue native PAGE und Protein Correlation Profilieren

Wir präsentieren Ihnen ein Protokoll, um präzise quantitate Proteine mit Isobaren Kennzeichnung, umfangreiche Fraktionierung, Bioinformatik und Qualitätskontrolle Schritte in Kombination mit Flüssigkeitschromatographie eine Schnittstelle zu einem hochauflösenden Massenspektrometer.

Tiefen Proteom Profilierung durch isobare Kennzeichnung, umfangreiche Flüssigchromatographie-Massenspektrometrie und softwaregestützte Quantifizierung

Ein detailliertes Protokoll wird für die Trennung, Identifikation und Charakterisierung von Proteoforms in Proteinproben mit Kapillare Zone Elektrophorese-Electrospray Ionisierung-Tandem-Massenspektrometrie (CZE-ESI-MS/MS) beschrieben. Das Protokoll kann für die hochauflösende Charakterisierung von Proteoforms in einfachen Proteinproben und der großen Identifikation von Proteoforms in komplexen Proteom Proben verwendet werden.

Groß angelegte Top-Down-Proteomik mit Kapillare Zone Elektrophorese Tandem-Massenspektrometrie

OpenProt ist eine frei zugängliche Datenbank, die eine Polycistronic Modell der eukaryotic Genome erzwingt. Hier präsentieren wir ein Protokoll für die Verwendung von OpenProt Datenbanken bei der Massenspektrometrie Datasets zu verhören. Mit OpenProt kann Datenbank zur Auswertung von Proteomic Experimenten für Entdeckung von Roman und bisher nicht nachweisbar Proteinen.

Massenspektrometrie-basierte Proteomics Analysen mithilfe der OpenProt-Datenbank zu enthüllen neue Proteine übersetzt aus dem nicht-kanonischen Open Reading Frames

Für die hochauflösende Complexome-Profilierung wird ein vielseitiges kryolicing BN-MS-Protokoll mit einem Mikrotom vorgestellt.

High-Resolution Complexome Profiling by Cryoslicing BN-MS Analysis

Described ist ein Proteomik-Workflow zur Identifizierung von Proteininteraktionspartnern aus einer nuklearen subzellulären Fraktion mithilfe der Immunaffinitätsanreicherung eines bestimmten Proteins von Interesse und der etikettenfreien Massenspektrometrie. Der Workflow umfasst subzelluläre Fraktionierung, Immunpräzipitation, filtergestützte Probenvorbereitung, Offline-Bereinigung, Massenspektrometrie und eine nachgelagerte Bioinformatik-Pipeline.

Etikettenfreier Immunpräzipitations-Massenspektrometrie-Workflow für großangelegtes Nuklear-Interactome-Profiling

Das beschriebene Protokoll bietet eine optimierte quantitative Proteomik-Analyse von Gewebeproben mit zwei Ansätzen: markierungsbasierte und markierungsfreie Quantifizierung. Markierungsbasierte Ansätze haben den Vorteil einer genaueren Quantifizierung von Proteinen, während ein markierungsfreier Ansatz kostengünstiger ist und zur Analyse von Hunderten von Proben einer Kohorte verwendet wird.

Umfassender Workflow der massenspektrometrischen Schrotflintenproteomik von Gewebeproben

Hier etablieren wir eine massenspektrometrische proteomische Methode unter Verwendung isolierter Regionen von Interesse in formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebeschnitten. Dieses Protokoll wird verwendet, um Proteome aus bestimmten Gewebebereichen in archivierten formalinfixierten, paraffineingebetteten Gewebeschnitten zu analysieren.

Ein optimierter Ansatz für die massenspektrometrische Proteomik unter Verwendung ausgewählter Geweberegionen

Die Messung der Giermoment des angebundenen Drosophila mit dem Drehmoment-Meter ermöglicht die Neurowissenschaftler exquisite Kontrolle der Reizsituation des Versuchstieres. Zusammen mit dem einzigartigen genetischen Werkzeuge in der Fruchtfliege, ist dieses Paradigma für eine Vielzahl von neurobiologischen Forschung eingesetzt.

Operanten Lernens von Drosophila an der Torque Meter

Lernen Sie die Analyse massenspektrometrischer Proteomdaten mit kostenlosen Werkzeugen wie DIA-NN und MSFragger. Diese Methode ermöglicht Biologen die effiziente Validierung und Exploration öffentlicher Datensätze.

Navigieren in den massenspektrometrischen Proteomdaten mit kostenlosen Berechnungswerkzeugen

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