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DOI: 10.3791/68887-v
Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.
This study investigates how yeast (S. cerevisiae) cells manage chromosome segregation during mitosis, utilizing synchronized cell cycles to observe cellular dynamics. By employing alpha-factor arrest in BAR1 mutants, researchers can achieve a precise G1 arrest to monitor changes in protein localization and activity throughout the cell cycle.
Dieses Protokoll beschreibt zwei Methoden des Hefezellzyklus-Arrests und der optionalen Freisetzung und erläutert den Einsatz von Fluoreszenzmikroskopie zur Untersuchung von zellzyklusabhängigen Prozessen in S. cerevisiae.
Wir untersuchen, wie sich teilende Zellen während der Mitose ihre Chromosomen treu weitergeben, wobei wir uns auf die molekularen Maschinen und Mechanismen konzentrieren, die eine genaue Chromosomentrennung gewährleisten. Wir synchronisieren Zellen, um molekulare Prozesse zu untersuchen, die sich mit dem Zellzyklus verändern. Ohne diese Methoden wären wichtige Änderungen in einer unsynchronisierten Zellpopulation verborgen.
Im Vergleich zu anderen Synchronisationsmethoden bietet der Alpha-Faktor-Arrest bei BAR1-Mutanten einen saubereren, reversiblen G1-Arrest, der es uns ermöglicht, eine gesamte Hefekultur synchron im Zyklus zu verfolgen. Unsere Arbeit zeigt dynamische Veränderungen in der Proteinlokalisierung und -aktivität während des Zellzyklus auf und beleuchtet wichtige mitotische Prozesse wie Chromosomensegregation und Spindelpflege. Zu Beginn inokulieren Sie die Hefe in 25 Milliliter YPAD-Medium und inkubieren Sie über Nacht, um eine optische Dichte von 600 Nanometern zwischen 0,5 und 2,0 zu erreichen.
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