Name: Manipulation und Analyse von zellzyklusabhängigen Prozessen in knospenden Hefen (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2025-09-26T14:10:00.000+00:00
Duration: 8 min 13 s
Description: Lernen Sie die Synchronisation von Hefezellzyklen in Saccharomyces cerevisiae mittels Alpha-Faktor-Arrest. Diese Methode ermöglicht die präzise Analyse dynamischer Proteinlokalisierung während der Mitose.

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<table><tbody><tr><td>?-Faktor</td><td>Kernsynthese-Einrichtung der University of Utah</td><td></td><td>Sequenz: WHWLQLKPGQPMY</td></tr><tr><td>1,5 mL Eppendorf-Röhren</td><td>Axygen</td><td>MCT-175-C</td><td></td></tr><tr><td>10mM dNTP-Mix</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>R0193</td><td></td></tr><tr><td>50-mL konische Röhren</td><td>Greiner Bio-One</td><td>227 261</td><td></td></tr><tr><td>5x Phusion HF-Reaktionspuffer</td><td>New England BioLabs</td><td>B0518S</td><td></td></tr><tr><td>Essigsäure, glazial</td><td>Fisher Chemical</td><td>BP2401C-212</td><td></td></tr><tr><td>Adenin-Hemisulfat-Salz</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9126-100G</td><td></td></tr><tr><td>Agar, granuliert</td><td>Apex Chemikalien und Reagenzien</td><td>20-275</td><td></td></tr><tr><td>Agarose</td><td>Apex Bioresearch Produkte</td><td>20-102GP</td><td></td></tr><tr><td>Autoklav Amsco Century Dampfsterilisator</td><td>Steris</td><td>SV-1262</td><td></td></tr><tr><td>Autoklaviertes DI-Wasser</td><td></td><td></td><td></td></tr><tr><td>Auxin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>Katze#I3750-5G-A; CAS: 87-51-4</td><td></td></tr><tr><td>Cargille-Laserflüssigkeit</td><td>Cargille Laboratories</td><td>20130</td><td></td></tr><tr><td>D-Sorbitol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>S1876-500G</td><td></td></tr><tr><td>DAPI (40,6-Diamidino-2-Phenylindol, Dihydrochlorid)</td><td>Molekulare Sonden</td><td>Katze#D1306</td><td></td></tr><tr><td>Desoxyribonukleinsäure-Natriumsalz aus Lachshoden</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D1626</td><td></td></tr><tr><td>Dextrose</td><td>Fisher Chemical</td><td>D16-10</td><td></td></tr><tr><td>Dinatriumethylendiamin-Tetraacetat</td><td>Fisher Chemical</td><td>S811-10</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>20688</td><td></td></tr><tr><td>FIJI/ImageJ2 vs 2.14.0/1.54f</td><td>ImageJ2</td><td>https://imagej.net/software/fiji/</td><td></td></tr><tr><td>Festgeschwindigkeits-Vortex-Mixer</td><td>VWR</td><td>https://dabos.com/product/vortex-mixers-vwr-fixed-speed-vortex-mixer-00001-24763?srsltid=AfmBOoo5TH0aoExvrrrphDaFt8XAsDqLvkjxtEUj1QWlFbWh7_gwzMObLT4&gQT=2</td><td></td></tr><tr><td>Fluoreszenzmikroskop DV Ultra</td><td>Leica</td><td>https://www.leica-microsystems.com/c/am/lsr-w/fluorescence-microscope-wf/?nlc=20250214-SFDC-022570&utm_source=google&utm_medium=cpc&utm_campaign=25-AM-LSR-L3-LSPO-LSWF-SE-Google-Ads-WF-Thunder-Search&utm_content=text_ad&utm_term=fluorescence%20microscopes&gad_source=1&gad_campaignid=170130111&gbraid=0AAAAADrbsAF-dGDbxzgT8m_cvXSlf4BB0&gclid=CjwKCAjwmenCBhA4EiwAtVjzmkMJUGFksaHezZvlBUlbbS1tR8RqXP24dbSRzcRgTT8RmJy7nyeThBoC3yQQAvD_BwE</td><td>Seriennummer #: NV01063. Nicht mehr unterstützt</td></tr><tr><td>Formaldehyd</td><td>Fisher Chemical</td><td>Kat#F79-500</td><td></td></tr><tr><td>Gel-Apparat</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>Eule EasyCast B1</td><td></td></tr><tr><td>GeneRuler DNA-Leiter-Mix</td><td>Fermentas</td><td>SM0333</td><td></td></tr><tr><td>Glasperlen</td><td>Fisher Scientific</td><td>11312A</td><td></td></tr><tr><td>Glasrutschen</td><td>VWR</td><td>48300-026</td><td></td></tr><tr><td>Innova 2300 Plattformschüttler</td><td>Neubraunschweig</td><td>NB-2300</td><td></td></tr><tr><td>Kimwipes</td><td>Kimtech</td><td>06-666</td><td></td></tr><tr><td>Laborzentrifuge für 1,5-mL-Röhren</td><td>Eppendorf</td><td>2525</td><td></td></tr><tr><td>Laborzentrifuge für 50-mL-Röhren</td><td>Eppendorf</td><td>5804</td><td></td></tr><tr><td>Lithiumacetat-Dihydrat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>L4158-250G</td><td></td></tr><tr><td>Master cycler nexus X2</td><td>Eppendorf</td><td>https://www.eppendorf.com/us-en/Products/PCR/Thermocyclers/Mastercycler-nexus-X2-p-PF-82586</td><td></td></tr><tr><td>Mikropipetten p2, p20, p200 und p1000 sowie entsprechende Spitzen</td><td>Rainin</td><td>L-2XLS+R, L-20XLS-R, L-200XLS-R, L-1000XLS-R</td><td></td></tr><tr><td>Mikroskopabdeckungsglas</td><td>Fisher Scientific</td><td>12541014</td><td></td></tr><tr><td>Nocodazol</td><td>Calbiochem</td><td>Katze#487928; CAS: 31430-18-9; Los#B35705</td><td></td></tr><tr><td>Orange G</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>O7252</td><td></td></tr><tr><td>PFLOCK</td><td>Hampton Research</td><td>HR2-591</td><td></td></tr><tr><td>Peptongranuliert&nbsp;</td><td>Fisher-Bioreagenzien</td><td>BP9725-5</td><td></td></tr><tr><td>Phusion HF-DNA-Polymerase</td><td>New England BioLabs</td><td>M0530L</td><td></td></tr><tr><td>Pipet-X</td><td>Rainin</td><td>PX-100R</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumphosphat, dibasisch</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>424195000</td><td></td></tr><tr><td>Kaliumphosphat, monobasisch</td><td>Thermowissenschaftlich</td><td>424200025</td><td></td></tr><tr><td>Stromquelle</td><td>Bio-Rad</td><td>23786</td><td></td></tr><tr><td>Starte Acquire Ultra 1.2.2</td><td>softWoRx Cytiva</td><td>Erhalten Sie mit DV Ultra</td><td></td></tr><tr><td>Tris Base</td><td>Fisher-Bioreagenzien</td><td>BP152-10</td><td></td></tr><tr><td>Triton X-100</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>9002-93-1</td><td></td></tr><tr><td>Röhrenrotator</td><td>VWR</td><td>10136-084</td><td></td></tr><tr><td>Wasserbad</td><td>VWR</td><td>WBE10A11B</td><td></td></tr><tr><td>Wasser, Ultra Pure</td><td>Apex Bioresearch Produkte</td><td>18-194</td><td></td></tr><tr><td>Granulierter Hefeextrakt</td><td>Fisher-Bioreagenzien</td><td>BP9727-5</td><td></td></tr></tbody></table>

manipulation und analyse von zellzyklusabhängigen prozessen in knospenden hefen

Manipulation and Analysis of Cell Cycle-Dependent Processes in Budding Yeast

Manipulation und Analyse von zellzyklusabhängigen Prozessen in knospenden Hefen

Eukaryotic cells follow a conserved cell cycle that regulates diverse processes, including DNA maintenance and organelle homeostasis. Studying cellular ...

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Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Gene Löschungs-und Protein-Überexpression sind gängige Methoden zur Untersuchung von Funktionen von Proteinen. In diesem Artikel beschreiben wir ein Protokoll für die Analyse der Phänotyp Entwicklung als eine Funktion der Protein-Konzentration in der Bevölkerung und Single-Cell-Ebenen...

Die Analyse der Entwicklung eines morphologischen Phänotyp als Funktion der Protein-Konzentration in Hefezellen

Die Bestimmung der Zellzyklus-Position eine Population von Zellen, oder zu verstehen, wie Signale Verbreitung beeinflussen, kann leicht durch Durchflusszytometrie mit diesem Protokoll gemessen werden. Wir berichten über einen einfachen experimentellen Ansatz zur Färbung von Zellen und die Quantifizierung ihrer Position in den Zellzyklus.

Analyse des Zellzyklus Position in Säugerzellen

Wir präsentieren ein einfaches Protokoll zur Fluoreszenzmikroskopie Filme von wachsenden Hefezellen und eine GUI-basierte Software-Paket, um Single-Cell-Zeitreihen extrahieren zu erhalten. Die Analyse umfasst automatisierte Linie und Teilung Zeitzuweisung mit Sichtprüfung und manuelle curation der verfolgten Daten integriert.

Acquiring Fluoreszenz Zeitraffer-Filme von Bäckerhefe und Analysieren von Einzel-Zell-Dynamics mit Transplantaten

Die Spalthefe Schizosaccharomyces pombe ist ein ausgezeichnetes Modellsystem cytokinesis studieren, die letzte Stufe in der Zellteilung. Hier haben wir einen Mikroskopie-Ansatz beschreiben verschiedene zytokinetischen Ereignisse in Live-Spalthefezellen analysieren.

Räumlich-zeitliche Analyse von zytokinetischen Events in Spalthefe

Hefe Angehende ist ein vorteilhaftes Modell die Dynamik der Mikrotubuli in vivo aufgrund seiner leistungsstarken Genetik und die Einfachheit der Mikrotubuli - Zytoskelett für das Studium. Das folgende Protokoll beschreibt, wie zu transformieren und Kultur Hefezellen, konfokale Mikroskopie Bilder erfassen und quantitativ die Dynamik der Mikrotubuli in lebenden Hefezellen analysieren.

Hochauflösende Bildgebung und Analyse einzelner Astral Dynamik der Mikrotubuli in Bäckerhefe

Der Inherent Dynamics Visualizer ist ein interaktives Visualisierungspaket, das mit einem Genregulationsnetzwerk-Inferenzwerkzeug verbunden ist, um eine verbesserte, optimierte Generierung funktionaler Netzwerkmodelle zu ermöglichen. Der Visualizer kann verwendet werden, um fundiertere Entscheidungen für die Parametrisierung des Inferenzwerkzeugs zu treffen und so das Vertrauen in die resultierenden Modelle zu erhöhen.

Inherent Dynamics Visualizer, eine interaktive Anwendung zur Bewertung und Visualisierung von Ergebnissen aus einer Gene Regulatory Network Inference Pipeline

Die Zeitraffer-Mikroskopie ist ein wertvolles Werkzeug zur Untersuchung der Meiose in knospender Hefe. Dieses Protokoll beschreibt eine Methode, die Zellzyklus-Synchronisation, Zeitraffer-Mikroskopie und bedingte Depletion eines Zielproteins kombiniert, um zu zeigen, wie die Funktion eines bestimmten Proteins während der meiotischen Chromosomentrennung untersucht werden kann.

Einsatz von Zeitraffer-Mikroskopie und stadienspezifischer Kerndepletion von Proteinen zur Untersuchung der Meiose bei S. cerevisiae

Eine Herausforderung bei der Analyse synchronisierter Zeitreihenexperimente besteht darin, dass sich die Experimente oft in der Dauer der Erholung von der Synchronität und der Zellzyklusperiode unterscheiden. Daher können die Messungen aus verschiedenen Experimenten nicht aggregiert analysiert oder ohne weiteres verglichen werden. Hier beschreiben wir eine Methode zur Ausrichtung von Experimenten, um phasenspezifische Vergleiche zu ermöglichen.

Abgleich von synchronisierten Zeitreihendaten unter Verwendung des Modells zur Charakterisierung des Zellzyklusverlusts für experimentübergreifende Vergleiche

In diesem Artikel präsentieren wir ein allgemeines Protokoll zur Messung der replikativen Lebensspanne von Hefe Mutter-Zellen.

Mess-replikative Lebensspanne in der Hefe

Quantitative Live Cell Fluoreszenz-Mikroskopie Analyse von Fission Yeast

Lernen Sie die Synchronisation von Hefezellzyklen in Saccharomyces cerevisiae mittels Alpha-Faktor-Arrest. Diese Methode ermöglicht die präzise Analyse dynamischer Proteinlokalisierung während der Mitose.

Manipulation und Analyse von zellzyklusabhängigen Prozessen in knospenden Hefen

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