Name: Effiziente Isolierung von fett-abgeleiteten Stammzellen und Adipozyten aus schweine-fetthaltigem Gewebe (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-05-26T13:40:00.000+00:00
Duration: 8 min 2 s
Description: Erfahren Sie eine schnelle Methode zur Isolierung fett-abgeleiteter Stammzellen aus Schweinegewebe mittels enzymatischer Verdauung und mechanischer Wellen-Dissociation. Dieses Protokoll reduziert die Verarbeitungszeit erheblich und erhöht die Zellviabilität auf 80–95 %.

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<table><tbody><tr><td>Ein Typ-Gewebedissoziations-Set</td><td>Docsense</td><td>TM001</td><td>Enthält einen Typ-Gewebedissoziationsagent (A-Typ-Lösung) und einen Typ-Gewebedissoziationspuffer (A-Puffer).</td></tr><tr><td>Adipogenes Differenzierungsmedium-Kit</td><td>OriCell</td><td>GUXMD-90031</td><td>Verwendet für die adipogene Differenzierung, einschließlich des hochglukosereichen Dulbeccos modifizierten Eagle-Medium (unmodifiziertes) und Erhaltungsmediums</td></tr><tr><td>Alizarin Red S</td><td>OriCell</td><td>A5533ALIR-10001</td><td>Mineralisierungsfärbung für osteogene Differenzierung (pH 5,2)</td></tr><tr><td>Ascorbinsäure</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A4544</td><td>L-Ascorbinsäure, Zellkultur getestet, für osteogene Induktion</td></tr><tr><td>Bama Minipigs</td><td>Chengdu Dossy Versuchstier-Co., Ltd.</td><td></td><td>Einjährige, männliche, SPF-fähige Tiere, die unter standardisierten Impf-, Entwurmungs- und Reinigungsverfahren gehalten werden. https://www.cd-dossy.cn/animalpl_detail/12606067609851863 04.html</td></tr><tr><td>Bio-Rad TC20 Automatisierter Zellzähler</td><td>Bio-Rad Labore</td><td>1450011</td><td>Automatisierter Zellzähler für Viabilität und Ertragsbewertung</td></tr><tr><td>BODIPY</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>D3922</td><td>Neutrale Lipidfärbung</td></tr><tr><td>BSA (5 %)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9418</td><td>Rinderserumalbumin, lyophilisiertes Pulver, zum Blockieren</td></tr><tr><td>Calcitriol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>C9756</td><td>1&alpha;,25-Dihydroxyvitamin D3, für osteogene Induktion</td></tr><tr><td>Zell-Sieb (70 & mu; m)</td><td>Corning</td><td>352350</td><td>Falcon 70 &mu; m-Zellsieb, steril, zur FACS-Probenvorbereitung</td></tr><tr><td>Zell-Sieb (200 & MU; m)</td><td>pluriSelect</td><td>43-50200-03</td><td>pluriStrainer, PET-Mesh, passt 50-ml-Schläuche, steril & nbsp;</td></tr><tr><td>Zentrifugenröhre (50 mL)</td><td>Corning</td><td>352098</td><td>Falcon 50 mL hochklares konisches Rohr, steril, Polypropylen</td></tr><tr><td>Zählfolie (für Bio-Rad TC20)</td><td>Bio-Rad Labore</td><td>1450011</td><td>Doppelkammer-Zählschieber für TC20 automatischen Zellzähler &nbsp;</td></tr><tr><td>Kulturschale (100 mm)</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>Sterile Polystyrolschale zur Organoidbildung von hängenden Tropfen</td></tr><tr><td>Dexamethason</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D4902</td><td>&ge; 98 % für adipogene und osteogene Induktion</td></tr><tr><td>D-Hanks Balanced Salt Solution oder PBS</td><td>Gibco</td><td>10010015</td><td>Vorgekühlt auf 4 °Π; C, pH 7,4.</td></tr><tr><td>DMEM</td><td>Gibco</td><td>11965084</td><td>Dies wird für den frisch isolierten Kultiver von SVF verwendet.</td></tr><tr><td>DNase I</td><td>Beyotime</td><td>D7073</td><td>Optional, empfohlen, wenn Klumpen festgestellt werden.</td></tr><tr><td>Ethanol</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>459836</td><td>75 % für Oberflächendesinfektion.</td></tr><tr><td>Fetales Rinderserum (FBS)</td><td>Gibco</td><td>A4736201</td><td>Tet-System zugelassen, US-Herkunft, steril&nbsp;</td></tr><tr><td>Durchflusszytometer</td><td>BD Biosciences</td><td>BD FACSCanto II</td><td>3 Laser (405 nm, 488 nm, 633 nm), 8 Fluoreszenzkanäle für die Analyse von Oberflächenmarkern (CD73, CD90, CD11b, CD45), entspricht 70 <img alt="Gleichung 1" src="/files/ftp_upload/70464/70464eq1.jpg" Stil="Rand: Auto; "/>m Düsenbedarf bei 20 psi</td></tr><tr><td>Fluoreszenzmikroskop</td><td>Olympus</td><td></td><td>Invertiertes oder aufrechtes Modell, das FITC- und DAPI-Filtersätze unterstützt.</td></tr><tr><td>Fluoreszierende sekundäre Antikörper</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>A-11001 (Anti-Maus), A-11008 (Anti-Kaninchen)</td><td>Alexa Fluor konjugiert, für Immunfluoreszenz</td></tr><tr><td>Fluorochrom-konjugierte Antikörper (CD73, CD90, CD11b, CD45)</td><td>BD Biosciences</td><td>561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)</td><td>Für die durchflusszytometrische Analyse des ADSC-Phänotyps</td></tr><tr><td>Hoechst</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>H3570</td><td>Nuklearfarbe für die Bewertung von lebenden oder toten Zellen.</td></tr><tr><td>IBMX</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I5879</td><td>&ge; 99 % (HPLC), für adipogenes Induktionsmedium</td></tr><tr><td>Eiskalte, sterile Kochsalzlösung</td><td>Baxter</td><td>2F7124</td><td>0,9 % Natriumchlorid-Injektion, USP, zum Spülen von Gewebe</td></tr><tr><td>Insulin</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I9278</td><td>Rekombinant, in Hefe exprimiert, zur adipogenen Induktion</td></tr><tr><td>Iodophor</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>25104</td><td>2% Desinfektionslösung.</td></tr><tr><td>Matrigel</td><td>Corning</td><td>354230</td><td>Wachstumsfaktor reduziert, Phenol rotfrei, zur Einbettung von Sphäroiden;</td></tr><tr><td>Metallbad</td><td>Servicebio</td><td>SMB-H</td><td>Verwendet für die Inkubation bei 37 °C.</td></tr><tr><td>Oil Red O</td><td>OriCell</td><td>OILR-10001</td><td>Lipidfärbung zur Adipozytendifferenzierung</td></tr><tr><td>Optisches Mikroskop</td><td>Olympus</td><td></td><td>Standard-Brightfield-Mikroskop mit 10x&ndash; 40-fache Ziele.</td></tr><tr><td>Osteogenes Differenzierungsmedium-Kit</td><td>OriCell</td><td>GUXMD-90021</td><td>Verwendet zur osteogenen Differenzierung, einschließlich des hochglukosereichen Dulbeccos modifizierten Eagle-Medium (unverändert) und Erhaltungsmedium</td></tr><tr><td>P1000-Pipette mit breiten Bohrlöcherspitzen</td><td>Beckman Coulter</td><td>B01113</td><td>Biomek P1000 Span-8 Breitbohrungsspitzen, steril</td></tr><tr><td>Paraformaldehyd (4 %)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>J61899</td><td>Wässrige Lösung zur Fixierung von Organoiden&nbsp;</td></tr><tr><td>Pasteur-Pipette</td><td>Corning</td><td>7095S-5C</td><td>Steril, wegwerfbar.</td></tr><tr><td>Penicillin-Streptomycin</td><td>Gibco</td><td>15070063</td><td>10.000 U/mL Penicillin, 10.000 &mu; g/mL Streptomycin, steril&nbsp;</td></tr><tr><td>Pentobarbitalnatrium</td><td>Hikma Pharmaceuticals USA Inc.</td><td>24201-010-20</td><td>Injizierbar, zur Euthanasie (100 mg/kg Körpergewicht, intravenös). ANDA 203619&nbsp;</td></tr><tr><td>Primäre Antikörper (CD73, CD90, CD11b, CD45)</td><td>BD Biosciences</td><td>561254 (CD73), 561970 (CD90), 557321 (CD11b), 555485 (CD45)</td><td>Für organoide Immunfärbung</td></tr><tr><td>Rote Blutkörperchen (RBC) Lysepuffer</td><td>Solarbio</td><td>R1010</td><td>Falls es für nachgelagerte Anwendungen erforderlich ist.</td></tr><tr><td>Gekühlte Zentrifuge</td><td>Eppendorf</td><td>5702R</td><td>Verwendet für Zentrifugationsschritte bei 4 °C.</td></tr><tr><td>Rosiglitazon</td><td>Cayman Chemical</td><td>71740</td><td>&ge; 98 %, PPAR & Gamma; Agonist für adipogene Induktion</td></tr><tr><td>Sharps-Behälter</td><td>Becton Dickinson</td><td>305270</td><td>Stichsicherer Behälter für gebrauchte Klingen und Scheren</td></tr><tr><td>SoniConvert Single Cell Suspension Preparation System</td><td>Docsense</td><td>SC-L1W</td><td>Wird zur mechanischen Dissoziation von Gewebe verwendet.</td></tr><tr><td>Färbepuffer (Flusszytometrie-Färbepuffer)</td><td>eBioscience (Thermo Fisher Scientific)</td><td>00-4222-57</td><td>200 ml, einsatzbereit, enthält FBS und 0,09 % Natriumazid als Konservierungsmittel für Antikörper- und Zellverdünnung, Oberflächenfärbung und Waschschritte in der Durchflusszytometrie;</td></tr><tr><td>Sterile 1,5 mL Eppendorf-Röhre</td><td>Eppendorf</td><td>30121.517</td><td>Safe-Lock Mikrozentrifugenröhre, steril, zum Zerkleinern von Gewebe</td></tr><tr><td>Sterile Kulturschale</td><td>Corning</td><td>430167</td><td>100 mm x 20 mm sterile Kulturschale, zur Gewebeentnahme</td></tr><tr><td>Sterile Zange</td><td>Sklar</td><td>96-1719</td><td>Sterile Daumenzange, gezackt, zur Gewebehandhabung;</td></tr><tr><td>Sterile Mullbinde</td><td>Dukal Corporation</td><td>7060033</td><td>Sterile Mullbinden zum Desinfizieren und Abwischen</td></tr><tr><td>Sterile ophthalmische Schere</td><td>Sklar</td><td>10023-580</td><td>Vannas-ähnliche Federscheren, zum Zerkleinern von Gewebe in 1-2 mm&sup3; Stücke</td></tr><tr><td>Steriler Rasierer</td><td>3M</td><td>9681</td><td>Chirurgischer Rasierer zur Haarentfernung aus dem Operationsbereich</td></tr><tr><td>Steriles Skalpell</td><td>Integra Miltex</td><td>4-415</td><td>Steriles Einwegskalpell zum Schneiden</td></tr><tr><td>Sterile chirurgische Schere</td><td>Sklar</td><td>10022-580</td><td>Merit Sterile Iris Scissors, zur Zerlegung von Blutgefäßen und Bindegewebe;</td></tr><tr><td>T25-Zellkulturkolbe</td><td>Corning</td><td>430639</td><td>Falcon T25 Zellkulturkolben, entlüfteter Deckel, steril</td></tr><tr><td>Triton X-100 (0,1 %)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8787</td><td>Laborqualität für Permeabilisierung &nbsp;</td></tr><tr><td>Trypan Blau</td><td>Gibco, Thermo Fisher Scientific</td><td>15250061</td><td>0,4%-Lösung für die Zellviabilitätszählung.</td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA (0,25 %)</td><td>Gibco</td><td>25200056</td><td>0,25 % Trypsin, 1 mM EDTA, zum Abtrennen von ADSCs</td></tr><tr><td>&Beta;-Glycerophosphat</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>G9422</td><td>Dinatriumsalzpentahydrat für osteogene Induktion</td></tr></tbody></table>

effiziente isolierung von fett-abgeleiteten stammzellen und adipozyten aus schweine-fetthaltigem gewebe

Efficient Isolation of Adipose-derived Stem Cells and Adipocytes from Porcine Adipose Tissue

Effiziente Isolierung von fett-abgeleiteten Stammzellen und Adipozyten aus schweine-fetthaltigem Gewebe

Adipose-derived stem cells (ADSCs) have emerged as ideal seed cells in regenerative medicine due to their abundant sources, minimally invasive harvesting, ...

efficient-isolation-adipose-derived-stem-cells-adipocytes-from

Research

Forschung

JoVE Journal

Biology

Biologie

Dieses Video demonstriert eine Technik zur Isolierung und Kultivierung von fluoreszenzmarkierten Stammzellen (ADSCs) aus Fettzellen (ADSCs) aus dem periaortalen Bogenfettgewebe von Mäusen. Nach der Isolierung werden die NCADSCs nachgewiesen, mittels fluoreszenzaktivierter Zellsortierung sortiert und anschließend auf einer Platte kultiviert, wodurch die Zellproliferation gefördert wird.

Isolierung von aus Fettgewebe gewonnenen Stammzellen aus periaortalem Fettgewebe der Maus

Im Jahr 2001 beschrieben Forscher an der UCLA die Isolierung einer Population von adulten Stammzellen, sogenannte Fettgewebe gewonnene Stammzellen oder ASC, aus dem Fettgewebe. Dieser Artikel beschreibt die Isolierung des ASC aus lipoaspirates mit einem manuellen, enzymatische Verdauung mit Kollagenase-Protokoll.

Manuelle Isolierung von Fettgewebe gewonnene Stammzellen aus menschlichen Lipoaspirates

Dieses Protokoll beschreibt die Isolierung von aus Schweinefettgewebe gewonnenen Stammzellen (pADSC) aus subkutanem Fettgewebe mit Untersuchung der Multipotenz. Die multipotenten pADSC werden verwendet, um Prozesse der Adipozytendifferenzierung abzugrenzen und die Transdifferenzierung in mehrere Zelllinien des mesodermalen Mesenchyms oder weitere Linien des Ektoderms und des Endoderms für regenerative Studien zu untersuchen.

Isolierung und Differenzierung von Fettgewebe gewonnenen Stammzellen aus Porcine Subkutan Fettgewebes

Dieses Protokoll beschreibt den technischen Ansatz zur Isolierung von adipogenen und fibro-inflammatorischen Stromazell-Subpopulationen aus murinen intraabdominalen Depots aus weißem Fettgewebe (WAT) durch fluoreszenzaktivierte Zellsortierung oder immunomagnetische Kügelchentrennung.

Isolierung von adipogenen und fibro-inflammatorischen Stromazell-Subpopulationen aus murinen intraabdominalen Fettdepots

Wir präsentieren eine einfache Methode, um hochlebensfähige Fettvorläuferzellen von mausepididymalen Fettpolstern mit fluoreszenzaktivierter Zellsortierung zu isolieren.

Herstellung von Adipose-Progenitorzellen aus Maus-Epididymal-Adipose-Geweben

Wir stellen eine Methode der Zellinjektion mittels nadelfreier Wasserstrahltechnologie vor, die mit einer Folge von Untersuchungen nach der Entbindung in Bezug auf Zelllebensfähigkeit, Proliferation und Elastizitätsmessungen verbunden ist.

Injektion von aus Schweinefettgewebe gewonnenen Stromazellen mittels Wasserstrahltechnologie

Aus Fettgewebe gewonnene mesenchymale Stammzellen (Ad-MSCs) können eine potenzielle Quelle für MSCs sein, die sich in insulinproduzierende Zellen (IPCs) differenzieren. In diesem Protokoll stellen wir detaillierte Schritte zur Isolierung und Charakterisierung von epididymalen Ad-MSCs von Ratten bereit, gefolgt von einem einfachen, kurzen Protokoll zur Generierung von IPCs aus denselben Ratten-Ad-MSCs.

Isolierung von mesenchymalen Stammzellen des Fettgewebes von Ratten zur Differenzierung in insulinproduzierende Zellen

Dieses Protokoll beschreibt eine Methodik zur Isolierung und Identifizierung von mesenchymalen Stammzellen (MSCs) aus Fettgewebe aus Sprague-Dawley-Ratten.

Isolierung und Identifizierung von mesenchymalen Stammzellen aus dem Fettgewebe von Sprague-Dawley-Ratten

Dieses Protokoll beschreibt die halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion (SVF) aus murinem Fettgewebe, um Präadipozyten zu erhalten und eine Adipozytendifferenzierung in vitro zu erreichen. Die Verwendung eines Gewebedissoziators für den Kollagenaseverdau reduziert die experimentelle Variation und erhöht die Reproduzierbarkeit.

Halbautomatische Isolierung der stromalen vaskulären Fraktion aus murinem weißem Fettgewebe mit Hilfe eines Gewebedissoziators

Wir haben die Plazenta als wichtiger blutbildenden Organ während der Entwicklung identifiziert. Wir fanden, dass hämatopoetische Stammzellen (HSZ) sind beide generiert und erweitert in der Plazenta in einzigartige Mikroumgebung Nischen. Hier beschreiben wir experimentelle Techniken zur Isolierung und Visualisierung von HSZ in der Maus Plazenta erforderlich.

Isolierung und Analyse von hämatopoetischen Stammzellen aus der Plazenta

Erfahren Sie eine schnelle Methode zur Isolierung fett-abgeleiteter Stammzellen aus Schweinegewebe mittels enzymatischer Verdauung und mechanischer Wellen-Dissociation. Dieses Protokoll reduziert die Verarbeitungszeit erheblich und erhöht die Zellviabilität auf 80–95 %.

Effiziente Isolierung von fett-abgeleiteten Stammzellen und Adipozyten aus schweine-fetthaltigem Gewebe

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