Un modelo de Disturbed inducida por el flujo de Aterosclerosis en la arteria carótida del ratón por la ligadura parcial y un método sencillo para el aislamiento de ARN del endotelio carótida

Resumen

Esto describe una cirugía de ligadura de la carótida parcial, lo que provoca trastornos condiciones de flujo y posterior desarrollo de la aterosclerosis (en dos semanas) con intraplaca neovascularización (en cuatro semanas) en el ratón de la arteria carótida común. También describe un nuevo método de aislamiento de ARN de la carótida íntima, proporcionando ARN de alta pureza endoteliales.

Resumen

A pesar de la estrecha asociación conocida, evidencia la vinculación directa alteración del flujo de la aterogénesis ha estado ausente. Recientemente, hemos utilizado una versión modificada de la carótida métodos de ligadura parcial [1,2] para demostrar que forma aguda induce condiciones de flujo bajo y oscilante, dos características fundamentales de la alteración del flujo, en el ratón de la arteria carótida común. El uso de este modelo, hemos proporcionado evidencia directa de que el flujo alterado de hecho conduce a un desarrollo rápido y robusto aterosclerosis en ratones apolipoproteína E nocaut [3]. También hemos desarrollado un método de preparación de ARN endoteliales de alta pureza a partir de la íntima carotídea ratón [3]. El uso de este modelo de ratón y el método, se encontró que la ligadura parcial provoca la disfunción endotelial en una semana, seguido por la formación de ateroma robusto y rápido de dos semanas en un modelo de ratón hiperlipidémicos junto con las características de la formación de lesiones complejas, como la neovascularización intraplaca por cuatro semanas. Esta rápida

Protocolo

1. La ligadura parcial de la arteria carótida izquierda

1. Los ratones son utilizados en ~ 8 semanas de edad. El peso de los ratones se recomienda tener al menos 18 gramos.
2. Esterilizar los instrumentos durante 30 segundos en el esterilizador de instrumentos de cuentas y deje que se enfríe
3. Inducir la anestesia con ketamina (80mg/kg) y xilazina (10mg/kg) anestesia intraperitoneal (ip) o una alternativa aprobada por IACUC. Para la inyección ip, inyectar ratón en el cuadrante inferior izquierda del abdomen.
4. Coloque el ratón en una cámara de calentamiento hasta que esté completamente anestesiado. Verificar la profundidad de la anestes....

Discusión

En este procedimiento, la identificación adecuada de todas las ramas de la carótida común, incluyendo la carótida externa, la carótida interna, arteria occipital y la arteria tiroidea superior es esencial. También es importante verificar el patrón de flujo con ultrasonido como se ha demostrado. En nuestras manos experimentadas, nuestra tasa de éxito de las cirugías de ligadura parcial basado en los estudios de ultrasonido de más de 500 ratones es superior al 90%. De la carótida íntima preparaciones de ARN, es importante.......

Materiales

Lista de materiales utilizados en este artículo

Nombre	Empresa	Número de catálogo	Comentarios
Solución salina normal (cloruro de sodio al 0,9 %)	Baxter Internationl Inc.	2B1323
Jeringa de insulina (jeringa de 3/10 ml, 29 g)	Tyco Healthcare, Covidien	8881600145
HBSS	Cellgro	21-023
Kit miRNeasy mini (incluyendo QIAzol)	Qiagen	217004
Sistema de microimagen de alta resolución Vevo 770	VisualSonics, inc.	a. Sistema Visualsonics 770 b. Etapa de imagen c. Sistema de riel integrado Vevo d. Cabezal de escaneo RMV para ratones	o sistema similar
Sutura de seda 6-0, estéril	Covidien	s-1172 c2
Tijeras pequeñas	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5675	o similar
Pinzas de disección	Roboz Surgical Instruments Co.	RS-5005	o similar
Tissue Mend II	Webster Veterinary	07-856-7946