Vejiga ratón inyección de pared es un enfoque útil para el estudio de células de vejiga ortotópicamente madre y la biología del cáncer. Este método de microcirugía delicada se puede dominar con una técnica cuidadosa y práctica.
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Artículo de método
Vejiga ratón pared de inyección
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Resumen
Resumen
Vejiga ratón inyección de pared es una técnica útil para estudiar los fenómenos ortotópicamente vejiga, incluyendo células madre del músculo liso, y la biología del cáncer. Antes de comenzar las inyecciones, el área quirúrgica se debe limpiar con agua y jabón y solución antiséptica. Equipo quirúrgico debe ser esterilizado antes de su uso y entre cada animal. Cada ratón se coloca debajo de la anestesia con isoflurano inhalado (2-5% para la inducción, el 1-3% para el mantenimiento) y su vejiga expuesta al hacer una incisión abdominal con unas tijeras. Si la vejiga está llena, es parcialmente descomprimido suave apretar con dos dedos. La suspensión de células de interés es intramural se inyecta en la pared de la cúpula de la vejiga usando una aguja de calibre 29 o 30 cc y una jeringa o menor. La herida se cerró con clips de la herida y el ratón les permitió recuperarse en un cojín de calentamiento. Inyección de pared de la vejiga es una técnica de microcirugía delicada que se puede dominar con la práctica.
Protocolo
1. Vejiga ratón pared de inyección
Elección de la cepa del ratón, la edad y el sexo está determinado por las necesidades experimentales. Nosotros usamos ratones de entre 8 y 12 semanas de edad, ya que esta es una ventana de madurez inmunológica antes de la senescencia. Como pauta general, los ratones deben llegar por lo menos una semana antes de la manipulación experimental con el fin de evitar la tensión inducida por factores de confusión.
- Limpie la superficie de la mesa quirúrgica con agua y jabón.
- Limpie la superficie de la mesa quirúrgica con Golpes Cide o toallitas antisépticas.
- Autoclave de limpiar el ....
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Discusión
Vejiga ratón inyección de pared permite la implantación de células específicas en áreas definidas de la pared de la vejiga. Esta técnica tiene amplias aplicaciones para los modelos de ratón de cáncer de vejiga, el músculo liso, y la biología de células madre. Por definición, la vejiga ratón inyección de pared facilita la introducción de cáncer de vejiga o de células madre en un lugar ortotópico de modo que su crecimiento y la diferenciación puede ser estudiado en un contexto anatómico fisiológicamente relevantes. De hec.......
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Divulgaciones
No hay conflictos de interés declarado.
Agradecimientos
Agradecemos el apoyo de una subvención piloto del Fondo de Investigación de Stanford Pediátrica y K08DK087895 01-desde el NIDDK.
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Materiales
| Nombre | Empresa | Número de catálogo | Comentarios |
|---|---|---|---|
| Nombre del reactivo | Empresa | Número de catálogo | |
| Isoflurano (Aerrane) | Baxter | NDC 10019-773-60 | |
| 29 ó 30 agujas de calibre | Hamilton | 7803-06 o 7803-07 | |
| 100 microlitros jeringa | Hamilton | 7656-01 |
Referencias
- Dinney, C. P., Fishbeck, R., Singh, R. K., Eve, B., Pathak, S., Brown, N., Xie, B., Fan, D., Bucana, C., Fidler, I. J., Killion, J. J. Isolation and Characterization of Metastatic Variants from Human Transitional Cell Carcinoma Passaged by Orthotopic Implantation in Athymic Nude Mice. The Journal of Urology. 154, 1532-1538 (1995).
- Singh, A. V., Franke, A. A., Blackburn, G. ....
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Reimpresiones y permisos
