Introduction
Транскрипционный фактор Nurr1 и его гомологов (Nur77 и Nor1) относятся к ядерной рецепторов подсемейства 4А (NR4A) 1. Они также сироты рецепторы, потому что их эндогенные лиганды пока не определены. Nurr1 впервые клонировали в 1992 году, и, хотя, как известно, выражается в мозге 2, его существенную роль для развития и поддержания среднего мозга нейронов допамина было выявлено в исследованиях нокаутом мыши 3. Кроме того, его важная роль для поддержания среднего мозга нейронов допамина недавно была продемонстрирована в исследовании условного нокаута 4. Из-за этих исследований, показывающих, элегантные решающую роль Nurr1 для среднего мозга нейронов допамина, многие последующие исследования в основном сосредоточены на среднем мозге нейроны допамина и допамина нейродегенеративных расстройств, болезни Паркинсона (БП) 5.
Следует отметить, что Nurr1 выражается не только в нейронах среднего мозга допамина (МДА), но также и в диучастки мозга стих 2, предполагая, что он может иметь функциональные роли во многих областях, не-DA, который сильно поддерживается более недавних исследований, показывающих, что Nurr1 играет важную роль в различных функций мозга. Для примера, было показано, что память вызывающие действия, такие как обучение, или другие гиппокамп-зависимые задачи приводит к повышающей регуляции экспрессии Nurr1 в гиппокампе 6,7. Кроме того, сбить из Nurr1 выражения в гиппокампе было достаточно, чтобы нарушить долгосрочную память и / или синаптической пластичности 8-11, сильно предполагая, что Nurr1 играет различные роли во многих областях головного мозга. Таким образом, для дальнейшего понимания типов клеток специфический и внутриклеточную экспрессию Nurr1, желательно использовать Nurr1-специфические антитела, которые не обладают какой-либо перекрестной реактивности с его гомологи или Nur77 Nor1. Эта статья описывает протокол предварительного адсорбции генерировать Nurr1-специфические антитела и представить дополнительные данные, показывающие, свою специфику.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Protocol
Примечание: состав всех решений, приведенных ниже, можно найти в материалах / Оборудование таблице.
1. Белок Колонка антител Очистка
- Равновесие белка в колонку отжима и все необходимые буферы до комнатной температуры в течение 15 мин до начала процедуры.
- Развести иммунной сыворотки 1: 1 с белком IgG связывающем буфере. (5 мл сыворотки рекомендуется).
- Аккуратно нажмите белка в колонку спин на скамейке верхней выбить любую смолу, которые могут быть поданы в крышке. Снимите верхнюю крышку, аккуратно откусив нижнюю закрытие. Поместите колонку в 15 мл пробирку и позволяют решение для хранения данных, чтобы слить.
- Добавьте 5 мл белка в связывающем буфере IgG и позволяют решение процедить.
- Применение разбавленного иммунную сыворотку на колонку и собирают проточные. Для получения наилучших результатов, добавьте объем образца, который содержит концентрацию антител меньше, чем 80% антител привязки наращиванием потенциалов колонныу.
- Промыть колонку с 15 мл белка в связывающем буфере IgG или пока поглощение при 280 нм не превышает 0,1.
- Добавить 100 мкл буфера нейтрализации пяти меченых сбора труб.
- Добавляют 5 мл IgG элюции буфером с белком колонку и собирают 1 мл фракций в каждую из пробирок, содержащих по 100 мкл нейтрализующего буфера.
- Измеряют поглощение каждой фракции при 280 нм и фракции бассейн с оптической плотности более 0,5. Держите объединенных фракций на льду до готовности в диализе.
- Регенерация колонки добавлением 8 мл IgG элюции буфером и чтобы раствор пропускали через колонку.
- Промыть колонку с раствором связывающего белка IgG до элюент рН возвращается к 7,4.
- Хранить столбец путем добавления 5 мл раствора для хранения (0,02% азида натрия в PBS). Когда примерно 3 мл остаются в колонку, крышки нижней и закрепите верхнюю крышку. Хранить колонку при 4 ° С.
- Определите длину Oе диализа необходимо в соответствии с инструкциями изготовителя. Использование 16 мм трубки диаметром плоским использовать 5,47 см длины трубки на мл раствора для диализу. Отрежьте трубы и промойте PBS рН 7,4 в течение 15 мин 30.
- Сложите и клип один конец трубки для диализа, передача объединенных IgG, содержащий фракции в трубке для диализа, уравновешенную PBS, рН 7,4 и закрыть другой конец.
- Диализировать при комнатной температуре против 200 объемов PBS, рН 7,4 в течение 2 часов.
- Изменение буфера для диализа (свежий PBS рН 7,4) и диализ еще в течение 2 ч при комнатной температуре.
- Изменение буфера для диализа (свежий PBS рН 7,4) и диализ в течение ночи при 4 ° С.
- Держите диализированную раствор антител при 4 ° С до готовности приступить к дальнейшим стадиям очистки.
- Оценка концентрации антител, используя свою оптическую плотность при 280 нм и молярного коэффициента поглощения антител при 280 нм 210,000 М -1 см -1 12.
2. Взаимодействие LBD белков AminoLink Соединительная Ресин
- Подготовьте две колонки, одна для Nor1 и другой для Nur77. Выполните ту же протокол для обоих белков.
- Разморозить белок с возможностью подключения к смоле на льду. Определить концентрацию белка, используя его молярный коэффициент экстинкции и его поглощение при 280 нм 12.
- Кроме того, использовать определения белка анализа, такие как анализа бицинхониновой кислоты 13. Если белок, растворяют в амин-содержащий буфер диализа или буферного обмена против буфера для связывания. Если белок не в подходящем буфере (нет свободных аминов) разбавить его 4 раза в буфере дл св зывани.
- Использование 2 мл смолы в течение 2 мг белка. Все шаги, которые следуют за 2 мл смолы в колонку с 10 мл. До 10 мг белка могут быть соединены в 1 мл смолы (2 мл 1: 1) суспензии.
- Подготовка колонки 10 мл, нажав фритты на дно и работает PBS, рН 7,4 через него. Кап тон снизу колонны и добавьте 2 мл буфера для связывания.
- Добавить нужного объема суспензии (4 мл с получением 2 мл смолы) на колонке, снять нижнюю крышку и пусть утечку столбца. Промойте колонку с в общей сложности 6 мл (объем 3 смолы кровать) сцепления буфера и позволяют колонки для слива. После буфера Муфта стечет, заменить нижнюю крышку.
- Добавить 2-4 мл белка, суспендированного в буфере дл св зывани в колонке (держать аликвоту раствора белка, чтобы оценить эффективность связывания сравнением концентрации белка в элюате на этапе 2.11 либо с помощью оптической плотности при 280 нм или бицинхониновой анализа) , Крышка и смешать конец над концом иметь однородный раствор.
- Взвесьте пустую 1,8 мл микроцентрифужных трубку и перейти к вытяжным шкафом. Тщательно передачи NaCNBH 3 (около 0,05 г) в предварительно взвешенную пробирку. Закройте трубку и взвесить пробирку NaCNBH 3. Не открывайте трубку вне капотом.
- На основании весаNaCNBH 3 переносили в пробирки, сделать 5 М раствора добавлением 1 М NaOH. Молекулярная масса NaCNBH 3, 62.84 г, следовательно, 0,05 г равна (0,05 / 62,84 = 7,96 х 10 -4 моль) 7,96 х 10 -4 моль. Чтобы сделать 5 м раствору добавляют 7,96 (10 -4 / 5) 159 мкл 1 М NaOH.
- Измерьте общий объем реакционной берет объем смолы во внимание. Добавьте 10 мкл 5 М NaCNBH 3 на мл реакции.
- Например: реакционного объема 4 мл добавить 40 мкл 5 М NaCNBH 3. Для 1 мл смолы и 3 мл добавленного белка, общий объем 4 мл.
- Крышка колонки и смешать конец над концом. Безопасный столбец на трубке ротатора и пусть реакцию продолжают в течение ночи при 4 ° С.
- Утром довести колонну химической капотом и осторожно снимите крышку, как некоторое количество газа может быть сформирована. Слить колонку в чистую пробирку и сохранить элюата для измерения белка CONцентрация помощью оптической плотности при 280 нм методом 12 или анализа бицинхониновой кислоты и сравнить его с концентрацией исходного белка в шаге 2.6.
- Промыть смолу с 4 мл св зующего буфера и пусть утечку столбца.
3. Блокирование Оставшееся Сайты
- Промыть смолу с 4 мл буфера закалки. Слейте и замените нижний колпачок. Добавить 2 мл буфера закалки и приостановить смолы.
- Оценка Общий объем реакционной смеси путем измерения объема смолы и объем буфера закалки затем добавить 10 мкл 5 М NaCNBH 3 на мл реакционного объема.
- Тщательно перемешать при комнатной температуре в течение 30 мин в течение конечного конец. Через 30 мин, довести колонну в вытяжном шкафу. Осторожно снимите верхнюю, а затем снимите нижнюю крышку и пусть утечки столбца в сточных трубки.
- Промывают колонку 5 объемов смолы промывочным раствором. Монитор промывок на наличие остаточных белков путем измерения абсо элюата вrbance при 280 нм. Несвязанных белков вымываются высокой концентрации соли.
- Промыть смолу с 6 мл дегазированной PBS, рН 7,4, содержащем 0,02% азида натрия. Держите колонку при 4 ° С до тех пор, пока это необходимо.
4. Очистка Nurr1 специфических антител
- Промыть колонку, соединенную Nur77 LBD с 10 мл PBS, рН 7,4, и пусть в канализацию столбца. Крышка нижней части колонны и поместите осушенных Nur77 LBD сочетании колонку в новом 15 мл пробирку.
- Добавляют 5 мл очищенного белка антител Nurr1, крышка колонны и место на ротатор при 4 ° С в течение 1 часа. Снимите верхние и нижние крышки и собирать поток через. Отложите на льду до готовности добавить в сочетании колонке Nor1 LBD.
- Промыть колонку, соединенную Nor1 LBD с 10 мл PBS, рН 7,4, и пусть в канализацию столбца. Крышка нижней части колонны и поместите Nor1 LBD сочетании столбец в 15 мл пробирку.
- Добавить поток через от переворота Nur77 LBDпривело колонки, крышка колонны и место на ротатор при 4 ° С в течение 1 часа. Снимите верхние и нижние крышки и собирать поток через.
- Измерение концентрации антител путем измерения оптической плотности при 280 нм.
5. ИФА на основе анализа очищенного Anti-Nurr1 антитела
- Добавить 100 мкл белка (2,5 мкг / мл) в лунки 96-луночного планшета. Если тестирование 3 различных белков, добавьте 100 мкл белка 1 до скважин А1 до H4, 100 мкл белка 2, в лунки A5 в H8 и 100 мкл белка 3 Уэллсу A9 к Н12. Закройте планшет и инкубируют в течение ночи при 4 ° С.
- Промыть лунок два раза по 300 мкл на лунку PBS, рН 7,4 и добавляют 300 мкл ELISA блокирующем буфере с целыми скважин, покрытых антигеном и инкубируют 2 часа при комнатной температуре.
- В то время как пластина преграждает подготовить целевое исходное разведение очищенного анти-Nurr1 антитела (от 10 до 100 мкг / мл) в блокирующем буфере ELISA.
- Через 2 ч блокировки, замените блок буфера ELISA с 100 мкл свежей ELISA блока буфера во все лунки.
- Добавить 100 мкл разбавленного очищенной анти-Nurr1 антитела всех скважин в ряду А. Серийно разбавить антитела путем передачи 100 мкл раствора из ряда А в лунки в строке В последующей передачи 100 мкл раствора из ряда В грести C продолжая грести до G. После смешивания растворов в скважинах в строке G отбросить лишние 100 мкл. Уэллс в строке H получить только начальные 100 мкл блокирующего буфера. Инкубируют при комнатной температуре в течение 1 часа.
- Промыть пластины три (3) раза по 300 мкл на лунку 0,05% Tween 20 в PBS, рН 7,4 и пятно на пластину, чтобы удалить избыток промывочного буфера.
- Добавить 100 мкл пероксидазой хрена (HRP), конъюгированного козьего анти-кроличьего IgG, разбавленного в буфере блока ELISA (1: 8000 разведение; типичный диапазон составляет от 1: 5000 до 1: 25000). Инкубируют при комнатной температуре в течение 1 часа.
- Промыть пластины тысРЗЭ (3) раза, как описано в 5.6. Тщательно промойте все лунки, заполняя их с 300 мкл деионизированной воды. Промокните избыток воды опрокидыванием планшета на поглощающие бумаги.
- Добавить 100 мкл 3, 3 ', 5, 5' тетраметилбензидином (нагревают до комнатной температуры) во все лунки и инкубируют 15 до 30 мин в темноте при комнатной температуре.
- Остановить реакцию, добавив 50 мкл 2 H 2 SO 4.
- Измерить оптическую плотность при 450 нм вычитание фона при 650 нм.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Representative Results
Сравнение белка колонку очищают Nurr1-специфические антитела с белком A очищенные антитела анти-Nurr1 затем прохождения через Nur77 ДТЛ и Nor1 LBD колонн, показанные на рисунке 1. Как видно, белок очищали Nurr1 антитела выставлены сильной связи чтобы Nurr1 ДТЛ. Тем не менее, он также показал значительное связывание с LBD Nur77 и Nor1 LBD. При белок А-очищенные антитела Nurr1 дополнительно очищали с Nur77 LBD и Nor1 LBD, конечном аффинно-очищенные антитела Nurr1 выставлены специфическое связывание с LBD Nurr1 с обнаружить связывание с LBD Nur77 или Nor1 LBD, демонстрируя, что его перекрестная реактивность с Nur77 и Nor1 было полностью удален.
Эта специфика была продемонстрирована Вестерн-блот анализа экстрактов из клеток СНО, трансфицированных экспрессии векторов, несущих полную длину Nurr1, Nor1 или Nur77 слит с Мус пометки белка (рисунок 2). Как и ожидалось, анти-Мус Антибodies показал, что было выражено каждый белок полной длины на его ожидаемой молекулярной массы. В соответствии с результатами ELISA, белка очищали Nurr1 специфическое антитело решительно обнаружена полнометражный Nurr1 но также обнаружены Nor1 и Nur77 хотя и менее эффективно. В противоположность этому, полностью очищенный Nurr1 антитела не демонстрируют заметного перекрестную реактивность с Nor1 и Nur77 методом ИФА или Вестерн-блот анализа.
И, наконец, полностью очищенный Nurr1 антитела были использованы для иммуногистохимического анализа MDA нейронов. Это хорошо документированы, что Nurr1, но не его близкие гомологи Nor1 и Nur77, является заметно выражена в грызунов и человека нейронов MDA на обоих уровнях мРНК и белка 14,15. Использование полностью очищенной Nurr1 антитела подтвердил, что Nurr1 почти исключительно выразил в ядре Мда нейронов в области черной субстанции (рис 3).
Рисунок 1: Сравнение ИФА из перекрестных реакций анти-Nurr1 антител до и после очистки пропусканием через Nur77 и Nor1 LBDs сочетании столбцов белка очищенного антитела анти-Nurr1 (0,156 мкг / мл) (а) или белок очищенного последующим. хроматографии на Nor1 и Nur77 LBD-соединенных колонок анти-антитела Nurr1 (0,156 мкг / мл) (б) добавляли в лунки 96-луночного планшета, покрытых 100 мкл 2,5 мкг / мл либо Nurr1 LBD, Nor1 LBD или Nur77 LBD. ELISA проводили, как описано в методическом разделе.
Рисунок 2: специфической детекции полноразмерного Nurr1 выражены в клетках СНО, используя полностью очищенной Nurr1-специфическое антитело полной длины Nurr1, Nor1 и Nur77 белки были выражены как Myc помечены.слитые белки в клетках СНО и обнаруженные Myc специфических антител (а), Protein A-очищенные антитела Nurr1 (б) и полностью очищенной Nurr1 антитела (С). Анти-актиновые антитела, используемые для управления загрузкой белок (D). Каждый Мус-меченый ДНК полной длины (молекулярная масса 65, 66 и 69 кДа для Nurr1, Nur77, Nor1, соответственно), временно трансфицировали в клетки СНО и такое же количество клеточных экстрактов были загружены на каждой дорожке. Дорожка 1: отрицательный контроль, состоящий из клеток СНО экстрактов трансфицированных пустым вектором; дорожка 2: Мус-Nurr1; полоса 3: Мус-Nur77; дорожка 4: Мус-Nor1.
Рисунок 3:. Полностью очищенного Nurr1-специфическое антитело специфически обнаруживает тирозин-гидроксилазы-положительных нейронов допамина мозга нейроны допамина в черной субстанции являются позитивными для Nurr1, как еxamined иммуногистохимии с использованием полностью очищенные Nurr1-специфические антитела. Примечательно, Nurr1 был локализован в ядре Мда нейронов. TH (тирозингидроксилазы). Масштаб бар = 100 мкм. Бар Шкала в белом слияния коробки 10 мкм. Пожалуйста, нажмите здесь, чтобы посмотреть большую версию этой фигуры.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Discussion
Успех этого протокола зависит от наличия чистых белков для характеризации антител, против конкретного члена семейства белков интереса. Там нет необходимости, чтобы очистить антител с использованием белка A / G, пока не будет четко установлено, что существуют значительные перекрестных реакций по ELISA и вестерн-блоттинга.
Как указано в тексте, важно, чтобы избежать приостановления белок (белки), чтобы быть сшиты в колонну в качестве амина, содержащего буфер, такой как Трис или глицин. Кроме оптимальная концентрация белка используется для сшивания должна быть определена эмпирически. Слишком много белка на колонке может привести к стерических затруднений, а слишком мало бы снизить эффективность адсорбции. Таким образом, это хорошая идея, чтобы проверить концентрации белка в пределах от 2 до 10 мг / мл, и оценить качество полученных антител.
Несколько факторов необходимо учитывать при йэто метод не может дать весьма специфические антитела. К ним относятся: эффективность сшивки, потеря иммунореактивного области, и сшитый денатурации белка. Как указано в протоколе, мониторинг сшивающих эффективности позволяет определить, что слишком много или слишком мало белка иммобилизации на колонке. Если сшивающий использованием реактивных амины подозревают в уничтожении иммунореактивный домена (ов), иммобилизацию через карбоксильную группу или через углеводов должны быть рассмотрены.
Важно контролировать эффективность процедуры последовательно дают весьма специфические антитела. Для целей регенерации, колонны должны быть лишены кросс-реактивных антител, связанных с их использованием жестких условий (высокая или низкая рН). Это приводит к более высокий процент сшитых белков, которые будут эффективно денатурируют, снижения производительности столбца.
Добавление блокирующих агентов в ELISA и Westeр-н блоттинга обычно используется с справедливого уровня успеха. Тем не менее, подход, описанный в этом видео увеличивает вероятность успеха и снижает потребность в поддержании больших объемов кросс-реактивных белков на руках. Как реагенты и методы для иммобилизации белков хроматографии массовой информации продолжают совершенствоваться, этот подход будет способствовать выявлению оборотных трансформированных клеток специфических антител.
Этот подход ограничивается наличием чистых белков. Еще одно ограничение этого протокола является зависимость от правильного сворачивания при использовании белковых доменов. Если белковые домены не складывают, как и во всем белка, стратегия предварительного адсорбции может не дают антитела, которые могут легко определить элемент интерес белка при анализе клеток или тканевых экстрактов.
Многие белки интересов принадлежат (суб) семьи белков с гомологии последовательностей аминокислот кислоты высокой. Функциональная характеристика и IDENнения распределения белков часто зависит от наличия специфических антител против каждого члена семьи. Гомологии кислоты высокой аминокислоты между членами белка в той же семье способствуют трудности в создании высоко специфические антитела. Используя эти кросс-реактивные антитела часто приводят к противоречивым результатам.
Одним из таких примеров является сиротой ядерных рецепторов Nurr1, что принадлежит к NR4A подсемейства ядерных рецепторов, вместе с Nur77 и Nor1. Так как эти три фактора имеют высокую степень гомологии аминокислотной, антитела против каждого фактора показывают значительные поперечные реакционной способностью, которые препятствуют точный анализ каждого фактора.
Использование этих пользователей NR4A в качестве примера, можно было генерировать высоко специфические антитела Nurr1 свободным реакционной к Nor1 или Nur77. Поскольку LBDs разделить меньше чем гомологию связывания ДНК областей, был экспрессирован и очищен LBD каждого белка, а затем используется для вводаmprove специфичность антител Nurr1. Первоначально антитела против LBD Nurr1 выставляли скромные, но значительные уровни перекрестной реактивности с другими белками, а рассматривается ELISA и Вестерн-блот анализа. Однако, когда белок А-очищенные антитела Nurr1 дополнительно очищали путем предварительной адсорбции с перекрестно-реактивных LBD областей Nur77 и Nor1, в результате чего Nurr1 антитела не показывают какой-либо перекрестной реактивности, а исследовали с помощью Вестерн-блоттинга и ELISA анализы заметно обнаруженного Nurr1 экспрессирующие DA нейронов в среднем мозге областях. Вестерн-блот данных и ИФА анализов хорошо согласуются друг с другом, указывая, что эти анализы могут быть взаимодополняющими и поддерживать друг друга.
Взятые вместе, это антитело стратегия очистки будет чрезвычайно полезен в создании специфического антитела путем устранения перекрестную реактивность к гомологичных белков членов.
Subscription Required. Please recommend JoVE to your librarian.
Disclosures
Авторы не имеют ничего раскрывать.
Materials
| Name | Company | Catalog Number | Comments |
| Purified Ligand Binding Domain from Nurr1, Nor 1 and Nur77 | Column Storage solution | ||
| AminoLink Coupling Resin and Kit | Thermo Scientific | 44890 | |
| Protein A spin column | Thermo Scientific | 89978 | |
| Dulbecco's Phosphate-Buffered Saline | Corning | 21-031-CV | |
| 96 well Flate-bottom plates, High Flange, 330 μl | Thermo Scientific | 3455 | |
| 10% Normal Goat Serum | KPL | 50-675-69 | |
| Milk Diluent/ Blocking Concentrate | KPL | 50-82-01 | |
| IgG Elution Buffer | Thermo Scientific | 21004 | |
| Micro BCA Protein Assay Kit | Thermo Scientific | 23235 | |
| Horse Radish Peroxidase conjugated Goat anti-Rabbit IgG (H+L) | Thermo Scientific | 31460 | |
| Ni-NTA Resin | Thermo Scientific | 88221 | |
| 3, 3', 5, 5' Tetramethylbenzydine | Thermo Scientific | 34028 | |
| 2N H2SO4 | Macron Fine Chemicals | H381 05 | |
| Protein A IgG Binding Buffer | Thermo Scientific | 21001 | |
| IgG Elution Buffer | Thermo Scientific | 21004 | |
| Column Storage solution | Phosphate Buffered Saline containing 0.02% sodium azide | ||
| Spectra/Por 7 pre-treated dialysis tubing | Spectrum Labs | 132128 | |
| 10 ml Disposable columns | Thermo Scientific | 29924 | |
| AminoLink Coupling Buffer | 0.1M sodium phosphate, 0.05% NaN3, pH 7.0 | ||
| Quenching buffer | 1M Tris. HCI, 0.05% NaN3, pH 7.4 |
||
| Wash Solution | 1M NaCl, 0.05% NaN3 | ||
| ELISA Blocking buffer | 1% Normal Horse serum (NHS), 1% Normal Goat Serum (NGS) in 1X KPL milk diluent | ||
| Storage Solution | PBS pH 7.4 containing 0.02% sodium azide | ||
| Micropipettes: 10 μl; 20 μl; 200 μl; 1000 μl |
References
- Hawk, J. D., Abel, T. The role of NR4A transcription factors in memory formation. Brain Res. Bull. 85 (1-2), 21-29 (2011).
- Law, S. W., Conneely, O. M., DeMayo, F. J., O'Malley, B. W. Identification of a new brain-specific transcription factor, NURR1. Mol. Endocrinol. 6 (12), 2129-2135 (1992).
- Zetterström, R. H., et al. Dopamine neuron agenesis in Nurr1-deficient mice. Science. 276 (5310), 248-250 (1997).
- Kadkhodaei, B., et al. Nurr1 is required for maintenance of maturing and adult midbrain dopamine neurons. J. Neurosci. 29 (50), 15923-15932 (2009).
- Decressac, M., Volakakis, N., Björklund, A., Perlmann, T. NURR1 in Parkinson disease--from pathogenesis to therapeutic potential. Nat Rev Neurol. 9 (11), 629-636 (2013).
- Peña de Ortiz, S. Hippocampal Expression of the Orphan Nuclear Receptor Gene hzf-3/nurr1 during Spatial Discrimination Learning. Neurobiol Learn Mem. 74 (2), 161-175 (2000).
- Vecsey, C. G., et al. Histone deacetylase inhibitors enhance memory and synaptic plasticity via CREB:CBP-dependent transcriptional activation. J. Neurosci. 27 (23), 6128-6140 (2007).
- Colón-Cesario, W. I., et al. Knockdown of Nurr1 in the rat hippocampus: implications to spatial discrimination learning and memory. Learn Mem. 13 (6), 734-744 (2006).
- McQuown, S. C., et al. HDAC3 is a critical negative regulator of long-term memory formation. J. Neurosci. 31 (2), 764-774 (2011).
- Hawk, J. D., et al. NR4A nuclear receptors support memory enhancement by histone deacetylase inhibitors. J. Clin. Invest. 122 (10), 3593-3602 (2012).
- Bridi, M. S., Abel, T. The NR4A orphan nuclear receptors mediate transcription-dependent hippocampal synaptic plasticity. Neurobiol Learn Mem. 105, 151-158 (2013).
- Gill, S. C., von Hippel, P. H. Calculation of protein extinction coefficients from amino acid sequence data. Anal. Biochem. 182 (2), 319-326 (1989).
- Smith, P. K., et al.
- Zetterström, R. H., Williams, R., Perlmann, T., Olson, L. Cellular expression of the immediate early transcription factors Nurr1 and NGFI-B suggests a gene regulatory role in several brain regions including the nigrostriatal dopamine system. Brain Res. Mol. Brain Res. 41 (1-2), 111-120 (1996).
- Xiao, Q., Castillo, S. O., Nikodem, V. M. Distribution of messenger RNAs for the orphan nuclear receptors Nurr1 and Nur77 (NGFI-B) in adult rat brain using in situ hybridization. Neuroscience. 75 (1), 221-230 (1996).
