Constricción de la aorta transversa en ratones

Este procedimiento comienza anestesiando a un ratón, preparándolo para la cirugía aséptica y colocándolo en posición supina sobre una almohadilla térmica. La intubación endotraqueal se realiza mediante un tubo de PE 90, que luego se conecta a un ventilador para roedores. A continuación, se realiza una toracotomía parcial hasta la segunda costilla y se retrae el esternón.

Se identifica la aorta transversa y posteriormente se liga entre las arterias innominada y la carótida izquierda. La caja torácica está cerrada, seguida de la piel con un patrón de sutura continuo. Finalmente, se retira el tubo endotraqueal y se permite que el ratón se recupere.

Hola, soy Angela Dal Meda del laboratorio del Dr. Zander Wars en el Departamento de Fisiología Molecular y Biofísica del Baylor College of Medicine. Hoy te mostraremos el procedimiento para la constricción aórtica transversa en ratones. Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para estudiar los mecanismos subyacentes a la hipertrofia cardíaca y el desarrollo de la insuficiencia cardíaca.

Así que comencemos. Antes de comenzar la constricción aórtica transversa o la cirugía fiscal, desinfecte el campo quirúrgico con alcohol isopropílico al 75%. Encienda la almohadilla térmica y ajústela a la temperatura adecuada.

El sistema que recomendamos es una bomba de agua circulante para jugadores conectada a una almohadilla de terapia de calor que se mantiene a 37 más o menos un grado centígrado. Esterilice las herramientas quirúrgicas en un esterilizador de perlas calientes antes de la cirugía. Para el procedimiento quirúrgico fiscal, se necesitan los siguientes instrumentos quirúrgicos.

Un par de tijeras romas, dos pinzas curvas gruesas para encontrar pinzas en ángulo de 45 grados, un par de tijeras de resorte en ángulo, un retractor de pecho y un soporte para agujas. Los aplicadores de algodón también deben estar a mano en caso de sangrado. Con el campo operatorio preparado, podemos proceder a la intubación del ratón.

En preparación para la intubación, el ratón es anestesiado en una cámara de inducción y se utilizan cortapelos para afeitar el pelaje desde la línea del cuello hasta la mitad del pecho. Coloque el mouse en posición supina encima de la almohadilla térmica. Es importante mantener una temperatura corporal normal durante la cirugía para evitar una disminución rápida de la frecuencia cardíaca y una posible muerte súbita.

Aplique presión sobre el lecho ungueal del ratón para confirmar que el ratón está completamente anestesiado. Coloque una banda elástica sobre los dientes frontales del animal para extender el cuello Con pinzas curvas en una mano, manipule suavemente la lengua hacia un lado con la otra mano. Inserte el tubo de PE 90 en la tráquea.

A continuación, conecte el tubo endotraqueal a un ventilador para roedores con ciclo de volumen de Harvard. El ventilador debe circular a una velocidad de 125 a 150 respiraciones por minuto y un volumen corriente de 0,1 a 0,3 mililitros dependiendo del peso corporal del ratón, desinfectar la piel dentro del campo quirúrgico con una solución de Betadine seguida de alcohol al 70%. Repita este procedimiento tres veces para evitar la contaminación del campo quirúrgico durante la operación, coloque un paño estéril sobre el ratón, dejando solo expuesto el campo quirúrgico.

Ahora estamos listos para realizar la ligadura de la aorta transversa durante este procedimiento quirúrgico. La anestesia se mantiene al 1,5 al 2% de flúor con 0,5 a un litro por minuto, 100% de oxígeno. Verifique el nivel correcto de anestesia aplicando presión sobre el lecho ungueal del ratón.

Para confirmar la ausencia del reflejo simbólico. Comience la cirugía realizando una toracotomía parcial. Corta el esternón desde el extremo craneal hasta el nivel de la segunda costilla.

Con un microscopio quirúrgico, retraiga el esternón con un retractor de tórax. A continuación, utilice unas pinzas de punta fina en ángulo de 45 grados para separar suavemente el timo y el tejido graso del arco aórtico. Después de identificar la aorta transversa, coloque una pequeña pieza de sutura de seda 6.0 entre las arterias carótidas izquierda y denominada.

Haz dos nudos sueltos alrededor de la aorta transversal y coloca un pedazo pequeño de una aguja roma de calibre 27 y medio. Paralela a la aorta de transferencia. Ate rápidamente el primer nudo contra la aguja, seguido del segundo nudo, y luego retire rápidamente la aguja para producir una constricción de 0,4 milímetros de diámetro.

Una vez que se haya ligado la aorta transversa, retire el retractor torácico y apriete el flujo de salida del ventilador durante dos segundos. Para volver a inflar los pulmones con cuidado, cierre la caja torácica con una sutura de prolina 6.0 con un patrón de sutura interrumpido. Por último, cierre la piel con una sutura de prolina 6.0 con un patrón de sutura continuo.

Para la analgesia postoperatoria. Inyecte buprenorfina en el ratón por vía intraperitoneal. Si hay signos de deshidratación después de la cirugía, se administra de 0,3 a un mililitro de solución salina estéril por vía intraperitoneal.

Baje gradualmente la anestesia a la posición de apagado. Cuando se presenten signos de respiración espontánea, retire el tubo endotraqueal, luego mueva el mouse a la posición prona y deje que se recupere en una almohadilla térmica. Una semana después de la constricción aórtica transversa, se vuelve a anestesiar al ratón para determinar el grado de sobrecarga de presión inducida por la lación de la aorta transversa.

La anestesia y la temperatura corporal se mantienen como se muestra anteriormente. Coloque una sonda Doppler de 20 megahercios en los lados izquierdo y derecho del cuello en un ángulo de 45 grados. Para detectar las velocidades de flujo de la arteria carótida, utilizamos un procesador de señal Doppler basado en computadora para mostrar y almacenar señales Doppler.

Dependiendo del grado de sobrecarga de presión requerido para el protocolo experimental, solo se incluyen para un análisis adicional los ratones con una relación de flujo de carótida derecha o RC sobre carótida izquierda o lc dentro de un cierto rango. Por ejemplo, un grado moderado de sobrecarga de presión conduce a una relación de cinco a ocho, mientras que una constricción más estricta que resulta en una sobrecarga de presión severa conduce a una relación de ocho a 10. Sin embargo, se espera que un animal falso tenga una proporción de aproximadamente uno.

La supervivencia quirúrgica típica después de la TAC en ratones de tipo salvaje es de aproximadamente 80 a 90% de éxito. La ligadura quirúrgica de la aorta transversa dará lugar a una relación de velocidad de flujo Doppler entre la arteria carótida derecha e izquierda o RC sobre la lc de cinco a 10 en comparación con los ratones operados simuladamente. Se espera que los ratones con sobrecarga de presión desarrollen hipertrofia cardíaca dentro de una a dos semanas y dilatación cardíaca después de seis a ocho semanas, dependiendo de la rigidez de la constricción.

Acabamos de mostrarte cómo realizar la constricción aórtica transversal en ratones, pero realizar este procedimiento es importante para mantener la temperatura corporal normal y minimizar la pérdida de sangre. Así que eso es todo. Gracias por mirar y buena suerte con tus experimentos.