Name: Constricción de la aorta transversa en ratones (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-04-21T18:30:00.000+00:00
Duration: 8 min 25 s
Description: Aprende a realizar la constricción de la aorta transversa en ratones para estudiar la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardíaca inducidas por sobrecarga de presión. Este modelo quirúrgico permite investigar los mecanismos moleculares y fisiológicos subyacentes al remodelado cardíaco en investigación cardiovascular.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

XHTW es un WM Keck Foundation Distinguished Scholar jóvenes en la investigación médica, y también es apoyado por el NIH / NHLBI subvenciones R01-R01 y HL089598 R01HL091947, y Asociación de Distrofia Muscular de subvención # 69238. RJvO es el destinatario de la beca 2008-2010 American Physiological Society postdoctoral en genómica fisiológica. Este trabajo también es apoyado en parte por la Fundación Alianza Leducq de CaMKII en el Corazón de señalización.

Parte 1: Preparación del campo operatorio <ol><li> El campo de operación se desinfecta con un 75% de alcohol isopropílico. </li><li> Asegúrese de que el cojín de la calefacción está encendida y en la temperatura correcta. Un sistema recomendado es un Gaymar bomba de circulación de agua conectados a una plataforma de terapia que se mantiene a 37 ° C ± 1 ° C. Es importante mantener la temperatura corporal normal durante la cirugía para evitar una rápida disminución de la frecuencia cardíaca. </li><li> Los instrumentos quirúrgicos se esterilizan en un esterilizador de calor de cuentas antes de la cirugía. Para este procedimiento, tendrá los siguientes instrumentos quirúrgicos: tijeras de punta roma, por supuesto curva X 2 pinzas, pinzas finas en ángulo de 45 ° X 2, tijeras en ángulo de primavera, retractor en el pecho, y soporte de la aguja. </li><li> Aplicadores de algodón se debe a la mano en caso de hemorragia. </li></ol> Parte 2: Preparación y la intubación de los ratones <ol><li> Los ratones son anestesiados en una cámara de inducción con isoflurano 2% mezclado con 0.5 -1.0 L / min 100% de O 2. </li><li> Cortar el pelo se utilizan para afeitar la piel del escote a la altura del pecho medio. </li><li> El ratón es colocado en posición supina sobre un cojín de la calefacción con el fin de mantener la temperatura corporal. </li><li> Una banda de goma se coloca sobre los dientes delanteros del animal s para extender el cuello. El uso de pinzas curvas en una mano, la lengua es manipulado suavemente a un lado. Con la otra mano, la intubación endotraqueal se realiza con tubería de PE 90. El tubo endotraqueal se conecta a un volumen de Harvard de ciclo en ciclo del ventilador roedores 125-150 respiraciones / minuto y un volumen corriente de 0.1-0.3 ml. Durante la intervención quirúrgica, la anestesia se mantiene en 1,5 a 2% de isoflurano con 0,5 a 1,0 L / min 100% de O 2. Nivel correcto de la anestesia se verifica mediante la aplicación de presión sobre el lecho de la uña del ratón (dedo del pie-una pizca de reflejos). </li><li> El campo quirúrgico se desinfecta con una solución de betadine seguido por 70% de alcohol. Este procedimiento se repite tres veces. </li><li> Para evitar la contaminación del campo quirúrgico durante la operación, un campo estéril se coloca sobre el ratón dejando sólo el campo de operaciones al descubierto. </li><li> Un par de guantes estériles se utiliza para cada ratón individual. </li></ol> Parte 3: La ligadura de la aorta transversa <ol><li> Toracotomía parcial de la segunda costilla se realiza bajo un microscopio quirúrgico y el esternón se retractó de usar un separador en el pecho. </li><li> Punta fina pinza en ángulo de 45 ° se utilizan para separar suavemente el tejido del timo y la grasa del arco aórtico. </li><li> Tras la identificación de la aorta transversa, una pequeña pieza de una sutura de seda 6.0 se coloca entre las arterias carótidas innominada y la izquierda (Figura 1). </li><li> Dos nudos sueltos se atan alrededor de la aorta transversa y una pequeña pieza de un 27 ½ aguja roma de calibre se coloca paralelo a la aorta transversa. El primer nudo es atado rápidamente en contra de la aguja, seguida por la segunda y la aguja se eliminan sin demora con el fin de producir una contracción de 0,4 mm de diámetro. En los ratones control con tratamiento simulado, todo el procedimiento es idéntico, excepto para la ligadura de la aorta. </li><li> El retractor se quita el pecho y la salida del ventilador apagado apretado durante 2 segundos para volver a inflar los pulmones. </li><li> La caja torácica se cierra con una sutura de prolene 6.0 con un patrón de sutura interrumpida. </li><li> La piel se cierra con una sutura de prolene 6.0 con un patrón de sutura continua. </li></ol> Parte 4: recuperación post-operatoria <ol><li> Para la analgesia postoperatoria, el ratón se inyecta con buprenorfina (0,1 mg / kg) por vía intraperitoneal. Si hay signos de deshidratación después de la cirugía, se le da una solución salina estéril por vía intraperitoneal. </li><li> La anestesia es rebajarse gradualmente a la posición de apagado y el tubo endotraqueal eliminado cuando los signos de respiración espontánea se producen. </li><li> El ratón se mueve a la posición prona y les permitió recuperarse de una almohadilla eléctrica. </li></ol> Parte 5: Confirmación de la ligadura de éxito de la aorta transversa <ol><li> Una semana después de TAC, el ratón se re-anestesia para determinar el grado de sobrecarga de presión inducida por la ligadura de la aorta transversa. Como se describió anteriormente, la anestesia se mantiene en 1,5 a 2% de isoflurano con 0,5 a 1,0 L / min 100% de O2 y la temperatura corporal se mantuvo a 37 ° C ± 1 ° C. </li><li> A 20 MHz Doppler sonda se coloca en los lados izquierdo y derecho del cuello en un ángulo de 45 ° para detectar velocidades de flujo. Un ordenador basado en procesador de señales Doppler (Indo Instruments, Houston, TX) se utiliza para mostrar y almacenar señales de Doppler. 5 </li><li> Dependiendo del grado de sobrecarga de presión necesario para el protocolo experimental, los ratones sólo con una carótida derecha (RC) / carótida izquierda (LC) la relación de flujo dentro de cierto rango se incluyen para su posterior análisis. Por ejemplo, un moderado grado de sobrecarga de presión lleva a una proporción de 5-8, mientras que una contracción más estrecha que resulta en una sobrecarga de presión severa lleva tOA cociente de 8.10 (Figura 5.3A). Un animal simulado (operado, pero no ligado), sin embargo, se espera que tenga una proporción de ~ 1 (Figura 5.3b). </li></ol> 6: Resultados de Representante La supervivencia típica quirúrgica después de la TAC en ratones de tipo salvaje es alrededor de 80-90%. La ligadura quirúrgica exitosa de la aorta transversa dará lugar a una relación de velocidad Doppler del flujo entre la arteria carótida derecha y la izquierda (RC / LC) de 10.5 (Figura 1). En comparación con el simulacro que funciona con los ratones (Figura 2A), los ratones con sobrecarga de presión se espera que se desarrolle la hipertrofia cardiaca en 1-2 semanas, y la dilatación cardiaca después de 6-8 semanas, dependiendo de la tensión de la contracción (Figura 2B). La mortalidad durante el primer mes después de la TAC es más baja (&lt;20%) en ratones de tipo salvaje, a pesar de ratones modificados genéticamente pueden presentar diferentes tasas de supervivencia 6,7. <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig1tmb.jpg" alt="Figura 1" border="0" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. La confirmación de la ligadura de la aorta transversal con Doppler de medición de velocidad. Representante de las señales de velocidad Doppler de la derecha (CD) y la arteria carótida izquierda (LC) 6 días después de la TAC. Estas grabaciones demuestran una ligadura de éxito con un ratio de flujo de RC / LC de ~ 6.8. Por favor, <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/1729/1729fig1.jpg">haga clic aquí</a> para ver una versión ampliada de la figura 1. <img src="/files/ftp_upload/1729/1729fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Imágenes representativas de todo corazón Después de TAC. A, B. Sham-operado del corazón salvaje del ratón tipo.. Corazón salvaje del ratón tipo 16 semanas después de la TAC. Cada línea = 1 mm.

<ol><li>Rockman, H. A., Ross, R. S., Harris, A. N., Knowlton, K. U., Steinhelper, M. E., Field, L. J., Ross, J. Jr, Chein, K. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Segregation+of+atrial-specific+and+inducible+expression+of+an+atrial+natriuretic+factor+transgene+in+an+in+vivo+murine+model+of+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+USA%22%5BJournal%5D)">Segregation of atrial-specific and inducible expression of an atrial natriuretic factor transgene in an in vivo murine model of cardiac hypertrophy.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 88, 8277-8281 (1991).</li>
<li>Heineke, J., Molkentin, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regulation+of+cardiac+hypertrophy+by+intracellular+signaling+pathways%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Rev.+Mol.+Cell.+Biol%22%5BJournal%5D)">Regulation of cardiac hypertrophy by intracellular signaling pathways.</a> Nat. Rev. Mol. Cell. Biol. 7, 589-600 (2006).</li>
<li>Hartley, C. J., Reddy, A. K., Madala, S., Michael, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doppler+estimation+of+reduced+coronary+flow+reserve+in+mice+with+pressure+overload+cardiac+hypertrophy%5BTitle%5D)+AND+%22Ultrasound+Med.+Biol%22%5BJournal%5D)">Doppler estimation of reduced coronary flow reserve in mice with pressure overload cardiac hypertrophy.</a> Ultrasound Med. Biol. 34, 892-901 (2008).</li>
<li>Reddy, A. K., Taffett, G. E., Li, Y. -H., Lim, S. -W., Pham, T. T., Pocius, J. S., Entman, M. L., Michael, L. H., Hartley, C. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Doppler+signal+processing+for+use+in+mice%3A+applications%5BTitle%5D)+AND+%22IEEE+Trans.+Biomed.+Eng%22%5BJournal%5D)">Doppler signal processing for use in mice: applications.</a> IEEE Trans. Biomed. Eng. 52, 1771-1783 (2005).</li>
<li>Li, Y. -H., Reddy, A. K., Ochoa, L. N., Pham, T. T., Hartley, C. J., Micheal, L. H., Entman, M. L., Taffett, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+age+on+peripheral+vascular+response+to+transverse+aortic+banding+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gerontol%22%5BJournal%5D)">Effect of age on peripheral vascular response to transverse aortic banding in mice.</a> J. Gerontol. 58A, 895-899 (2003).</li>
<li>Bourajjaj, M., Armand, A. S., Martins, daC. osta, Weijts, P. A., Nagel, B. V. ander, Heeneman, R., Wehrens, S., Windt, X. H. D. e, J, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((NFATc2+is+a+necessary+mediator+of+calcineurin-dependent+cardiac+hypertrophy+and+heart+failure%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">NFATc2 is a necessary mediator of calcineurin-dependent cardiac hypertrophy and heart failure.</a> J. Biol. Chem. 28, 22295-22303 (2008).</li>
<li>Oort, R. J. van, Respress, J. L., Li, N., Reynolds, C., Almeida, A. C. D. e, Skapura, D. G., Windt, L. J. D. e, Wehrens, X. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accelerated+development+of+pressure+overload+induced+cardiac+hypertrophy+and+dysfunction+in+an+RyR2-R176Q+knockin+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Accelerated development of pressure overload induced cardiac hypertrophy and dysfunction in an RyR2-R176Q knockin mouse model.</a> Hypertension. 55, (2010).</li>
<li>Tarnavski, O., McMullen, J. R., Schinke, M., Nie, Q., Kong, S., Izumo, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mouse+cardiac+surgery%3A+comprehensive+techniques+for+the+generation+of+mouse+models+of+human+diseases+and+their+application+for+genomic+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Physiol+Genomics%22%5BJournal%5D)">Mouse cardiac surgery: comprehensive techniques for the generation of mouse models of human diseases and their application for genomic studies.</a> Physiol Genomics. 16, 349-360 (2004).</li>
</ol>

TAC, que imita a la estenosis aórtica humana, es un método común para inducir la hipertrofia e insuficiencia cardiaca en ratones. Sitios alternativos para la constricción de la aorta incluyen la aorta ascendente y abdominal. Constricción de la aorta ascendente proporciona una sobrecarga extrema y más rápido en el ventrículo izquierdo (VI). Por el contrario, la constricción de la aorta abdominal deja intacta una porción más grande de la circulación como medio de compensación posible. 8 Por lo tanto, la TAC es ...

<table><tbody><tr><td>Bomba de agua Gaymar T/pump</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Modelo TP-500</td><td>Bomba de circulación de agua</td></tr><tr><td>Almohadillas de terapia térmica</td><td>Harvard Apparatus</td><td>60-3414</td><td></td></tr><tr><td>Esterilizador por calor con cuentas</td><td>Fine Science Tools</td><td>18000-45</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras romas</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5980</td><td></td></tr><tr><td>Tijeras de resorte anguladas</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5668</td><td></td></tr><tr><td>Retractor torácico</td><td>Fine Science Tools</td><td>17002-02</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas curvas gruesas</td><td>Roboz Surgical Instruments Co.</td><td>RS-5138</td><td></td></tr><tr><td>Pinzas finas Dumont de 45&amp;#x00B0; anguladas</td><td>Fine Science Tools</td><td>11253-25</td><td></td></tr><tr><td>Portaagujas</td><td>Fine Science Tools</td><td>12565-14</td><td></td></tr><tr><td>Afeitadora eléctrica</td><td>GE Healthcare</td><td></td><td>Para afeitar el pelaje del ratón</td></tr><tr><td>Tubo de polietileno 90 (PE 90)</td><td>BD Biosciences</td><td>427420</td><td>Para intubación</td></tr><tr><td>MiniVent (ventilador)</td><td>Harvard Apparatus</td><td>Tipo 845</td><td></td></tr><tr><td>Betadine</td><td>Fisher Scientific</td><td>19-027132</td><td>Se puede adquirir en tiendas de suministros médicos</td></tr><tr><td>Guantes estériles</td><td>Mckesson</td><td>20-1565</td><td></td></tr><tr><td>Microscopio estereoscópico</td><td>Unico</td><td>ZM186</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de seda 6-0</td><td>Fine Science Tools</td><td>18020-60</td><td></td></tr><tr><td>Aguja de calibre 27 &amp;frac12;</td><td>BD Biosciences</td><td>305109</td><td></td></tr><tr><td>Sutura de prolene 6-0</td><td>Mckesson</td><td>3286</td><td></td></tr><tr><td>Buprenorfina</td><td>Instalación Institucional de Animales</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

constricción de la aorta transversa en ratones

Transverse Aortic Constriction in Mice

Constricción de la aorta transversal (TAC) en el ratón es un modelo experimental de uso común para la presión inducida por sobrecarga de la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardiaca.<sup&gt; 1</sup&gt; TAC inicialmente conduce a la hipertrofia compensada del corazón, que a menudo se asocia con un aumento temporal de la contractilidad cardíaca. Con el tiempo, sin embargo, la respuesta a la sobrecarga hemodinámica crónica se convierte en mala adaptación, lo que resulta en la dilatación cardíaca y la insuficiencia cardiaca.<sup&gt; 2</sup&gt; El modelo murino TAC fue validado por primera vez por Rockman<em&gt; Et al</em&gt;.<sup&gt; 1</sup&gt;, Y desde entonces ha sido ampliamente utilizado como una herramienta valiosa para imitar humanos las enfermedades cardiovasculares y dilucidar los procesos fundamentales de señalización implicadas en la respuesta hipertrófica y el desarrollo de insuficiencia cardíaca. En comparación con otros modelos experimentales de insuficiencia cardíaca, como la oclusión completa de la arteria descendente anterior (LAD) arteria coronaria, TAC proporciona un modelo más reproducible de la hipertrofia cardíaca y un curso de tiempo más gradual en el desarrollo de insuficiencia cardíaca. Aquí se describe un procedimiento paso a paso para realizar cirugía TAC en ratones. Para determinar el nivel de sobrecarga de presión producida por la ligadura de la aorta, una alta frecuencia de sonda Doppler se utiliza para medir la relación entre las velocidades del flujo sanguíneo en las arterias carótidas derecha e izquierda.<sup&gt; 3, 4</sup&gt; Con las tasas de supervivencia quirúrgica del 80-90%, aórtica transversal de bandas es una técnica eficaz para inducir la hipertrofia ventricular izquierda e insuficiencia cardiaca en ratones.

Constricción de la aorta transversal (TAC) en el ratón es un modelo de uso experimental para estudiar mecanismos que subyacen a la hipertrofia cardíaca y el desarrollo de insuficiencia cardíaca. Aquí se describen los procedimientos para contraer la aorta para crear un grado de reproducibilidad de la hipertrofia cardiaca en ratones.

Constricción de la aorta transversa en ratones

La constricción aórtica transversa (TAC) en el ratón es un modelo experimental comúnmente utilizado para la hipertrofia cardíaca inducida por sobrecarga de presión y la insuficiencia cardíaca...

Este procedimiento comienza anestesiando un ratón, preparándolo para una cirugía aséptica y colocándolo en posición supina sobre una alfombra calefactora. Se realiza la intubación endotraqueal utilizando un tubo de PE 90, que luego se conecta a un ventilador para roedores. A continuación, se realiza una toracotomía parcial hasta la segunda costilla y se retrae el esternón.Se identifica la aorta transversa y posteriormente se liga entre las arterias innominada y carótida izquierda. Se cierra la caja torácica, seguida por la piel con un patrón de sutura continua. Finalmente, se retira el tubo endotraqueal y se permite que el ratón se recupere.Hola, soy Angela Dal Meda del laboratorio del Dr. Zander Wars en el Departamento de Fisiología Molecular y Biofísica del Baylor College of Medicine. Hoy les mostraremos el procedimiento de constricción aórtica transversa en ratones. Utilizamos este procedimiento en nuestro laboratorio para estudiar los mecanismos que subyacen al desarrollo de la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardíaca.Así que comencemos. Antes de iniciar la constricción aórtica transversal o la cirugía TAC, desinfecte el campo operatorio con alcohol isopropílico al 75%. Encienda la almohadilla calefactora y ajústela a la temperatura adecuada.El sistema que recomendamos es una bomba de agua circulante para juegos conectada a una almohadilla de terapia térmica que se mantiene a 37 más o menos un grado Celsius. Esterilice los instrumentos quirúrgicos en un esterilizador de perlas calientes antes de la cirugía. Para el procedimiento quirúrgico de tax, se necesitan los siguientes instrumentos quirúrgicos.Un par de tijeras romas, dos pinzas curvas gruesas para localizar pinzas en ángulo de 45 grados, un par de tijeras de resorte anguladas, un retráctor torácico y un portaagujas. También se deben tener aplicadores de algodón a mano en caso de sangrado. Con el campo operatorio preparado, podemos proceder a la intubación del ratón.Como preparación para la intubación, se anestesia al ratón en una cámara de inducción y se utilizan máquinas para cortar el pelo a fin de afeitar el vello desde la línea del cuello hasta el nivel medio del tórax. Coloque al ratón en posición supina encima de la almohadilla calefactora. Es importante mantener la temperatura corporal normal durante la cirugía para evitar una disminución rápida de la frecuencia cardíaca y una posible muerte súbita.Aplique presión sobre la cama ungueal del ratón para confirmar que el animal está completamente anestesiado. Coloque una banda de goma sobre los dientes frontales del animal para extender el cuello. Con pinzas curvas en una mano, manipule suavemente la lengua hacia un lado con la otra mano. Introduzca un tubo de PE 90 en la tráquea.A continuación, conecte el tubo endotraqueal a un ventilador roedor de volumen cíclico Harvard. El ventilador debe funcionar a 125-150 respiraciones por minuto y un volumen tidal de 0,1 a 0,3 mililitros, dependiendo del peso corporal del ratón. Desinfecte la piel dentro del campo quirúrgico con solución de Betadine seguida de alcohol al 70 %. Repita este procedimiento tres veces para prevenir la contaminación del campo quirúrgico durante la operación y coloque una tela estéril sobre el ratón, dejando expuesto únicamente el campo operatorio.Ahora estamos listos para realizar la ligadura de la aorta transversa durante este procedimiento quirúrgico. Mantenga la anestesia entre 1,5 y 2 % de isoflurano con 0,5 a un litro por minuto de oxígeno al 100 %. Verifique el nivel adecuado de anestesia aplicando presión sobre la almohadilla ungueal del ratón.Para confirmar la ausencia del reflejo del token. Comience la cirugía realizando una toracotomía parcial. Corte el esternón comenzando desde el extremo craneal hasta el nivel de la segunda costilla.Utilizando un microscopio quirúrgico, retire el esternón con un retractor torácico. A continuación, use una pinza fina con punta en ángulo de 45 grados para separar suavemente el timo y el tejido adiposo del arco aórtico. Después de identificar la aorta transversa, coloque un pequeño trozo de sutura de seda 6.0 entre las arterias anónima y carótida izquierda.Ate dos nudos sueltos alrededor de la aorta transversal y coloque un pequeño fragmento de una aguja roma de calibre 27 y medio paralelo a la aorta de transferencia. Ate rápidamente el primer nudo contra la aguja, seguido del segundo nudo, y luego retire inmediatamente la aguja para obtener una constricción de 0,4 milímetros de diámetro.Una vez que se haya ligado la aorta transversa, retire el retractor torácico y ocluya durante dos segundos el flujo de salida del ventilador. Para reinflar cuidadosamente los pulmones, cierre la caja torácica utilizando una sutura de prolina 6.0 con un patrón de sutura interrumpida. Finalmente, cierre la piel usando una sutura de prolina 6.0 con un patrón de sutura continua.Para la analgesia posoperatoria. Inyecte al ratón buprenorfina por vía intraperitoneal. Si hay signos de deshidratación después de la cirugía, se administra de 0,3 a un mililitro de solución salina estéril por vía intraperitoneal.Disminuya gradualmente la anestesia hasta la posición de apagado. Cuando aparezcan signos de respiración espontánea, retire el tubo endotraqueal, luego coloque al ratón en posición prona y permita que se recupere sobre una almohadilla calefactora. Una semana después de la constricción aórtica transversa, se vuelve a anestesiar al ratón para determinar el grado de sobrecarga de presión inducida por la ligadura de la aorta transversa.La anestesia y la temperatura corporal se mantienen como se indicó previamente. Coloque una sonda Doppler de 20 megahercios en los lados izquierdo y derecho del cuello con un ángulo de 45 grados. Para detectar las velocidades del flujo arterial carotídeo, utilizamos un procesador de señales Doppler basado en computadora para mostrar y almacenar las señales Doppler.Según el grado de sobrecarga de presión requerido para el protocolo experimental, solo se incluyen ratones con una relación del flujo de la carótida derecha o RC sobre la carótida izquierda o lc dentro de un rango determinado para análisis posteriores. Por ejemplo, un grado moderado de sobrecarga de presión conduce a una relación de cinco a ocho, mientras que una constricción más estrecha que resulta en una sobrecarga de presión severa conduce a una relación de ocho a 10. Sin embargo, se espera que un animal simulado tenga una relación de aproximadamente uno.La supervivencia quirúrgica típica tras la TAC en ratones de tipo salvaje es de aproximadamente un 80 a 90 % exitosa. La ligadura quirúrgica de la aorta transversa provocará una relación de velocidad de flujo Doppler entre la arteria carótida derecha e izquierda, o RC sobre LI, de cinco a diez en comparación con ratones operados simuladamente. Se espera que los ratones con sobrecarga de presión desarrollen hipertrofia cardíaca dentro de una a dos semanas y dilatación cardíaca después de seis a ocho semanas, dependiendo del grado de estrechamiento.Acabamos de mostrarle cómo realizar la constricción aórtica transversal en ratones, pero es importante mantener la temperatura corporal normal y minimizar la pérdida de sangre durante este procedimiento. Eso es todo. Gracias por ver este video y buena suerte con sus experimentos.

Research

Investigación

JoVE Journal

Biology

Biología

En este video, demostramos un protocolo experimental para la constricción aórtica transversa mínimamente invasiva en ratones para examinar la insuficiencia cardíaca inducida por sobrecarga de presión.

Bandas del arco aórtico transversal en modelo de ratón: una técnica mínimamente invasiva en ratones para la inducción de alta presión en el ventrículo izquierdo

El objetivo de este protocolo es evaluar de forma no invasiva los cambios estructurales y funcionales cardiacas en un modelo de ratón de la enfermedad cardíaca creado por constricción de la aorta transversal, utilizando B y en modo M ecocardiografía y color / de pulso Doppler de onda.

Evaluación de la cardíaco morfológica y funcional Los cambios en el modelo de ratón de la constricción de la aorta transversa por ecocardiográfico Imaging

Se describe un modelo de rata de constricción aórtica abdominal que induce hipertrofia y remodelación cardíaca. Se utiliza un método eficiente, altamente reproducible y mínimamente invasivo para proporcionar una plataforma simple pero útil para la investigación de la hipertrofia y disfunción miocárdica.

Un modelo de remodelamiento cardiaco A través de la constricción de la aorta abdominal en ratas

Mínimamente invasiva constricción de la aorta transversal (MTC) conserva los elementos esenciales de la constricción de la aorta transversal regular (TAC) al tiempo que elimina el uso de un ventilador con intubación traqueal. Demuestra ser un método altamente deseable para los estudios de alto rendimiento de sobrecarga ventricular izquierda, sobre todo en estudios de traducción.

La constricción aórtica mínimamente invasiva transversal en ratones

El objetivo de este protocolo es describir paso a paso la técnica de invasión mínima constricción aórtica transversal (TAC) en ratones. Por la eliminación de la intubación y la ventilación que son obligatorios para el procedimiento estándar utilizado, mínimamente invasiva TAC simplifica el procedimiento operativo y reduce el esfuerzo puesto en el animal.

Técnica mínimamente invasiva constricción aórtica transversal en ratones para la inducción de la hipertrofia Ventricular izquierda

Aquí, presentamos un protocolo de constricción aórtica transversal (TAC) a través de una toracotomía lateral. Esta técnica es un procedimiento quirúrgico mínimamente invasivo, cerrado pecho con el objetivo de simular la sobrecarga de presión y la insuficiencia cardíaca en ratones utilizando la configuración estándar de laboratorio de TAC.

Un modelo del cerrado-pecho para inducir constricción aórtica transversal en ratones

Este protocolo presenta un método mejorado para obtener hipertrofia miocárdica transitoria con sutura absorbible, simulando la disminución de la hipertrofia ventricular izquierda después de eliminar la sobrecarga de presión. Podría ser valioso para los estudios sobre el preaccondicionamiento hipertrófico miocárdico.

Operación de constricción aórtica transversal con sutura absorbible para obtener hipertrofia miocárdica transitoria

El presente protocolo describe una técnica modificada y simplificada con un procedimiento de constricción aórtica transversa (TAC) mínimamente invasivo utilizando un retractor de fabricación propia. Este procedimiento se puede realizar sin un ventilador o microscopio e introduce sobrecarga de presión, lo que eventualmente conduce a hipertrofia cardíaca o insuficiencia cardíaca.

Una técnica modificada para la constricción aórtica transversa en ratones

El ratón heterotópico modelo de trasplante de corazón ha sido probado por muchos investigadores como un método importante para el estudio de los mecanismos de rechazo y de la respuesta inmune. Sin embargo, las técnicas empleadas siguen siendo un reto. Mediante la modificación de las técnicas convencionales que han tenido éxito con más de 1.000 trasplantes.

El trasplante cardíaco heterotópico en ratones

El pequeño ratón modelo de trasplante de intestino ha sido reconocido como una herramienta importante para estudiar mechanismes de rechazo inmunológico y la pantalla de nuevos fármacos inmunosupresores. Sin embargo, este modelo se limita al uso porque las técnicas en cuestión es un desafío muy técnico. Ahora se introduce la técnica modificada.

Trasplante de intestino delgado en ratones

Aprende a realizar la constricción de la aorta transversa en ratones para estudiar la hipertrofia cardíaca y la insuficiencia cardíaca inducidas por sobrecarga de presión. Este modelo quirúrgico permite investigar los mecanismos moleculares y fisiológicos subyacentes al remodelado cardíaco en investigación cardiovascular.

Constricción de la aorta transversa en ratones

Explorar más videos