Separación de bacterias por cantidad de cápsula utilizando un gradiente de densidad discontinuo
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 2:17 min. • August 29th, 2025
Comience con un tubo que contenga un gradiente de densidad discontinuo preestablecido, preparado con partículas de sílice coloidal no tóxicas recubiertas con polivinilpirrolidona.
El gradiente comprende tres capas no superpuestas dispuestas en orden de densidades crecientes de arriba a abajo.
Tomemos una biblioteca de mutantes de transposones bacterianos, una suspensión combinada de cepas bacterianas con mutaciones aleatorias inducidas por transposones.
Un subconjunto de estas mutaciones altera los genes que regulan la cápsula, una capa de polisacáridos que rodea la pared celular bacteriana, lo que da como resultado cepas con cantidades variables de cápsulas.
Agregue la biblioteca bacteriana a la parte superior del degradado muy lentamente, sin mezclar la interfaz.
Centrifugar el tubo a una velocidad moderada.
El gradiente facilita la migración diferencial de bacterias en función de sus cantidades de cápsulas.
Las cepas hiperencapsuladas, al ser menos densas debido a su capa de polisacáridos hidratados, se localizan cerca de la parte superior.
Las cepas débilmente encapsuladas se asientan en el medio, y las cepas no encapsuladas y más densas migran al fondo.
Las cepas bacterianas separadas
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