Microscopía de contraste de fase para evaluar mutantes del desarrollo en Streptomyces

Comience con placas de agar que contengan colonias de cepas mutantes y de tipo salvaje de Streptomyces coelicolor, una bacteria filamentosa del suelo.

Coloque un cubreobjetos estéril sobre una región de crecimiento denso de colonias donde los filamentos aéreos, que son filamentos que se extienden por encima de la superficie de la colonia, sean claramente visibles.

Presione suavemente el cubreobjetos para transferir los filamentos aéreos y las esporas asociadas a la superficie del cubreobjetos.

A continuación, tome un portaobjetos de microscopio con medios de montaje y monte el cubreobjetos con la celda hacia abajo para preservar las estructuras bacterianas.

Coloque el portaobjetos en una platina de microscopio, agregue una gota de aceite de inmersión en el cubreobjetos y alinee el objetivo.

Usando microscopía de contraste de fase, adquiera imágenes de los filamentos aéreos de cepas de tipo salvaje y mutantes.

Los filamentos de tipo salvaje exhiben esporas de tamaño uniforme y regularmente espaciadas.

Por el contrario, las cepas mutantes muestran defectos, como filamentos abultados, esporas irregulares o esporas lisadas, lo que revela diferencias fenotípicas de desarrollo entre el tipo sal