Detección de patógenos de peces mediante análisis de repetición en tándem de número variable (VNTR)
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:01 min. • November 28th, 2025
Comienza con una placa PCR que contiene una solución desnaturalizante a base de formamida.
Añade los amplicones de PCR diluidos derivados de una bacteria patogénica de peces en cada pozo.
Estos amplicones contienen repeticiones tándem de número variable marcadas con fluorescencia (VNTR), secuencias cortas y repetitivas utilizadas como marcadores genéticos para la identificación bacteriana.
Sella la placa y la centrífuga para eliminar las burbujas de aire.
Calienta la placa en un ciclador térmico para desnaturalizar los VNTR de doble hebra.
La formamida mejora la separación de los hilos e inhibe el recocimiento.
Enfría rápidamente la placa para estabilizar el ADN monocatenario.
Centrifugar para recoger el volumen de la muestra.
Quita el sello y asegura la placa con un marco.
Coloca el tubo capilar y realiza electroforesis capilar.
Durante la electroforesis, los fragmentos de VNTR migran a través del capilar bajo un campo eléctrico y se separan por tamaño.
Un láser excita las etiquetas fluorescentes de cada fragmento, produciendo señales codificadas por colores.
El electroferograma resultante muestra patrones de pico de VNTR que corresponden a la bacteria patógena.
Tras confirmar los amplicones d
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