Visualización de la infección del tracto urinario en un modelo murino usando bioluminiscencia

Comienza con un ratón anestesiado y, usando un catéter, inyecta una suspensión de bacterias patógenas en la vejiga urinaria.

Estas bacterias portan un operón bioluminiscente, que permite la producción autónoma de luz para rastrear la infección.

El revestimiento interno de la vejiga es un epitelio especializado que separa la luz del tejido subyacente.

Las proteínas de adhesión bacterianas se unen a los receptores de glicoproteínas en la superficie epitelial del huésped, desencadenando endocitosis mediada por receptores.

Las bacterias internalizadas se replican para formar comunidades bacterianas intracelulares densas.

Las bacterias expresan el operón bioluminiscente, produciendo una enzima luciferasa y un complejo enzimático que sintetiza el sustrato luciferasa.

La luciferasa oxida el sustrato para emitir luz visible.

Coloca el ratón dentro de la cámara de imagen y captura la señal bioluminiscente.

Selecciona una región de interés y cuantifica la intensidad de la bioluminiscencia.

Monitoriza esta señal a lo largo del tiempo como un indicador en tiempo real de la carga bacteriana y la progresión de la infección.

Abre el software de adquisición BLI y haz clic en Inicializar en el dispositivo de imagen para probar la cámara y el sistema de control de escenario y para enfriar la cámara del dispositivo de carga acoplada a menos 90 grados Celsius. Haz clic en Adquisición y Guardado Automáticamente. Selecciona luminiscencia y fotografía. Comprueba los ajustes luminosos por defecto poniendo el filtro de excitación en Bloque y el filtro de emisión en Abierto.

Configura el tiempo de exposición en automático al tomar la primera imagen. Para mediciones in vivo y señales brillantes, ajusta el tiempo de exposición a unos 30 segundos. Reduce el tiempo de exposición si aparece una advertencia debido a una imagen saturada.

Selecciona el binning medio, el F/stop uno, y elige el FOV correcto. Ajusta la altura del sujeto a 1 centímetro al hacer imágenes de ratones. Imagina hasta 5 ratones simultáneamente y separa los animales usando el deflector de luz para evitar la reflexión.

Cierra la puerta y haz clic en Adquirir para iniciar la secuencia de imagen. Luego rellena información detallada sobre el experimento. Saca a los ratones de la cámara de imagen y devuélvelos a su jaula. Comprueba la recuperación completa tras la anestesia. Luego devuelven las jaulas a los estantes ventilados hasta el siguiente ciclo de imagen.

Inicia el software de imagen y carga el archivo experimental haciendo clic en Explorar. Usa la paleta de herramientas para ajustar la escala de color de la imagen. Utiliza las herramientas de retorno de inversión para dibujar una región de interés en la imagen, asegurándote de que sea lo suficientemente grande para cubrir toda el área y usando las mismas dimensiones para todas las imágenes. Luego, haz clic en medición de ROI para cuantificar la intensidad de la luz.