Visualización del estrés oxidativo inducido por patógenos en C. elegans usando SKN-1 etiquetado con GFP
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Microbiología
0 visualizaciones • 3:12 min. • March 31st, 2026
Comienza con dos placas que contienen gusanos C. elegans que expresan SKN-1 con proteínas fluorescentes verdes, un factor de transcripción localizado en el citoplasma intestinal. Estos gusanos también contienen gránulos intestinales de lipofuscina que muestran autofluorescencia.
Una placa se siembra con bacterias no patógenas como grupo de control, y la otra con bacterias patógenas como grupo de prueba.
En el grupo de prueba, el peróxido de hidrógeno producido por el patógeno induce estrés oxidativo, desencadenando la translocación de SKN-1 a los núcleos intestinales.
En el grupo control, la mayor parte del SKN-1 permanece distribuida de forma difusa en el citoplasma.
Lava cada placa con un amortiguador y transfiere los gusanos a tubos.
Centrifuga para separar los gusanos y quitar el amortiguador.
Añade un medio que contenga azida de sodio para anestesiarlos.
Monta los gusanos sobre almohadillas de agarosa, coloca las cubiertas y observa bajo un microscopio de fluorescencia. Utiliza la autofluorescencia para visualizar los límites nucleares.
Una señal nuclear fuerte de SKN-1 en la prueba, en relación con la señal citoplasmática difusa en los controles, indica relocalización nuclear y confi
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