Modelado del cáncer de próstata en modelos de ratón modificados genéticamente: una técnica de edición de genes localizados mediada por CRISPR/Cas9 en células del lóbulo anterior de la próstata de ratón

Comience con un modelo de ratón knock-in CRISPR / Cas9 anestesiado y preparado con un genoma diseñado para expresar endonucleasas Cas9 y proteínas fluorescentes verdes, o GFP, por un fuerte promotor ascendente. Un casete floxed-STOP o LSL insertado inmediatamente aguas abajo del promotor bloquea la transcripción de Cas9 y GFP en condiciones normales.

Haga una incisión en la pared abdominal del ratón para exponer su lóbulo prostático anterior unido a la vesícula seminal. Inyecte la suspensión adenoviral deseada en el lóbulo anterior para facilitar la administración del genoma viral dirigido a las células. Vuelva a colocar el lóbulo de la próstata en la cavidad abdominal y suture la incisión.

Dentro de las células infectadas por virus, el genoma viral expresa enzimas recombinasas Cre y ARN guía dirigidos al gen que se va a mutar. Las enzimas Cre reconocen el casete LSL y extirpan el bloqueador de transcripción floxado. Este paso permite al promotor impulsar la expresión de endonucleasas Cas9 y GFP.

Posteriormente, las endonucleasas Cas9 forman complejos con ARN guía codificados por virus que dirigen estos complejos a la secuencia diana dentro del gen que se va a mutar. Esta localizac