Inmunotinción con oro de secciones exosómicas: una técnica para visualizar marcadores de diagnóstico en la luz exosomal

Los exosomas son pequeñas vesículas extracelulares que encierran una variedad de biomoléculas que sirven como biomarcadores del cáncer.

Para visualizar biomarcadores exosómicos, comience con secciones exosomales ultrafinas incrustadas en resina apoyadas en rejillas metálicas de microscopía electrónica adecuadas. Incube las rejillas en gotas de glicina. La glicina se une y neutraliza los grupos aldehídos reactivos en las secciones para superar su interferencia con el ensayo.

Enjuague la muestra con agua para eliminar los reactivos residuales. Posteriormente, incube la muestra en un tampón de bloqueo. El tampón transporta proteínas séricas que bloquean los sitios de unión de anticuerpos no específicos en la muestra.

A continuación, incube la muestra en la solución de anticuerpos primarios deseada. Estos anticuerpos reconocen y se unen a sus biomarcadores diana localizados en la luz exosómica. Lave los anticuerpos no unidos con un tampón adecuado.

Ahora, transfiera las rejillas que contienen muestras a gotas que contengan anticuerpos secundarios conjugados con oro que se adhieran a los anticuerpos primarios. Las nanopartículas de oro sirven como marcadores densos en electrones para vi