Muestreo de microextracción en fase sólida: una técnica basada en sondas para la extracción de muestras de tejidos de injerto

El almacenamiento a largo plazo de un injerto de órgano afecta su perfil metabólico, que es un indicador de la función del órgano y del rechazo del órgano en etapa temprana.

Para aislar estos metabolitos, comience tomando una sonda delgada de microextracción en fase sólida o SPME recubierta con un sorbente biocompatible. Sumerja la sonda en una solución de limpieza hidroalcohólica para hidratar el sorbente recubierto y aflojar las impurezas unidas.

Agite la sonda para eliminar las impurezas. A continuación, coloque la sonda en una solución de activación y agite nuevamente. Los productos químicos en la solución de activación modifican la superficie de la sonda, mejorando su potencial de adsorción. Enjuague la sonda con agua y esterilícela para eliminar los contaminantes microbianos.

Ahora, inserte la sonda estéril y activada en el injerto de órgano de modo que la matriz de tejido cubra toda la superficie del sorbente. El material absorbente atrae metabolitos polares y no polares libres del injerto, lo que permite la adsorción en su superficie. Retraiga la sonda y enjuáguela con agua para eliminar cualquier tejido residual.

Luego, coloque la sonda en una solución de desorción, que interactúa con los metabolitos adsorbidos. Agite la sonda para separar y solubilizar los metabolitos capturados en la solución de desorción. Finalmente, retire la sonda y procese la mezcla de metabolitos resultante para su posterior análisis.

Comience preparando una mezcla de preacondicionamiento compuesta de 1 a 1 metanol y agua. Pipetee 1 mililitro de la solución en cada vial de vidrio de 2 mililitros y coloque una sonda en cada vial. Agite los viales en un agitador de vórtice a 1.200 rpm durante 1 hora. A continuación, enjuague las sondas con agua de grado LC-MS y esterilícelas de acuerdo con el protocolo de esterilización quirúrgica estándar o en el departamento de procesamiento estéril.

Cuando esté listo para extraer la muestra, abra el empaque estéril e inserte dos sondas directamente en la corteza renal durante 10 minutos por punto de tiempo, asegurándose de que toda la longitud del recubrimiento esté cubierta por la matriz de tejido. Asegúrese de realizar un seguimiento del tiempo de muestreo de cada sonda. Retraiga la sonda sacándola del tejido y enjuague inmediatamente el recubrimiento con agua de grado LC-MS para eliminar cualquier resto de sangre, asegurándose de enjuagar fuera del sitio quirúrgico.

Para transportar las sondas, colóquelas en viales separados y ciérrelos. Luego, coloque los viales en una caja llena de hielo seco o nitrógeno líquido. Almacene las muestras a 80 grados Celsius negativos o proceda inmediatamente con la desorción.

Preparar una solución de desorción compuesta por acetonitrilo y agua para el análisis metabolómico y otra compuesta por isopropanol y metanol para el análisis lipidómico. Agregue 100 microlitros de la solución a los insertos en los viales etiquetados de 2 mililitros y coloque una sonda en cada vial. Agite los viales a 1.200 rpm durante 2 horas. A continuación, retire las sondas de los viales y proceda con el análisis de LC-MS.