Aislamiento de células mononucleares a partir de cerebro de ratón: una técnica de centrifugación de gradiente de densidad para aislar células mononucleares residentes en el cerebro
Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Investigación sobre el cáncer
0 visualizaciones • 4:11 min. • April 30th, 2023
Las células mononucleares en el cerebro, que comprenden linfocitos y monocitos, juegan un papel crucial en el mantenimiento de la función cerebral y la homeostasis.
Para aislar estas células mononucleares, primero, tome un cerebro de ratón recién cosechado perfundido con solución salina.
La perfusión permite la eliminación de sangre y sus componentes de los vasos sanguíneos, lo que permite el aislamiento de las células inmunitarias residentes en el cerebro en los pasos posteriores.
Ahora, enjuague el cerebro con medios adecuados para eliminar los glóbulos rojos adheridos. Continúe el enjuague con picado para adquirir pequeños trozos de tejido.
Homogeneizar las piezas de tejido para obtener una suspensión de células individuales y fragmentos de células.
A esta suspensión, agregue medios enfriados y un medio de gradiente de densidad adecuado en volúmenes apropiados para formar un medio de gradiente de baja densidad.
A continuación, agregue un volumen específico de un medio de gradiente de alta densidad; el medio de gradiente de alta densidad forma una capa separada en la parte inferior, creando un gradiente de densidad discontinuo.
Centrifugar la suspensión a alta velocidad y baja te
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