Disección del cerebelo y preparación de cortes: un método para generar cortes de tejido a partir de cerebelo de ratón

En ratones, el cerebelo está situado en la base del prosencéfalo y consta de dos hemisferios laterales unidos por una línea media: vermis. El cerebelo, que contiene la mayoría de las neuronas del cerebro, es vital para los estudios neurológicos.

Para generar cortes de cerebelo, comience con una cabeza de ratón decapitada. Inserte las tijeras en el foramen magno, la abertura en la base del cráneo. Haga una incisión suave en el cráneo y retírelo. A continuación, voltee el cerebro y corte los nervios óptico y trigémino. Libere el cerebro en un medio de disección frío con el lado dorsal hacia arriba. Separar el rombencéfalo de las otras partes del cerebro.

Luego, corte los pedúnculos cerebelosos subyacentes, la conexión entre el cerebelo y el tronco encefálico, para separar el cerebelo. Retire las meninges del cerebelo. Coloque con cuidado el cerebelo en una plataforma de corte de tejidos perpendicular a la cuchilla del helicóptero. Ahora, disecciona las rodajas de tejido del grosor adecuado. Inmediatamente, humedezca las rodajas y transfiéralas nuevamente a la placa de Petri que contiene el medio de disección.

Separe e identifique las rodajas del vermis. Transfiera las rodajas seleccionadas a un inserto de pozo en una placa de cultivo que contenga un medio de cultivo adecuado. Incubar el cultivo para mantener la integridad estructural y funcional de las rodajas cerebelosas disecadas para futuros experimentos.

Para comenzar, inserte una tijera pequeña suavemente en el foramen magnum y corte el cráneo haciendo una incisión lateral hacia el costado y luego corte alrededor del cráneo de la cabeza. Para recuperar la parte dorsal del cráneo, use unas pinzas rectas finas para levantar con cuidado la parte dorsal del cráneo.

Luego, introduzca con cuidado las pinzas entre el cráneo ventral y el cerebro. Voltee suavemente el cerebro y corte los nervios óptico y trigémino con unas tijeras pequeñas. A continuación, gire la cabeza o la parte dorsal del cráneo boca abajo justo por encima de una placa de cultivo celular de 60 milímetros que contenga un medio de disección helado para ayudar al cerebro a caer por gravedad.

Con fórceps finos, oriente el cerebro con el lado dorsal hacia arriba y el lado ventral hacia abajo. Bajo el microscopio binocular, use las pinzas rectas finas para inmovilizar el cerebro en el lado del prosencéfalo. Luego, separe el rombencéfalo del resto del cerebro. Corta los pedúnculos cerebelosos debajo del cerebelo para separar el cerebelo del resto del rombencéfalo.

Una vez que el cerebelo esté aislado, use fórceps finos y rectos para arrancar con cuidado las meninges. Sostenga el cerebelo suavemente con las pinzas curvas finas y colóquelo con el lado dorsal hacia arriba sobre la plataforma de plástico perpendicular a la hoja de afeitar del picor. A continuación, con una punta de pipeta de extremo delgado estéril unida a una pipeta de 1 mililitro, aspire cualquier exceso de medio de disección alrededor del cerebelo. Luego, con un picador de tejidos, cortó secciones sagitales de 300 micrómetros de espesor del cerebelo.

A continuación, agregue suavemente una gota de medio de disección sobre el cerebelo en rodajas. Luego, con una punta de pipeta de gran calibre unida a la pipeta de 1 mililitro, aspire lentamente el cerebelo en rodajas y transfiéralo nuevamente a la placa de cultivo celular de 60 milímetros que contiene medio de disección helado.

A continuación, use dos fórceps finos y rectos para separar cortes individuales. A continuación, con una punta de pipeta de gran calibre unida a la pipeta de 1 mililitro, transfiera hasta cuatro cortes seleccionados del vermis junto con un poco de medio de disección a un inserto de cultivo de una placa de 6 pocillos. Elimine cualquier exceso de medio de disección alrededor de las rodajas con una punta de pipeta de extremo delgado.