Modelo de asa ileal de ratón: un modelo quirúrgico para estudiar la permeabilidad intestinal en el ratón

En condiciones patológicas, la desintegración de las barreras epitelial y endotelial aumenta la permeabilidad intestinal, lo que hace que el contenido intestinal se filtre a la vasculatura circundante y la cavidad abdominal. La permeabilidad intestinal se puede simular utilizando el modelo de asa ileal.

Para comenzar, prepare un ratón anestesiado en posición supina. Haga una incisión en la línea media del abdomen. Coloque una gasa de algodón estéril humedecida con un tampón adecuado sobre el área quirúrgica para mantener los órganos hidratados durante la cirugía.

Exteriorizar el íleon, la parte distal del intestino, y extenderlo sobre la gasa para exponer el mesenterio. Identifique dos sitios de ligadura en el íleon que estén espaciados adecuadamente en el mesenterio y que estén desprovistos de vasos sanguíneos críticos. Luego, perfore el mesenterio para agregar ligaduras en los sitios identificados.

A continuación, disecciona el íleon para generar un asa ileal aislada con un suministro de sangre intacto y una membrana mesentérica. A continuación, inyecte un tampón adecuado en el circuito para eliminar el contenido de los residuos.

Ahora, liga los extremos abiertos del asa ileal. Use una jeringa para inyectar quimiocina, una suspensión de proteína quimiotáctica, en el asa, lo que hace que se infle. Regrese los órganos al abdomen.

Sutura la incisión. Deje que el mouse se recupere. Eventualmente, las moléculas de quimiocinas pasan a través de la pared ileal hacia los vasos sanguíneos adyacentes, causando inflamación y afluencia de leucocitos.

Después de lograr un plano quirúrgico de anestesia, comience frotando el pelaje de la línea media abdominal con hisopos con alcohol o una esponja de gasa empapada con etanol al 70%. No moje un área amplia de pelaje con alcohol para evitar la hipotermia. Con unas tijeras, realice una laparotomía de la línea media. Haga una incisión horizontal en el medio del abdomen y exponga el peritoneo, teniendo cuidado de no lesionar los órganos intraabdominales.

Coloque una gasa de algodón húmeda precortada sobre la cavidad intraabdominal expuesta. Use hisopos de algodón húmedos para movilizar y exteriorizar el ciego, y colóquelo con cuidado sobre una gasa de algodón húmeda. Luego, movilice y exteriorice suavemente el íleon. Despliega al menos 6 centímetros de íleon terminal sobre la gasa de algodón húmeda sin interrumpir los vasos mesentéricos y el suministro de sangre.

Mantenga los tejidos expuestos húmedos en todo momento con HBSS tibio. Identificar la arteria principal que irriga el íleon en el mesenterio cerca del ciego. Luego, ubique dos sitios de ligadura en el mesenterio que estén libres de vasos sanguíneos críticos. Agarre firmemente el íleon terminal con pinzas de tejido romo y use pinzas de punta fina para fenestrar el mesenterio, evitando los vasos sanguíneos.

Coloque una sutura de seda a través de la perforación y haga un nudo quirúrgico para crear la primera ligadura. Use la regla para medir a 4 centímetros de la primera ligadura y cree la segunda ligadura. Cortar cuidadosamente junto a cada ligadura con unas tijeras finas para aislar el asa ileal de 4 centímetros, manteniendo intacto el suministro de sangre y la membrana mesentérica.

Enjuague suavemente el contenido del segmento del asa ileal con HBSS tibio usando un tubo de alimentación amarillo flexible conectado a una jeringa de 10 mililitros. Asegúrese de eliminar el contenido luminal de la cavidad abdominal para mantener limpio el sitio quirúrgico. Lite los dos extremos cortados del asa ileal enrojecida con sutura de seda.

Use una jeringa de 1 mililitro con una aguja de calibre 30 para inyectar lentamente 250 microlitros de reactivo, como FITC-dextranos o quimiocina en la luz intestinal. El asa ileal se inflará, provocando una distensión moderada de la mucosa.

Cierre la pared abdominal con un portaagujas, pinzas anatómicas y suturas de seda 3.0 no absorbibles con una aguja de corte inverso. Después de secar al animal para evitar la hipotermia, colóquelo en una cámara de anestesia con temperatura regulada durante el período de incubación.