Generación de un modelo de asa de colon proximal en ratón: un procedimiento quirúrgico para generar asa de colon proximal y medir la permeabilidad intestinal mediante la detección de marcadores fluorescentes en suero después de la inyección intraluminal

Durante las condiciones patológicas, la alteración de la barrera de unión estrecha epitelial intestinal provoca una mayor penetración de contenidos luminales nocivos en la circulación sistémica, lo que resulta en un aumento de la inflamación sistémica.

Para evaluar la permeabilidad intestinal generando un asa de colon proximal intestinal o un modelo pcLoop, prepare un ratón anestesiado en posición supina. Realice una incisión abdominal en la línea media. Exteriorizar suavemente el ciego, el íleon terminal y el colon proximal, colocado sobre una gasa húmeda para mantener la hidratación de los órganos.

Localice el mesocolon del colon proximal, pliegues membranosos del peritoneo que contienen vasos sanguíneos. Identificar dos sitios adecuadamente separados en el mesocolon libres de vasos sanguíneos, distal del ciego, para ser ligados. Perforar los sitios.

Creando la ligadura en los sitios seleccionados, haga incisiones cerca de los sitios ligados para aislar un segmento pcLoop sin alterar el suministro de sangre. Enjuague el segmento con tampón para eliminar cualquier materia fecal.

Ate quirúrgicamente los extremos cortados del segmento enrojecido. Inyecte la solución de marcador fluorescente deseada en la luz del segmento del colon. Regrese los órganos a la cavidad abdominal. Cierre la incisión quirúrgica y deje que el ratón se recupere.

Después de la inyección, la integridad reducida de la barrera intestinal facilita un mayor transporte paracelular de las moléculas marcadoras fluorescentes desde la luz intestinal a la circulación sanguínea, que se puede detectar en la fracción sérica de la sangre para medir la permeabilidad intestinal.

Prepare el ratón para la cirugía y exteriorice el ciego. Con hisopos de algodón húmedos, exteriorice todo el íleon y colóquelo encima de una gasa de algodón húmeda. Identificar el colon proximal en el suministro de sangre ubicado en el mesocolon. Movilizar el colon proximal y crear la primera ligadura en un área libre de vasos en el mesocolon, a unos 0,5 centímetros distales del ciego.

Mida 2 centímetros desde la primera ligadura y cree una segunda ligadura en un área libre de suministro de sangre en el mesocolon. Con unas tijeras finas, corte con cuidado al lado de cada ligadura para aislar un pcLoop de 2 centímetros de largo.

Enjuague suavemente el pcLoop con HBSS tibio para eliminar las heces usando un tubo de alimentación amarillo flexible conectado a una jeringa de 10 mililitros. Asegúrese de eliminar el contenido luminal de la cavidad abdominal para mantener limpio el sitio quirúrgico. Luego, liga los dos extremos cortados del pcLoop enjuagado con una sutura de seda.

Use una jeringa de 1 mililitro con una aguja de calibre 30 para inyectar lentamente 200 microlitros de reactivo como FITC-dextranos o quimiocina en la luz intestinal. El pcLoop se inflará, provocando una distensión moderada de la mucosa. Use hisopos de algodón húmedos para volver a colocar suavemente el pcLoop, el íleon y el ciego ligados. Cierre la pared abdominal con un portaagujas, pinzas anatómicas y suturas de seda 3.0 no absorbibles con una aguja de corte inverso.