Enciclopedia de Experimentos de JoVE
Técnicas biológicas
0 visualizaciones • 4:21 min. • July 8th, 2025
La integrasa phiC31 es una enzima recombinasa derivada de fagos que cataliza la recombinación específica del sitio de un transgén, un gen extraño, en un genoma huésped. Para la integración transgénica en un huésped de Anopheles, comience con un embrión de Anopheles en un tampón adecuado.
El genoma de Anopheles está prediseñado con un sitio de unión para la integración de genes y un marcador cian-fluorescente para la selección visual. A continuación, agregue un pequeño volumen de plásmido donante que lleve la carga transgénica deseada, un sitio de unión, un marcador fluorescente rojo y componentes de la columna vertebral del plásmido a un vial. Luego, agregue un volumen óptimo de un plásmido auxiliar que lleve una integrasa que codifica genes. Ahora, cargue la mezcla de plásmidos en una microjeringa.
Inyecte suavemente los plásmidos en el polo posterior del embrión, el sitio de origen de las células germinales, lo que resulta en un ligero movimiento del citoplasma. Una vez dentro del embrión, el plásmido auxiliar comienza a sintetizar enzimas integrasas.
La enzima integrasa media la recombinación específica del sitio entre el plásmido donante y el genoma del huésped. Por lo tanto, e
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