Transformación de genes basada en vectores cromosómicos artificiales bacterianos binarios en plantas de Arabidopsis: una técnica para generar plantas transgénicas con inserción de una sola copia

Comience con plantas de Arabidopsis con cabezas de flores inmaduras. Sumerja las cabezas de las flores en la suspensión celular de Agrobacterium que lleva ADN-T clonado con cromosoma artificial bacteriano binario o BIBAC, un vector que se replica en los sistemas E. coli y Agrobacterium. Este vector binario de ADN-T puede administrar transgenes grandes, como genes de resistencia a herbicidas y marcadores seleccionables fluorescentes a lo largo de un promotor específico de semillas.

Mientras las cabezas de las flores aún están sumergidas, agite suavemente las plantas para mejorar su contacto con Agrobacterium. Con su capacidad inherente para infectar plantas, Agrobacterium transfiere el transgén a la célula floral. A medida que el transgén ingresa a la célula, se mueve hacia el núcleo y se fusiona con el genoma de la planta.

Ahora, envuelva la planta en film transparente e incube en la oscuridad para retener la humedad y mejorar la transformación. Retire la película y cultive las plantas en condiciones fisiológicas hasta que produzcan semillas.

A continuación, coseche las semillas y observe bajo un microscopio de fluorescencia para seleccionar los transformadores. Ahora, cultive las